2 Méthodes d'essai

2.1 Analyse pharmacologique en réseau

2.1.1 Principes actifs de Cistanche deserticola

Sur la base des études existantes [7, 22], "Echinacoside", "Verbascoside", "Cistanoside A", "Tubuloside A", "Isoactéoside", "2-Acétylactéoside" et "Tubuloside B" ont été sélectionnés comme composants bioactifs pour l'analyse. Recherchez les données de structure chimique tridimensionnelle des sept ingrédients ci-dessus via Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) et enregistrez-les au format sdf.

2.1.2 Prédiction et dépistage des cibles potentielles

Importez les fichiers de structure tridimensionnelle duprincipes actifs dans la base de données PharmMapper(http://lilab-ecus.cn/pharmmapper/index.html). Sélectionnez « Cibles protéiques humaines uniquement » comme espèce cible et conservez les autres options par défaut pour obtenir les données correspondantes des différents ingrédients. Cible cible correspondante.

La base de données UniProt (https://www.uniprot.org/) a été utilisée pour obtenir les informations sur le nom de la protéine et le nom du gène correspondant à chaque cible. Fusionnez les points cibles correspondant aux 7 composantes.

Dans la base de données GeneCards (https://www.genecards.org/), utilisez « maladie inflammatoire de l’intestin » comme mot-clé pour rechercher des gènes liés à la maladie inflammatoire de l’intestin et organisez les résultats de la recherche.

Supplément Cistanche Supplément de soutien anti-inflammatoire PhGs75% Ech 30% Act 12%

2.1.3 Interaction protéine-protéine (IPP)

Construction du réseau Utilisez jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) pour tracer un diagramme de Venn en ligne afin d'obtenir l'intersection des cibles de principe actif Cistanche deserticola et des cibles IBD. Téléchargez les cibles d’intersection obtenues dans la base de données String pour l’analyse de dépistage PPI. Téléchargez le fichier TSV du réseau PPI, importez-le dans Cytoscape 3.8.0, calculez la valeur du degré du réseau d'interaction protéique, puis embellissez le diagramme du réseau PPI en fonction de la valeur du degré.

2.1.4 Ontologie des gènes (GO)

L'enrichissement fonctionnel et l'analyse de l'enrichissement de la voie de l'Encyclopédie de Kyoto des gènes et des génomes (KEGG) ont été réalisés à l'aide de la base de données DAVID (//david.ncifcrf.gov/) pour identifier les cibles des effets protecteurs des ingrédients actifs de Cistanche deserticola sur les MII. Une analyse GO a été réalisée sur les points, puis la base de données DAVID a été utilisée pour effectuer une analyse d'enrichissement de la voie KEGG sur les cibles où les principes actifs de Cistanche deserticola jouent un rôle protecteur dans les MII.

2.1.5 Construction du réseau « principe actif-cible-voie » de Cistanche deserticola

Les ingrédients actifs de Cistanche deserticola, les cibles d'intersection des ingrédients actifs de Cistanche deserticola et de l'IBD et les voies enrichies par KEGG ont été utilisés pour construire un réseau ingrédient actif-cible-voie.

2.2 Validation du modèle animal

2.2.1 Etablissement d'un modèle animal

Des souris BALB/c mâles de qualité SPF (5 à 8 semaines, 18 à 21 g) ont été utilisées, fournies par le Centre d'essais d'aliments naturels de l'École des arts et des sciences appliqués, Université de l'Union de Pékin [Numéro de licence d'utilisation d'animaux expérimentaux : SYXK (Beijing ) 2017-0038], ils ont été conservés dans une salle pour animaux de qualité SPF avec une température de (23 ± 2) degrés, une humidité relative de 50 % à 70 % et 12 h d'exposition à une lumière fluorescente alternant jour et nuit. . Les protocoles d'expérimentation animale ont tous été approuvés par le laboratoire animalier du centre d'essais d'aliments naturels de l'école des arts et des sciences appliqués de l'université de l'Union de Pékin. Après une alimentation adaptative pendant 3 jours, 20 souris ont été réparties au hasard en 4 groupes en fonction de leur poids corporel, avec 5 souris dans chaque groupe. ①Groupe témoin (CZ) : boire librement de l'eau stérile et gaver de l'eau stérile pendant 7 jours consécutifs ; ②Groupe de contrôle DSS

(DZ) : Libre de boire une solution DSS à 3 % préparée quotidiennement pendant 7 jours consécutifs ; ③ Groupe à faible dose de glycosides totaux de Cistanche deserticola (LZ) (concentration liquide : 0,1 g/mL) : libre de boire une solution de DSS à 3 % préparée quotidiennement pendant 7 jours ; , liquide de gavage pendant 7 jours consécutifs ; ④ Groupe à forte dose de glycosides totaux de Cistanche deserticola (HZ) (concentration liquide 0,4 g/

mL) : Boire quotidiennement librement la solution à 3 % de DSS fraîchement préparée et administrer la solution par gavage pendant 7 jours consécutifs. Après 7 jours de modelage continu, ils ont été mis à jeun pendant 12 heures puis sacrifiés par luxation cervicale. Des globules rouges de poulet ont été injectés par voie intrapéritonéale 4 heures avant l'exécution. Immédiatement après l'exécution, les globes oculaires ont été retirés pour recueillir du sang. Le liquide péritonéal a été extrait et la cavité abdominale a été ouverte. La longueur du côlon a été mesurée et la rate de la souris, le nœud de Peyer et d'autres organes ont été prélevés.

Supplément Cistanche Supplément de soutien anti-inflammatoire

2.2.2 Indice d'activité de la maladie (DAI)

Les souris ont été pesées avant l'administration intragastrique à une heure fixe chaque jour, et l'état mental et les propriétés fécales des souris ont été observés. Le sang occulte fécal a été mesuré et noté en conséquence. Les normes de notation sont présentées dans le tableau 1. Score DAI=(score de poids corporel + score de caractère fécal + score de sang occulte fécal)/3 (1)

Tableau 1 Critères de notation du DAI

2.2.3 Détection par PCR quantitative par fluorescence en temps réel Détection de la voie du signal immunitaire (qRT-PCR)

Les rate de souris ont été collectées, coupées en blocs de tissu de 0,5 cm et trempées dans une solution de stabilisation de l'ARN tissulaire pour être stockées. Retirez le tissu et coupez-le en morceaux, ajoutez une solution d’extraction d’ARN et broyez-le en morceaux pour extraire l’ARN total. Après transcription inverse et amplification PCR, l'activation de deux voies de signalisation immunitaire clés, mTOR et TGF-, dans la rate de souris a été détectée. Les séquences d'amorces utilisées dans qRT-PCR sont présentées dans le tableau 2.

Tableau 2 Tableau de séquence d'amorces