Exploration du mécanisme de la formule Cistanche régulant la pyroptose médiée par l'inflammatoire NLRP3 dans le traitement de la prostatite chronique
Jun 05, 2025
Objectif:
Cette étude visait à étudier lamécanisme par lequel une formule à base de plantes à base de Cistancherégule l'activation duInflammasome NLRP3et inhibepyroptosedans le traitement deProstatite chronique de type III (CP/CPPS).
Méthodes :
(1) Expérience animale :
Cinquante rats SD mâles ont été répartis au hasard en cinq groupes : groupes témoins, modèles et traités avec la formule Cistanche àfaible (4,9 g/kg), moyen (9,8 g/kg) et élevé (19,6 g/kg)doses, avec 10 rats dans chaque groupe. À l'exception du groupe témoin, tous les rats ont été induits avecProstatite de type IIIvia une injection intraprostatique d'extrait de protéine prostatique associé à du CFA. Après une modélisation réussie, les rats ont reçu une administration intragastrique quotidienne soit de solution saline normale (groupes témoin et modèle), soit du sérum physiologique.Formule à base de cistanchependant 30 jours.
L'inflammation du tissu prostatique a été évaluée parColoration à l'hématoxyline-éosine (HE). SérumIL-1etIL-18ont été mesurés parELISA, tandis que les marqueurs du stress oxydatif (MDA, GAZON, etGSH-Px) ont été évalués biochimiquement.Expression NLRP3dans le tissu prostatique a été détecté parimmunohistochimie, etNiveaux de protéines NLRP3, Caspase-1 et GSDMDont été analysés à l'aideWestern blot.
(2) Expérience cellulaire :
Cellules épithéliales de la prostate humaine (RWPE-1)ont été divisés en contrôle, modèle,Formule Cistanche, etInhibiteur de NLRP3 (MCC950)groupes. À l'exception du groupe témoin, toutes les cellules ont été stimulées avecLPS (100 ng/mL, 4 heures)etATP (5 mmol/mL, 30 minutes)pour induire la pyroptose. Après modélisation, les groupes témoin et modèle ont reçu du sérum vierge, tandis que lesGroupe Cistanchereçu6,25 ug/mL de sérum contenant le médicament. Le groupe inhibiteur a été traité avecMCC950.
Adoption de l'IPetExpression de la caspase-1ont été évalués viacytométrie en flux. Libération LDHa été mesurée biochimiquement.Niveaux de surnageant IL-1 et IL-18ont été quantifiés par ELISA.Western blota été utilisé pour détecterNLRP3, Caspase-1 et GSDMDexpression.
Résultats:
(1) Expérience sur les animaux :
Comparé au groupe témoin, le groupe modèle présentait une infiltration cellulaire inflammatoire significative, une dégénérescence épithéliale et un œdème interstitiel dans le tissu prostatique. LeGroupes traités à la cistancheont montré des réductions dose-dépendantes de ces changements pathologiques.
Niveaux sériques IL-1 et IL-18étaient significativement augmentés dans le groupe modèle (P<0.01) et a considérablement diminué dans leGroupes de Cistanche à dose faible, moyenne et élevée (P<0.01).
Niveaux de MDAétaient élevés dans le groupe modèle (P<0.01) mais significativement réduit par le traitement Cistanche (P<0.01).
Niveaux de SOD et GSH-Pxont diminué dans le groupe modèle (P<0.05) et a augmenté de manière significative dans tous les groupes traités au Cistanche (P<0.01, P<0.05).
Immunohistochimiea montré une élévationExpression NLRP3dans le groupe modèle, qui a été considérablement réduit par le traitement Cistanche.
Western blotles résultats ont révélé une augmentation des niveaux de protéines deNLRP3, Caspase-1 et GSDMDdans le groupe modèle (P<0.01), qui ont tous été significativement inhibés par Cistanche (P<0.01).
(2) Expérience cellulaire :
LeTaux d'absorption de l'IP, Expression de la caspase-1, etLibération LDHétaient significativement augmentés dans le groupe modèle (P<0.01), mais significativement réduit dans les deuxCistancheetMCC950groupes (P<0.01).
Niveaux IL-1 et IL-18dans le surnageant étaient significativement élevées dans le groupe modèle (P<0.01) et a considérablement diminué dans leCistancheetgroupes inhibiteurs (P<0.01).
Western blotont montré une expression significativement accrue des protéines NLRP3, Caspase-1 et GSDMD dans le groupe modèle (P<0.01), qui ont été considérablement régulées à la baisse dans leCistancheetgroupes inhibiteurs (P<0.01).
Conclusion:
LeFormule à base de plantes à base de cistancheexerce des effets thérapeutiques surProstatite chronique de type IIIparinhiber l'activation de l'inflammasome NLRP3, réduisant ainsiActivation de la caspase-1, empêchantClivage GSDMD et pyroptose, et en supprimantlibération de cytokines pro-inflammatoires. Ces résultats suggèrent queCistanchepeut être prometteurremède naturel à base de plantes pour CP/CPPS, offrantanti-inflammatoire, antioxydant, etinhibiteur de la pyroptoseeffets via la modulation duNLRP3/Caspase-1/GSDMDvoie de signalisation.
mots-clés : prostatite chronique; Formule Guihuang ;Inflammatome NLRP3; pyroptose ; mort cellulaire programmée
cistanche bénéficie de la santé de la prostate
Formule à base de plantes à base de cistanche pour la prostatite chronique : étude expérimentale du mécanisme et de l'efficacité
Prostatite chronique (PC)est l'une des affections les plus courantes en urologie et en santé masculine. Les études épidémiologiques montrent qu'environ8.4%des hommes adultes en Chine présentent des symptômes de prostatite [1]. Selon leInstituts nationaux de la santé (NIH)classification, la prostatite est classée en quatre types, avecProstatite de type III (syndrome de douleur pelvienne chronique, CP/CPPS)représentant plus de90%de tous les cas chroniques [2]. La prostatite de type III entraîne des douleurs pelviennes et un dysfonctionnement urinaire et s'accompagne souvent de détresse psychologique telle que l'anxiété et la dépression, altérant considérablement la qualité de vie [3-4].
En médecine traditionnelle chinoise (MTC), la prostatite chronique correspond à des syndromes tels que le « syndrome de Lin » ou « Jing Zhuo », et est principalement causée par des facteurs pathogènes commehumidité, chaleur, stase du sang et stagnation[5-7]. LeFormule Guihuang, traditionnellement utilisé pour traiter les CP/CPPS avec chaleur humide et stase sanguine, a été modifié dans cette étude pour utiliserCistanchecomme élément central, formant un romanFormule à base de plantes à base de cistanche. Cette formule modifiée vise à améliorer les symptômes urinaires et l'inflammation pelvienne à la foisefficacité clinique et sécurité [8–10].
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Contexte et mécanisme
Nos études précédentes ont démontré que la formule à base de plantes à base de Cistanche atténuait de manière significative les lésions de type prostatite chez des modèles de rats en réduisant l'inflammation pathologique et en supprimant les cytokines pro-inflammatoires. Cet effet est associé à l'inhibition dePI3KetNF-κBvoies de signalisation [11].
Une attention accrue a été portée surInflammasome NLRP3, un complexe multiprotéique qui régule les réponses inflammatoires. L'activation de l'inflammasome NLRP3 conduit à la libération de cytokines inflammatoires telles que IL-1 et IL-18, contribuant à la cascade inflammatoire dans la CP/CPPS (12-13). Enquêtant sur la question de savoir siCistanchepeut moduler l’activation de l’inflammasome NLRP3 est crucial pour comprendre sonmécanisme anti-inflammatoiredans le traitement de la prostatite chronique.
1. Matériaux
1.1 Animaux et cellules
Des rats SD mâles (âgés de 6 semaines, 240 à 260 g) ont été obtenus auprès de SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. [SCXK (Jing) 2019-0010], hébergés dans des conditions SPF avec libre accès à la nourriture et à l'eau. La température ambiante a été maintenue à (23 ± 2) degrés et l'humidité à (60 ± 5) %. Toutes les procédures animales ont été approuvées par le comité d’éthique animale de l’hôpital Xiyuan, Académie chinoise des sciences médicales chinoises (numéro d’éthique : 2020XLC005-3). cellules épithéliales normales de la prostate (RWPE-1, ATCC, n° de catalogue IM-H299) ont été utilisés pour des expériences in vitro au passage 5.
1.2 Formule à base de plantes
LeFormule à base de cistanchese compose des herbes traditionnelles suivantes (en grammes) :
Cistanche 12 g
Curcuma longa (Curcuma) 10 g
Angélique sinensis 12 g
Magnolia officinalis 10 g
Boswellia carteri (Encens) 5 g
Commiphora myrrha (Myrrhe) 5 g
Lonicera japonica (Chèvrefeuille) 15 g
Hedyotis diffusa 15 g
Plantago asiatica (herbe plantain) 15 g
Citrus reticulata (écorce de mandarine) 10 g
Les granules à base de plantes ont été fournis par le service de pharmacie de l'hôpital de Xiyuan et fabriqués par Kangrentang Pharmaceutical Co., Ltd. (numéro de lot : 19018391).
Mots-clés SEO :
Cistanche pour la prostatite chronique, remède à base de plantes pour le CPPS, MTC pour le syndrome de douleur pelvienne, Inflammation de la prostate, herbes anti-inflammatoires naturelles pour hommes, Modulation immunitaire de Cistanche.
1.3 Réactifs et kits
Kit de dosage de protéines BCA (Beyotime, Cat# P0010)
Kits ELISA IL-1 et IL-18 (Bioswamp, Cat# ZN2877, ZN2883)
Kit de test de pyroptose/caspase-1 (immunochimie, Cat# 9145)
Anticorps NLRP3 (Novus, Cat# NBP2-12446)
CFA (Adjuvant complet de Freund, Sigma, Cat# C104202)
Réactifs courants : Xylène, éthanol absolu, gomme neutre (Sinopharm)
Kits de stress oxydatif : SOD, MDA, GSH-Px, LDH (Nanjing Jiancheng, Cat# A001-3, A003-2, BC1190, 20121225)
Anticorps : Anti-GSDMD, Caspase-1, GAPDH (Abcam, Cat# ab219800, ab179515, ab8245)
MCC950 (inhibiteur NLRP3, Selleck, Cat# S8930)
Anticorps PYCARD/ASC (Thermo, Cat# PA5-95826)
1.4 Instruments
Microscope optique (Nikon Eclipse Ti-SR, Japon)
Microtome (Leica RM2016, Shanghai)
Scanner de diapositives numérique (3D HISTECH Pannoramic MIDI, Hongrie)
Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse (Thermo Fisher IECCL31R, USA)
Équipement d'électrophorèse (CAVOY PP-1150, MP-8001, MP-3030, Pékin)
Incubateur shaker (Qilinbeier TS-2000A, Jiangsu)
Broyeur cryogénique (Jingxin JXFSTPRP-CL-BSC, Shanghai)
Incubateur à CO₂ (Sanyo MCO-20AIC, Japon)
Lecteur de microplaques (Bio-Rad DNM-9602, Pékin)
Analyseur biochimique (Rayto Chemray 800, Shenzhen)
Cytomètre en flux (Beckman CytoFLEX S, USA)
2. Méthodes
2.1 Établissement du modèle
(1) Modèle animal
Basé sur une expérience de modélisation antérieure, un modèle de rat deProstatite chronique de type IIIa été établi parinjection intraprostatiqued'extrait de protéine de prostate purifiée mélangé à de l'adjuvant complet de Freund (CFA) [14]. Une modélisation réussie a été déterminée par des caractéristiques pathologiques, notamment : épaississement de la capsule prostatique, disparition des plis glandulaires, destruction des acini, œdème stromal important, structure floue, infiltration massive de lymphocytes, de monocytes et de plasmocytes. Des cellules musculaires lisses et une hyperplasie du tissu conjonctif ont été observées dans les septa prostatiques, avec desdilatation et congestion vasculaires. Biochimiquement, le modèle a été confirmé paraugmentation des leucocytesetdiminution des corps de lécithinedans l'homogénat de prostate.
(2) Modèle de cellule
Suite aux rapports de la littérature et aux pré-expériences antérieures [15–17], unméthode de stimulation en deux étapesa été utilisé pour activer leInflammasome NLRP3dans RWPE-1 cellules. Étape 1 : Les cellules ont été traitées avecLPS (100 ng/ml)pendant 4 heures pour initier l’amorçage de l’inflammasome. Étape 2 : Les cellules ont ensuite été traitées avecATP (5 mmol/mL)pendant 30 minutes comme signal d'activation. Les conditions optimales du modèle ont été examinées à l'aide deTaux d'absorption de l'IPcomme marqueur.
2.2 Regroupement
(1) Groupes d'étude sur les animaux
Les rats ont été répartis au hasard encinq groupesen utilisant une table de nombres aléatoires :
Groupe témoin
Groupe modèle
Groupe Cistanche formule faible dose
Formule Cistanche groupe à dose moyenne
Groupe à haute dose de formule Cistanche
Chaque groupe était composé de 10 rats. Tous les groupes, à l'exception du groupe témoin, ont été soumis à une modélisation. Ledose humaine équivalentede la formule basée sur Cistanche a été calculée comme suit : 109 ÷ 70 × 6.3=9.8 g/kg pour ledose moyenne, avecfaible doseà 4,9 g/kg etdose élevéeà 19,6 g/kg [11]. Depuisjour 3 post-modélisation, les groupes de traitement ont reçu une administration intragastrique quotidienne des doses respectives duFormule à base de plantes à base de cistanchepour30 jours consécutifs, tandis que les groupes témoins et modèles recevaient des volumes égaux de solution saline.
(2) Groupes d'étude sur les cellules
RWPE-1 cellules ont été divisées en quatre groupes :
Groupe témoin: cultivé avec du sérum blanc
Groupe modèle: traité avec du LPS (100 ng/mL, 4 h) et de l'ATP (5 mmol/mL, 30 min)
Groupe Cistanche: traité avec6,25 ug/mL de sérum médicamenteux formule Cistanche
Groupe MCC950: modèle +Inhibiteur de l'inflammasome NLRP3 MCC950
2.3 Prélèvement d'échantillons
Après 30 jours de traitement, les rats ont été anesthésiés à l'isoflurane. Le sang a été prélevé de l'aorte abdominale et centrifugé à 3 000 tr/min pendant 10 minutes pour isoler le sérum, qui a été conservé à -80 degrés pendantELISAet analyses biochimiques.
Lobe gauche de la prostate: fixé dans du paraformaldéhyde à 4% pour l'histopathologie, l'immunohistochimie et l'immunofluorescence.
Lobe prostatique droit: conservé dansazote liquidepourAnalyse par Western Blot.
2.4 Détection de l'indice animal
2.4.1 Coloration HE
La coloration à l'hématoxyline et à l'éosine (HE) a été utilisée pour observer une infiltration inflammatoire dans les tissus de la prostate. Les changements morphologiques dans les glandes, les conduits et les structures interstitielles ont été évalués au microscope optique.
2.4.2 ELISA pour IL-1 et IL-18
Des kits ELISA ont été utilisés pour quantifierIL-1etIL-18niveaux dans le sérum de rat. Les échantillons ont été traités selon le protocole ELISA standard et analysés à450 nmà l'aide d'un lecteur de microplaques.
2.4.3 Détection biochimique du MDA, SOD, GSH-Px
Niveaux sériques deMDA, GAZON, etGSH-Pxont été mesurés à l’aide de kits commerciaux pour évaluer le stress oxydatif dans les tissus de la prostate.
2.4.4 Immunohistochimie (IHC) pour NLRP3
Des coupes de tissus prostatiques ont subi une déparaffinisation, une récupération de l'antigène, un blocage et une incubation avecanticorps anti-NLRP3 (1:1000). La coloration DAB a été réalisée et contre-colorée avec de l'hématoxyline. L'expression de NLRP3 a été observée au microscope.
2.4.5 Immunofluorescence pour le GSDMD
Des coupes de prostate congelées ont été incubées avecanticorps anti-GSDMD (1:100), suivi d'un anticorps secondaire fluorescent et d'un contre-colorant nucléaire DAPI. L'expression du GSDMD a été visualisée par microscopie à fluorescence.
2.4.6 Western Blot for NLRP3, Caspase-1, GSDMD
Les protéines ont été extraites des tissus de la prostate pourAnalyse par Western Blot. Niveaux d'expression deNLRP3 (1:1000), GSDMD (1:2000), etCaspase-1 (1:2000)ont été détectés. -l'actine a servi de contrôle interne. La quantification a été réalisée en utilisantImageJlogiciel.
2.5 Détection de l'index cellulaire
2.5.1 Cytométrie en flux pour l'absorption de PI
Les cellules ont été lavées, remises en suspension à raison de 1 x 10⁶ cellules/mL et colorées avec de l'iodure de propidium (PI). Les taux d'absorption des IP ont été analysés à l'aidecytométrie en fluxetFluxJologiciel.
2.5.2 Test de libération de LDH
Après le traitement,LDHles niveaux dans les surnageants de culture ont été évalués comme marqueur des dommages à la membrane cellulaire à l'aide d'un test colorimétrique à490 nm.
2.5.3 Cytométrie en flux pour la Caspase-1
Les cellules ont été fixées, perméabilisées et colorées avecAnticorps caspase-1 (1:1000). L'expression a été mesurée parcytométrie en flux.
2.5.4 ELISA pour IL-1 et IL-18 dans le surnageant
Des milieux de culture ont été collectés pour détecterIL-1etIL-18niveaux via ELISA. La teneur en protéines dans les lysats cellulaires a été quantifiée à l'aide du test BCA pour normaliser les niveaux de cytokines.
2.5.5 Western Blot pour NLRP3, Caspase-1, GSDMD
Le Western blot a été réalisé sur des lysats cellulaires contenant des anticorps contreNLRP3 (1:1000), GSDMD (1:2000), etCaspase-1 (1:2000). La détection a été effectuée à l'aide d'ECL et des systèmes d'imagerie . -actine ont été utilisés comme contrôle de chargement.
2.6 Analyse statistique
Les données ont été analysées à l'aideGraphPad Prisme 8.0. Les résultats sont exprimés sous la formemoyenne ± ET. Des comparaisons de groupes ont été effectuées en utilisanttests t sur échantillons indépendantsouANOVA unidirectionnelle. A Valeur P < 0,05a été considérée comme statistiquement significative.
