Évaluation approfondie de la Salvia Haenkei en tant que stratégie innovante pour lutter contre le photo-vieillissement de la peau et restaurer l'intégrité de la barrière

S'il vous plaît contactezoscar.xiao@wecistanche.compour plus d'informations

abstrait:La peau est la barrière essentielle du corps humain qui remplit de multiples fonctions. Les facteurs endogènes, de concert avec les agressions extérieures, affectent en permanence l'intégrité de la peau, entraînant des modifications structurelles distinctes qui influencent non seulement l'apparence de la peau mais également ses différentes fonctions physiologiques. Les altérations des fonctions barrières entraînent un risque accru de développer des maladies et des réactions secondaires, d'où l'importance de maintenir l'intégrité de la barrière épidermique et de ralentir le processus de vieillissement cutané.croissance du pénis cistancheLa Salvia Hankie (SH) a été récemment identifiée comme un agent anti-sénescence potentiel ; son extrait est capable de diminuer le niveau de cellules sénescentes en affectant la libération de ll.1a et en réduisant la génération d'espèces réactives de l'oxygène (ROS). Dans cette étude, l'extrait de SH a été testé sur une lignée cellulaire de kératinocytes humains (HaCaT) exposée à des facteurs de stress liés au vieillissement prématuré des cellules tels que les radicaux libres et les rayons ultraviolets B. Nous avons confirmé que SH agit comme un piégeur de ROS et avons trouvé sa capacité à restaurer l'intégrité de la barrière cutanée en renforçant la structure du cytosquelette, en scellant les jonctions serrées et en augmentant le taux de migration des cellules. Compte tenu de ces résultats, ce travail devient pertinent, identifiant la Salvia Hankie comme un composé utile pour le traitement anti-âge de la peau en performance clinique.

Veuillez cliquer ici pour en savoir plus

Introduction

Une peau saine et fonctionnelle est essentielle pour protéger la déshydratation et la pénétration de divers contre 100 %, les micro-organismes, les allergènes, les irritants et les radiations. L'exposition quotidienne à des agents extrinsèques combinée à certains facteurs intrinsèques, tels que la génétique, le métabolisme cellulaire, les processus hormonaux et métaboliques, conduit au vieillissement naturel de la peau [1]. En particulier, le phénomène de vieillissement cutané est fortement lié au rayonnement ultraviolet, à la pollution, à l'utilisation répétitive des muscles et à la gravité [2, 3]. Le vieillissement cutané résulte donc d'altérations structurelles et physiologiques cumulatives et d'une modulation progressive des couches cutanées [2, 4, 5]. Même si le vieillissement n'est pas considéré comme une condition pathologique, mais plutôt comme un processus biologique et inéluctable, sa corrélation avec diverses maladies de la peau est désormais bien établie. Considérant que les maladies cutanées liées à l'âge les plus pertinentes sont les maladies dégénératives, les tumeurs bénignes et malignes, etc., l'importance des soins de la peau pour traiter ou prévenir certains troubles cutanés est évidente.[6-8]. De nos jours, les stratégies anti-âge cutanées agissent pour inverser les signes dermiques et épidermiques du vieillissement photo/chronologique. Selon leurs approches, ils peuvent être classés comme suit : soins cosmétologiques, agents topiques, procédures invasives, agents systémiques, prévention des facteurs exogènes du vieillissement, correction du mode de vie et des habitudes et médecine préventive [9]. Il existe deux principaux groupes d'agents pouvant être utilisés comme composants de formulations anti-âge : 1. Les régulateurs cellulaires, tels que le rétinol, les peptides et les facteurs de croissance, agissant directement sur le métabolisme et la production de collagène ; 2. Les antioxydants, comme les vitamines, les polyphénols et les flavonoïdes, sont capables de réduire la dégradation du collagène [9].

Des preuves substantielles soutiennent l'idée que le vieillissement cutané est principalement provoqué par les ROS, générés au cours du métabolisme cellulaire oxydatif endogène [10,11]. On sait que l'accumulation de ROS est responsable des dommages cellulaires, notamment la peroxydation lipidique, les dommages aux protéines membranaires et la mutation de l'ADN qui entraînent des altérations structurelles et fonctionnelles de la peau. Au fil du temps, les cellules humaines sous-tendent une augmentation naturelle des niveaux de ROS, associée à une perte partielle des défenses antioxydantes. Cette condition inévitable est encore favorisée par l'irradiation quotidienne aux ultraviolets (UV) qui induit la synthèse des métalloprotéinases matricielles (MMP) et, par conséquent, la destruction du collagène médiée par les MMP [12, 13]. Des études in vivo ont démontré la relation causale entre les dommages oxydatifs mitochondriaux, la sénescence cellulaire et les phénotypes de vieillissement [10, 14].

La sénescence cellulaire est définie comme un arrêt stable de la croissance cellulaire qui se produit dans toutes les cellules humaines au cours du vieillissement [15-17]. À la suite d'événements stressants, tels que la surexpression d'oncogènes, la génération de ROS et les dommages à l'ADN (par exemple induits par les rayons UV, en particulier par la lumière UVB), les cellules peuvent devenir prématurément sénescentes [18].bienfaits de la salsa cistancheDans ce scénario, il apparaît évident l'importance de développer des stratégies innovantes capables de prévenir l'accumulation de cellules sénescentes ou de les tuer sélectivement, contrecarrant ainsi le vieillissement et les troubles associés au vieillissement. Récemment, nous avons identifié la Salvia hankie (SH), une plante bolivienne riche en vitamine B et aux propriétés antioxydantes, comme agent anti-sénescence potentiel [18].

L'accumulation de cellules sénescentes au fil du temps est bien connue pour être l'un des mécanismes les plus importants par lesquels les tissus subissent le processus de vieillissement, qui semble être principalement déclenché par la persistance d'un état inflammatoire typique. En effet, bien que les cellules sénescentes soient incapables de proliférer, elles possèdent une activité métabolique élevée et elles produisent efficacement plusieurs molécules pro-inflammatoires [19]. En utilisant un modèle de peau d'épiderme humain (EpiSkin), il a en effet été démontré que l'extrait de SH diminue les niveaux de cellules sénescentes en affectant la libération d'ILla et en réduisant la génération de ROS [18].

En conditions homéostatiques, la peau est une barrière efficace qui protège des agressions extérieures et des facteurs endogènes et régule la perte de fluides, d'électrolytes et de protéines. Cette tâche importante est principalement attribuée à l'épiderme, un épithélium dynamique et hautement stratifié. Les deux constituants majeurs de l'épiderme sont le stratum corneum, la couche externe, et les jonctions serrées (JT), jonctions intercellulaires qui scellent les kératinocytes adjacents dans le stratum granulosum [20]. Les adhérences cellule-cellule sont nécessaires pour maintenir l'intégrité de la barrière épidermique.dosage de cistanche tubulosa redditCette fonction importante est remplie par des jonctions cellule-cellule spécialisées : les jonctions adhérentes (AJ), les desmosomes et les jonctions serrées. Ces structures permettent non seulement des connexions physiques entre les cellules, mais organisent globalement les éléments du cytosquelette et modulent les voies de signalisation impliquées dans le développement, la structure et la physiologie des tissus. Des études génétiques récentes ont révélé de manière inattendue un rôle non canonique des protéines jonctionnelles, soulignant l'importance de la diaphonie jonctionnelle, des interdépendances et de la compensation pour permettre la robustesse des tissus [21].

Ici, nous avons étudié l'activité d'un extrait de Salvia haenkei pour comprendre le mécanisme moléculaire responsable de ses effets protecteurs sur le vieillissement photo/chronologique de la peau. Dans cette perspective, des kératinocytes humains spontanément immortalisés (HaCaT) ont été utilisés comme modèle in vitro, et le mécanisme d'action SH a été analysé sous un régime basal ainsi que dans des conditions stressantes induites par l'irradiation H202 et/ou UVB.

RÉSULTATS

Profil sûr de l'extrait de SH et propriétés anti-âge Le stress oxydatif de la peau joue un rôle majeur dans le processus de vieillissement et dans la pathogenèse de plusieurs affections cutanées [22]. Matic et al. ont déjà mis en évidence l'activité anti-sénescence de Salvia haenkei également corrélée à ses propriétés charognardes [18]. Ces effets protecteurs pourraient être exploités pour développer un nouveau traitement réparateur cutané capable de préserver l'intégrité de la barrière. Dans le but d'étudier en profondeur les propriétés SH, l'activité de l'extrait sur la viabilité cellulaire et la génération de ROS dans le modèle cellulaire HaCaT a d'abord été vérifiée.

Cistanche peut anti-âge

Le test de viabilité cellulaire a été réalisé pour traiter les effets cytotoxiques possibles de l'extrait de Salvia haenkei sur les kératinocytes. Les cellules HaCaT ont été traitées avec de l'extrait SH （0.01-10 ug/ml） pendant 24 et 48 heures. La viabilité cellulaire a été évaluée par le test d'exclusion au bleu Trypan. Les figures 1A et 1B montrent que le traitement avec l'extrait SH n'affecte pas la viabilité cellulaire confirmant le profil d'innocuité de l'extrait sur les cellules HaCaT dans les conditions expérimentales utilisées.

L'activité de l'extrait de Salvia haenkei sur la génération de ROS a été dosée dans des cellules HaCaT après 3-24 heures de traitement et avant et après l'exposition au H2O2.

Les résultats de la figure 2A montrent que SH est capable de réduire les niveaux basaux de ROS dans les cellules, en particulier pendant les 3-heures de traitement. Outre une augmentation significative des niveaux de ROS après stimulation H-Oz (figure 2C), SH est capable d'empêcher la production de ROS. L'extrait de SH (0.01 ug/ml) a réduit de manière significative (-25 pour cent) la génération de ROS induite par le stimulus oxydatif (Figure 2B), montrant un effet comparable au NAC après 3 heures de traitement. 24 heures de traitement SH semblent être une augmentation plus efficace contre les ROS, en réduisant significativement les niveaux de ROS à 1 et 10 ug/ml (Figure 2B). Ces résultats confirment Salvia haenkei

les effets antioxydants, comme observés précédemment [18], montrent un effet basal antioxydant déjà à partir de traitements courts ; l'effet de prévention de l'augmentation induite par le stimulus oxydatif est le plus pertinent pour les durées de traitement plus longues.

Il est rapporté que les rayonnements ultraviolets induisent une augmentation des niveaux intracellulaires de ROS dans la peau humaine, provoquant des dommages et un vieillissement prématuré et d'autres pathologies [23-25]. Par conséquent, l'effet de l'extrait de SH sur la production de ROS médiée par les UVB a été évalué. Comme prévu, les résultats de la figure 3C montrent une augmentation significative des niveaux de ROS intracellulaires après stimulation UVB. Le traitement avec SH, qui induit une tendance à réduire les niveaux basaux de ROS dans les cellules (figure 3A), est capable d'empêcher l'augmentation induite par la stimulation UVB (figure 3B). 3 heures de traitement SH induisent une tendance à réduire les niveaux de ROS ; un traitement SH plus long est plus efficace pour contrecarrer le stress oxydatif, montrant une diminution significative comme indiqué sur la figure 3A. Ces données soulignent l'activité antioxydante de Salvia haenkei également dans le stress oxydatif induit par les UVB.

Comme mentionné, de plus en plus de preuves suggèrent que les cellules sénescentes s'accumulent dans la peau chronologiquement et photo-vieillie, contribuant aux altérations et pathologies cutanées liées à l'âge [26]. L'effet de Salvia hankie a donc été évalué sur les marqueurs de sénescence p21 et p27 (qui empêchent la phosphorylation de la protéine du rétinoblastome (Rb) et avec une activité inhibitrice sur CDK2-cycline E, respectivement [27]) après un photo-stress induit par rayonnement ultraviolet. Les résultats de la figure 4 montrent que l'irradiation UVB induit une augmentation significative des niveaux d'ARNm p21 et p27 par rapport au contrôle non stimulé.cistanche แอ ม เว ย์Une tendance similaire dans la prévention de l'augmentation est observée dans les cellules traitées avec SH. SH 1 ug/ml induit une réduction significative des niveaux de p21 par rapport au contrôle stimulé par les UVB, tandis que les autres concentrations induisent une tendance à réduire (Figure 4A). Les niveaux de P27 sont considérablement réduits par un prétraitement avec SH 0.01,0,1 et 10 ug/ml (figure 4B).

Il est également établi que les cellules sénescentes affectent négativement le microenvironnement en sécrétant un mélange pro-inflammatoire de chimiokines, cytokines, hormones de croissance et protéases, connu sous le nom de phénotype sécrétoire associé à la sénescence (SASP) [28]. Les résultats de la figure 5 montrent que la stimulation UVB induit une augmentation significative des niveaux d'ARNm d'ILla (A), d'IL6 (B) et d'IL18 (C) par rapport au contrôle non stimulé. Le prétraitement avec SH présente une forte activité pour contrecarrer l'augmentation des niveaux de cytokines. Comme le montre la figure 5A, SH 1 0 ug/ml a significativement diminué les niveaux d'ILla ; l'augmentation de l'IL6 est significativement contrecarrée par SH 0.01,0.1 et 10 ug/ml (Figure 5B) tandis que toutes les concentrations testées sont capables de réduire de manière significative les niveaux d'IL18 (Figure 5C). Maintien de la barrière cutanée Compte tenu des résultats rapportés ci-dessus sur une lignée cellulaire épithéliale, l'effet de l'extrait SH sur plusieurs protéines et processus impliqués dans le maintien de la barrière cutanée et la réparation des lésions tissulaires a été évalué.

Expression de sirtuine-1

Plusieurs études in vitro ont rapporté que les rayonnements UVB induisent une diminution des niveaux de protéine Sirtuinl (SIRT1) des fibroblastes humains, indiquant l'implication de SIRT1 dans les dommages médiés par les UVB [29]. Ainsi, l'effet de l'extrait de Salvia haenkei sur l'expression de la protéine Sirtuinl a été évalué par un test de transfert Western (Figure 6). Comme prévu, la stimulation UVB a induit une diminution significative de l'expression de la protéine SIRTI dans les cellules HaCaT. L'activité de l'extrait de SH sur les niveaux de SIRT1 a donc été étudiée. Fait intéressant, les résultats montrent que 1 ug/ml d'extrait de SH, par rapport au témoin, a induit une augmentation de l'expression de SIRTl (plus 40 %) dans des conditions basales, indiquant un effet stimulant potentiel sur les niveaux de SIRT1. Comme prévu, la stimulation UVB induit une réduction significative des niveaux de SIRT1. Les résultats montrent que le prétraitement avec 0,01 ug/ml d'extrait de SH présente un effet d'amélioration des niveaux de sirtuine 1, par rapport au témoin traité aux UVB.

Test de cicatrisation

Les kératinocytes sont les principaux constituants de l'épiderme, constituant une barrière entre l'organisme et l'environnement. Par conséquent, leur prolifération et leur migration jouent un rôle clé dans le maintien d'une barrière efficace et dans la cicatrisation des plaies consécutives à des blessures [30, 31]. Ainsi, l'effet de SH sur la migration des cellules HaCaT a été évalué. Les images de la figure 7A montrent que le traitement avec SH conduit à une réduction de l'épaisseur de la rayure indiquant un effet sur la migration des cellules HaCaT. La figure 7B rapporte la construction du kymogramme de la vitesse de migration des cellules HaCaT ; les images montrent une augmentation concentration-dépendante de la migration cellulaire. Le graphique de la figure 7C indique une augmentation significative de la vitesse de migration cellulaire après 4-8 heures de traitement avec 0,01 ug/ml d'extrait de SH. L'augmentation maximale est atteinte dans l'intervalle 8-12 heures, où le taux dans les cellules de vitesse de migration cellulaire est d'environ 165 % par rapport au témoin. Ces données, comme les résultats obtenus sur la prolifération cellulaire, indiquent que la plus faible concentration d'extrait SH est capable d'induire une augmentation de la vitesse de migration cellulaire non liée à un phénotype hyperprolifératif.

Entretien des jonctions étanches

En plus de la couche cornée, les jonctions serrées (TJ) jouent un rôle important dans l'intégrité de la peau, agissant comme une barrière pour l'eau et les solutés, et étant impliquées dans la différenciation, la prolifération, la polarité cellulaire et les processus de transduction du signal des cellules. Des études récentes ont démontré que la lumière UV altère l'expression et la localisation de protéines uniques de structure TJ, ce qui perturbe à son tour la fonction barrière de la peau [32].

Afin d'évaluer l'effet de l'extrait de Salvia haenkei en tant qu'agent protecteur possible contre la perturbation des TJ, l'expression de l'occludine a été mesurée par immunocytochimie après exposition aux rayons UVB. Les images des figures 8A et 8B montrent que le traitement avec les deux concentrations de SH induit une augmentation de l'expression de la protéine occludine, favorisant la formation de jonctions utiles au maintien de l'intégrité de la barrière épidermique. Comme prévu, suite à une exposition aux rayons UVB, les cellules présentent un anneau membranaire irrégulier et non défini (figure 8A). Le traitement SH, en particulier à la concentration la plus élevée, préserve la morphologie de la membrane en maintenant la structure comparable au témoin non stimulé. L'extrait SH favorise le renforcement des jonctions et prévient les dommages induits par l'exposition aux UVB, en maintenant la fonctionnalité de la barrière cutanée.

Expression de la filaggrine

L'effet de l'extrait de Salvia haenkei sur l'expression de la protéine filaggrine (FLG) a été évalué par immunocytochimie. La filaggrine est une protéine structurelle fondamentale dans le développement et le maintien de la barrière cutanée. Les résultats des figures 9A et 9B montrent une augmentation dépendante de la concentration de l'expression de la protéine filaggrine après un traitement de 24 h avec l'extrait de SH. De plus, l'expression de la protéine F-actine indique une distribution régulière des cellules, suite au traitement avec SH, ce qui conduit à une continuité structurelle bien organisée de la barrière épithéliale. Ces données indiquent que SH a un impact bénéfique sur la barrière cutanée, améliorant l'expression de la filaggrine, essentielle à la formation et au fonctionnement corrects de la peau.

Expression de la métalloprotéinase

L'exposition cutanée aux rayonnements ultraviolets induit des altérations de la matrice extracellulaire (MEC) provoquant des rides, un relâchement et un relâchement cutané, caractéristiques majeures du vieillissement cutané. Les métalloprotéinases matricielles (MMP) sont les principaux responsables de la dégradation des composants de la MEC tels que le collagène, l'élastine, la fibronectine et les protéoglycanes [33].combien de cistanche prendreUn grand nombre d'études soulignent que l'exposition de la peau aux rayons UV induit une régulation positive de différentes MMP, impactant l'apparence et la santé de la peau [34-37].

Les résultats de la figure 10 montrent que le rayonnement UVB augmente l'expression de l'ARNm de la gélatinase MMP-2 qui dégrade les collagènes de la membrane basale et les collagènes structuraux dénaturés [38]. Le traitement avec SH est capable de réduire de manière significative les niveaux d'ARNm de MMP-2 (SH 0.01-0.1-10 ug/ml） indiquant l'activité de l'extrait de SH dans le maintien de l'intégrité structurelle du peau abîmée par le photo-stress.

DISCUSSION

Le vieillissement cutané est l'effet cumulatif de facteurs intrinsèques et extrinsèques qui conduisent à un déclin de la peau, induisant amincissement, raideur et perte de souplesse. La peau est la première barrière entre l'organisme et l'environnement, le maintien de son intégrité fonctionnelle et anatomique est donc essentiel. Outre les processus naturels de vieillissement et les conditions liées au vieillissement telles que le diabète, la ménopause, etc., des facteurs extrinsèques peuvent concourir à affecter la structure de la peau ; en particulier, les photodommages, la pollution ou les facteurs liés au mode de vie (tabagisme, alimentation, stress émotionnel, etc.) peuvent entraver la structure et les fonctions de la peau [39,40]. Les kératinocytes sont les principaux constituants de l'épiderme, fournissant la base cellulaire de la barrière la plus externe ; dans ce travail, la lignée cellulaire de kératinocytes humains HaCaT a été exposée à des facteurs de stress, tels que les radicaux libres et les rayons ultraviolets B, afin de mimer le vieillissement naturel de la peau, altérant ainsi la fonction barrière. La Salvia Hankie a été récemment identifiée comme un agent anti-sénescence potentiel suggérant son application possible dans le vieillissement cutané et les troubles liés au vieillissement cutané ; par conséquent, l'effet d'un extrait de cette plante a été étudié en profondeur sur les paramètres liés au vieillissement cutané, au maintien de l'intégrité de la peau et aux conditions physiologiques. On pense que la production d'espèces réactives de l'oxygène ou de radicaux libres par des processus métaboliques endogènes normaux ou par les rayons UV et la pollution contribue aux processus de vieillissement cutané. La peau est vulnérable à diverses réactions redox, et l'équilibre redox est essentiel au maintien de l'homéostasie cutanée. De faibles concentrations de ROS exercent des activités physiologiques, mais des niveaux accrus de ces espèces sont impliqués dans l'activation de voies entraînant une dégradation accrue du collagène, une accumulation d'élastine, l'activation de métalloprotéases dégradant la matrice, etc. [41]. De plus, les ROS jouent un rôle important dans les processus pathologiques, notamment le vieillissement, l'inflammation, les blessures et la pathogenèse de plusieurs maladies de la peau telles que le psoriasis et le vitiligo [42]. Fait intéressant, il a été démontré que l'extrait de Salvia haenkei réduit les niveaux de ROS dans les conditions basales, les conditions de stress oxydatif et les conditions de stress induites par l'irradiation UVB, indiquant un effet protecteur potentiel contre les altérations médiées par les ROS [22].

À l'appui de l'effet anti-âge précédemment observé de Salvia hankie, dans ce travail, nous avons mis en évidence la capacité de l'extrait de SH à réduire la sénescence des kératinocytes stimulés par les rayons UVB. Les résultats montrent que SH est capable de réduire l'expression génique des marqueurs de sénescence p21 et p27, qui sont stimulés par le rayonnement UVB. Fait intéressant, l'extrait de SH montre une activité prometteuse dans la réduction de la réponse inflammatoire favorisée par les photodommages dans les cellules, en abaissant la transcription des interleukines. De plus, nous avons démontré de manière intrigante que l'extrait de Salvia haenkei induisait l'expression de la protéine Sirtuinl non seulement après un stress mais également dans des conditions basales, montrant une activité prometteuse dans le ralentissement des processus de vieillissement. La famille des sirtuines, et en particulier SIRT1, s'est avérée jouer un rôle dans le vieillissement-photovieillissement, notamment par l'inhibition des MMP et la dégradation ultérieure du collagène ; plusieurs études ont souligné son rôle protecteur dans le photovieillissement induit par les UVB. Il a été démontré que des composés naturels tels que la juglone (5-hydroxy-1,4-naphtalènedione) restaurent SIRT1 à des niveaux normaux après un traitement UVB, ce qui suggère que SIRTI pourrait jouer un rôle dans la prévention de la carcinogenèse induite par les UVB [29]. Nos résultats indiquent également une possible implication des sirtuines dans le processus de réparation après un stress UVB et leur rôle dans le maintien de l'homéostasie de l'épiderme.

Les troubles cutanés inflammatoires courants, tels que la dermatite atopique et le psoriasis, ainsi que les processus de vieillissement, présentent une fonction de barrière réduite, et la réponse des cellules épidermiques à la perturbation de la barrière peut aggraver, maintenir ou même initier de telles conditions. Les résultats de ce travail ont révélé une forte capacité de SH à restaurer l'intégrité de la barrière cutanée par modulation de plusieurs protéines impliquées dans ces processus. En particulier, il a été observé que la stimulation de la transcription de l'occludine et de la filaggrine indiquait une action de renforcement sur les adhérences entre les cellules. Le déficit héréditaire et acquis en filaggrine affecte la barrière épidermique, altérant l'organisation des

les filaments de kératine du cytosquelette et la structure de l'enveloppe cornée de la peau [43]. De plus, les défauts d'expression de FLG induisent une diminution du nombre de granules de kératohyaline, une chute marquée de la concentration en facteur naturel d'hydratation (NMF) et une alcalinisation du pH cutané [44]. De plus, les altérations des claudines et des protéines occludines, qui appartiennent aux protéines des jonctions serrées (TJ), sont bien décrites concernant les processus de vieillissement. Les JT sont responsables de l'étanchéité de l'espace intercellulaire entre les cellules épithéliales, pour former une barrière fonctionnelle, et sont impliquées dans la prolifération et la différenciation cellulaire [45]. Il a été démontré que l'extrait de Salvia haenkei améliore l'expression de la filaggrine et préserve la localisation de l'occludine sur les membranes cellulaires, altérée par les rayonnements UVB. Une activité supplémentaire de l'extrait de SH dans le maintien d'une peau saine a été mise en évidence par sa capacité à réduire la transcription des métalloprotéinases matricielles 2(MMP-2), stimulées par les rayons UVB. La régulation positive des MMP facilite le vieillissement et les pathologies cutanées, en dégradant le collagène et l'élastine entraînant des altérations de la matrice extracellulaire (ECM) [33, 38], ainsi une réduction de ces protéinases est intéressante dans le contexte du vieillissement cutané.

Les effets positifs du traitement SH observés dans cette étude sur les paramètres moléculaires cutanés les plus courants ont également été confirmés par un essai clinique récent, réalisé dans une cohorte de cinquante femmes caucasiennes âgées de 45 à 60 ans [46]. La Salvia Hankie a été administrée sous forme de crème et plusieurs paramètres, tels que la rougeur et l'élasticité de la peau, la profondeur des rides et le potentiel antioxydant, ont été évalués par des évaluations cliniques et instrumentales ainsi que par l'auto-évaluation des sujets. Les résultats de cette étude révèlent l'efficacité du SH pour améliorer le déclin cutané lorsqu'il est appliqué quotidiennement dans un contexte de vieillissement cutané modéré. En effet, après 84 jours d'application, la peau des femmes s'avère plus élastique et présente moins de zones rouges et des rides moins profondes. De plus, l'étude démontre une augmentation progressive de la capacité antioxydante de la peau suite à l'application quotidienne de la crème [46].

En tant qu'abri protecteur du corps contre l'environnement extérieur, la peau est constamment exposée à des blessures potentielles, et la cicatrisation des plaies est donc un processus essentiel à la survie de tous les organismes. Compte tenu de la capacité prouvée de SH à maintenir une peau saine et sans tache, nous avons supposé que cet extrait pourrait également aider à améliorer la régénération de la peau en étant utile dans la réparation des lésions cutanées. Ainsi, l'activité SH sur la migration des kératinocytes, étape clé dans la restauration de la barrière cutanée après des blessures, a finalement été envisagée. Le traitement de l'extrait SH a révélé une activité intéressante pouvant augmenter la vitesse de migration de HaCaT, démontrant un fort effet sur le rétablissement des lésions épithéliales après les lésions. Comme la migration est un élément critique dans le processus de cicatrisation des plaies, nos données, tenant également compte de l'activité non hyperproliférative de l'extrait, indiquent un effet potentiel des extraits SH pour contrecarrer plus rapidement l'effet d'une lésion de la barrière cutanée, réduisant ainsi le risque de infections.

Nos données indiquent que l'extrait de Salvia haenkei est un composé utile pour aider au rétablissement de la barrière ou pour atténuer la réponse au stress épidermique. Concomitamment à l'essai récent chez l'homme, ce travail apporte des éclaircissements sur les mécanismes impliqués dans l'effet positif de l'extrait sur le vieillissement cutané.

Ce travail, à l'appui des travaux précédents [18, 46], identifie de manière plus particulière le mécanisme moléculaire lié à l'efficacité de la Salvia hankie dans la modulation des paramètres cutanés, soulignant la pertinence de la Salvia hankie en tant qu'agent attractif utile pour l'anti-âge. et les troubles cutanés liés au vieillissement.

MATERIEL ET METHODES Culture cellulaire et irradiation UVB

Des cellules HaCaT (kératinocytes humains spontanément immortalisés) ont été cultivées dans du milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) à haute teneur en glucose additionné de 10 % de sérum bovin fœtal (Life-Technologies, Waltham, MA, États-Unis), de glutamine 2 mM, de pénicilline 100 U/ml et de 100 ug/ml de streptomycine (Lonza, Basilea, Suisse). Les cellules ont été maintenues sous une atmosphère humidifiée de 5 % de CO2 dans l'air et incubées à 37 degrés.

À la demande du protocole expérimental, les cellules ont été exposées à un rayonnement UVB de 30 KJ/m², fourni par une lampe Philips Medical Narrowband UVB PL-S. Pour éviter l'absorption de la lumière par le milieu de culture tissulaire, celui-ci a été retiré avant l'irradiation et remplacé par du DMEM FBS et du rouge sans phénol, conformément au protocole d'irradiation [47]. Après irradiation UVB, les cellules ont été nourries avec un milieu de croissance frais ou utilisées pour des expériences suivant le protocole.

Essai d'exclusion de la viabilité cellulaire et du bleu Trypan 35 x 1 0³ cellules ont été étalées sur des plaques à 12 puits et, après une nuit d'incubation, ont été exposées à différentes concentrations d'extrait hydroéthanolique de Salvia haenkei selon des protocoles expérimentaux. L'extrait a été gracieusement fourni par IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Italie) et présente une teneur en marqueur acide rosmarinique de 0,6 % p/p par HPLC. Après le traitement, les cellules ont été lavées, détachées avec 0,25 % de trypsine -0, 2 % d'EDTA et mises en suspension dans du bleu trypan (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) à un rapport l: I dans une solution moyenne. Les cellules ont été comptées à l'aide d'un hémocytomètre Burker à chambre.

Test de fluorescence ROS

Les ROS ont été quantifiés à l'aide de diacétate de 2',7'-dichlorofluorescéine (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), comme décrit précédemment [48]. En bref, les cellules (5x10') ont été ensemencées dans des plaques 96-puits, laissées adhérer pendant la nuit, puis exposées à l'extrait SH pendant 3 ou 24 heures. La N-acétylcystéine 5 mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) a été utilisée comme contrôle positif.

Pour la condition de stress oxydatif, le niveau de ROS a été mesuré après l'ajout de 50 μM Hz-DCF-DA en l'absence ou en présence de H2Oz [48]. L'intensité de fluorescence du DCF a été mesurée à une excitation de 485 nm - émission de 535 nm, à l'aide d'un lecteur de plaque multiétiquette VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Pour l'évaluation des niveaux de ROS dans des conditions de stress UVB, le protocole a été légèrement modifié, en incubant des cellules dans des traitements SH - 50 solution μM Hz-DCF-DA dans du PBS. Après 25 minutes d'incubation à 37 degrés, la plaque a été exposée aux rayonnements UVB et l'intensité de fluorescence DCF a été immédiatement mesurée à excitation 485 nm - émission 535 nm, à l'aide d'un lecteur de plaque multilabel VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Microscopie d'immunofluorescence

10x104 cellules ont été ensemencées sur des lamelles en verre pré-enduites de collagène dans des plaques à puits 24-, laissées se fixer pendant la nuit et traitées avec de l'extrait SH conformément au protocole. Pour la détection des protéines -caténine et occludine, les cellules ont été exposées au rayonnement UVB, comme décrit dans le protocole ci-dessus. Après irradiation, les cellules ont été alimentées avec un milieu de croissance frais ou utilisées pour l'expérience suivant le protocole. Pour le test d'immunofluorescence, 4 heures après l'irradiation UVB, les cellules ont été lavées, fixées avec 4 % de formaldéhyde, perméabilisées avec 0,1 % de Triton X -100 dans du PBS et colorées pendant 1 heure à 37 degrés avec différents anticorps spécifiques aux protéines : anti-occludine monoclonale de souris (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA), anti-filaggrine de souris (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Après lavage au PBS, les cellules ont été incubées avec des anticorps secondaires/isothiocyanate de fluorescéine (Alexa Fluor 488 anti-souris ou Alexa Fluor 536 anti-lapin immunoglobuline G, Molecular Probes, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA) et avec de la phalloïdine pendant 1 heure à température ambiante. Après 10 minutes de traitement à la RNase, les lamelles ont été montées sur des lames de verre en utilisant Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) et en ajoutant de l'iodure de propidium. Les images ont été acquises au microscope confocal LSM 800, grossissement 60X, logiciel ZN 2.1 blue Edition (Carl Zeiss, Jena, Allemagne) et quantifiées à l'aide du logiciel ImageJ.

analyses statistiques

L'analyse statistique a été réalisée à l'aide de GraphPad Prism version 7.02 pour Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Sauf indication contraire, les résultats sont présentés sous forme de moyenne plus SEM. Le test t de Student a été utilisé et les valeurs de p<0.05 were="" considered="" statistically="">

Abréviations

UN J:jonction adhérente ; ECM : matrice extracellulaire ; FLG : filaggrine ; Hz-DCF-DA : diacétate de 2',7'-dichlorofluorescéine; H2Oz : peroxyde d'hydrogène ; MMP : métalloprotéinase matricielle ; NAC : N-acétylcystéine ; NMF : facteur ; ROS : hydratant naturel à l'oxygène réactif

espèces; SIRTl: Sirtuinl ; SH : mouchoir de Salvia ; TJ : jonction serrée ; UVB : Rayonnement ultraviolet B.

Cet article est extrait de www.aging-us.com