Détection HS-GC-IMS des composés organiques volatils dans les poudres de cistanche sous différentes méthodes de traitement

Jul 13, 2022

Résumé

Cistancheest un précieuxMédicinal chinoismatière à valeur médicinale et comestible. Afin d'étudier les effets de différentes méthodes de traitement sur les composants volatils danscistanche. Tout d'abord, l'étude actuelle a effectué le traitement synergique, ultra-fin de poudrage, d'extraction d'alcool et d'extraction d'eau du cistanche, puis a utilisé la méthode HS-GC-IMS pour détecter les composants volatils et a établi les empreintes digitales caractéristiques de la poudre de cistanche améliorée. (a), la poudre de cistanche fraîche (b), la poudre de cistanche ultra-micro de viande (c), l'extrait aqueux depoudre de cistanche(d) et leextrait éthanolique de cistanche(e). Au total, 48 pics ont été détectés et 32 ​​composés volatils ont été identifiés, dont 17 aldéhydes, 5 cétones, 1 furane, 5 alcools, phénols, 1 lactone, 3 composés esters. De plus, l'analyse de similarité de l'ACP et des empreintes digitales a montré que les composants volatils des cinq méthodes de traitement pouvaient être distingués de manière significative. Les résultats ont montré que les types et les teneurs en composants volatils dans le cistanche synergique étaient relativement faibles, les composants volatils et les types dans le cistanche frais étaient relativement élevés et que les cinq méthodes de traitement avaient chacune leur propre caractéristique.composants volatils du Cistanche.

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Mots clés

Cistanche
Les composés organiques volatils
HS-GS-IMS
APC
Similitude d'empreintes digitales


1. Introduction

Cistanche (Cistanche deserticola YC Ma) également connue sous le nom de pouce yun, cistanche, est une plante herbacée parasite vivace de la famille des Ledangaceae, principalement distribuée en Mongolie intérieure, au Gansu et au Xinjiang en Chine, et est une matière médicinale chinoise courante en Chine. Dès le "Shennong Materia Medica" de la dynastie des Han de l'Est, il est enregistré que "cistanche… Raw Valley. "(Peng et al., 2017) Parce qu'il a pour effet de tonifier le yang des reins, d'améliorer le sang des spermatozoïdes, d'hydrater les intestins, etc., il peut être utilisé pour traiter la déficience en yang des reins, l'impuissance causée par une insuffisance de sperme et de sang, des maux de dos faibles et des pieds faibles, des acouphènes et sécheresse intestinale et constipation, etc., il est connu sous le nom de "ginseng du désert" (Zhu, Liu, Gao, Wu et Shi, 2016).

La recherche révèle que les glycosides phényléthanoïdes, les iridoïdes, les lignanes, les oligosaccharides et les polysaccharides sont les principaux constituants chimiques des Cistanches (Fu, Fan, Wang et Gao, 2018), qui contient un composant volatil riche. L'édition 2020 de la Pharmacopée de la République populaire de Chine décrit le cistanche comme "légèrement aéré, sucré et légèrement amer", c'est-à-dire que le cistanche a une odeur particulière (Wang et al., 2015). Dans le système traditionnel de discrimination de la qualité des plantes médicinales chinoises, l'odorat est l'une des bases importantes pour juger de la qualité des herbes médicinales, de sorte que l'étude des composants volatils de Cistanche est très importante.

Cistanche extract (2)

Jusqu'à présent, il existe deux techniques principales pour analyser les composés organiques volatils dans les aliments, l'une est que le nez électronique peut analyser la composition aromatique des aliments en temps réel, et l'autre est que la technologie de chromatographie peut identifier avec précision la composition chimique (Rusinek et al., 2021). Parmi eux, les dispositifs de nez électronique (e-nez), généralement composés d'une série de dispositifs de détection électrochimiques, les technologies de détection électronique d'arôme (EAD) affectent la précision de détection du nez électronique, et il est nécessaire de sélectionner la détection appropriée du nez électronique pour différents échantillons de détection. Les dispositifs à nez électronique (nez électronique) ont les caractéristiques d'une détection rapide, d'une sensibilité élevée et d'une large plage de détection, mais en raison de la reproductibilité légèrement inférieure des résultats, l'application pratique est limitée (Rasekh, Karami, Wilson et Gancarz, 2021Slimani et al., 2020). La technologie de chromatographie comprend principalement HPLC-MS et GC-MS, etc., avec un système de chromatographie liquide ou gazeuse comme système de séparation, la spectrométrie de masse comme système de détection, à travers le spectrogramme de la masse moléculaire relative et des informations de structure du produit chimique combinées pour obtenir des détails chimiques, le temps de prétraitement de l'échantillon est long mais a une séparation élevée, une sélectivité élevée rend les résultats d'une grande précision et d'une grande reproductibilité. À l'heure actuelle, le cistanche a été identifié principalement par analyse HPLC-MS de la composition chimique, il existe peu d'études sur la saveur des Herba Cistanches. Par exemple, extrait les substances volatiles du cistanche par la méthode de distillation-extraction et isolé 24 composants chimiques par la méthode GC/MS(Hui, Hou, Li et Guang, 2003), et enfin analysé et confirmé par IR et EI-MS. La GC-MS a été utilisée pour analyser les volatils de l'inflorescence de Cistanche et a finalement identifié 40 composés volatils(Qiao et al., 2012). Le prétraitement des échantillons de ces méthodes est plus lourd, ce qui a un impact plus important sur les résultats expérimentaux, et il faut plus de temps pour déboguer les conditions de détection au stade précoce, qui a des exigences techniques plus élevées.

Ces dernières années, la spectroscopie de migration ionique par chromatographie en phase gazeuse (GC-IMC) en tant que technologie de détection émergente, en raison de sa sensibilité ultra-élevée, de sa vitesse d'analyse ultra-élevée, de sa simplicité et de ses caractéristiques de fonctionnement faciles, elle a été largement appliquée dans les domaines tels que analyse des arômes alimentaires, détection de produits chimiques toxiques. HS-GC-IMS présente les avantages d'une efficacité analytique élevée et d'un degré de visualisation élevé, et est bon pour analyser les substances volatiles et semi-volatiles (Zhou, Dai, Guo, Wang et Shi, 2020). Tels nous, Wenjiang Dong et al. analysé les composés volatils dans les grains de café vert par la technologie HS-SPME/GC-MS pour déterminer la qualité des grains de café (Dong, Tan, Zhao, Hu et Lu, 2015). Ainsi, cet article a tenté d'appliquer la technologie HS-GC-IMC pour analyser la composition en composés organiques volatils et l'empreinte digitale du cistanche traité par différentes méthodes, et a utilisé l'analyse des composants principaux et l'évaluation de la similarité pour analyser la différence de teneur en composés organiques volatils du cistanche traité dans différentes manières, afin de fournir de nouvelles idées pour l'identification et la détection de la saveur des produits cistanche traités avec différentes méthodes de traitement.


2. Matériels et méthodes

2.1. Echantillon Cistanche

Poudre de cistanche synergique : la cistanche fraîche est nettoyée et retirée, et le traitement d'efficacité est effectué, et le liquide collecté est ajouté au batteur pour le broyage humide, séché jusqu'à ce que la teneur en eau soit inférieure à 5 %, et enfin le broyage secondaire est effectué. dehors.

Poudre de cistanche fraîche : la cistanche fraîche est nettoyée et retirée, un batteur est placé pour le broyage humide, séché jusqu'à ce que la teneur en humidité soit inférieure à 5 %, et enfin le deuxième broyage est effectué.

Poudre ultra-fine de cistanche : la cistanche fraîche est nettoyée et retirée, placée dans un batteur pour le broyage humide, séchée jusqu'à ce que la teneur en eau soit inférieure à 5 %, et enfin le deuxième broyage, l'échantillon résultant est ensuite placé dans l'ultra-micro pulvérisateur pour un broyage ultra-fin, puis la poudre de cistanche est tamisée (le nombre de mailles supérieur ou égal à 300 mesh), et la poudre est collectée après le tamis.

L'extrait aqueux de poudre de Cistanches Herba : Tout d'abord, la totalité de la cistanche fraîche est lavée et retirée, cuite à la vapeur dans un cuiseur à vapeur pendant 25 minutes, puis la cistanche est recueillie pour précipiter le liquide. Ensuite, placez le cistanche cuit à la vapeur dans la boîte de séchage à 70 degrés pour sécher pendant 7 à 8 h, sortez le cistanche séché et coupez-le en tranches (environ 5 mm d'épaisseur), séchez-le à nouveau pendant 1{{19} } h, de sorte que la teneur en humidité soit inférieure à 10 % . Ensuite, pesez les tranches de cistanche séchées et ajoutez de l'eau distillée, le rapport alimentation-liquide est de 1:10 (g/mL), faites tremper pendant 30 minutes, faites frire pendant 1h, sur une passoire de 200 mesh. Ajouter l'eau distillée ci-dessus au résidu de cistanche restant et répéter les étapes ci-dessus. Répétez deux fois et collectez enfin tous les extraits pour la concentration de décompression (vide -0,08Mp, température 65 degrés) pour obtenir un extrait avec une densité relative d'environ 1,30. Enfin, l'extrait est placé dans une boîte de séchage sous vide (le degré de vide est plus supérieur à -0,08 Mp, température de 70 degrés), séché jusqu'à ce que la teneur en humidité de l'échantillon soit inférieure à 5 %, et l'échantillon est broyé en une poudre de plus de 80 mesh.

L'extrait d'éthanol de poudre de Cistanches Herba : cistanche fraîche lavée et retirée, coupée en tranches de 5 mm d'épaisseur, ajouter 70 % d'éthanol, le rapport liquide est de 1:10, laisser tremper pendant 30 minutes (ne faire tremper qu'une seule fois). A l'aide de l'extracteur Soxell, l'extraction à reflux est de 1,5h. Ajouter un autre 70 pour cent d'éthanol et répéter les étapes ci-dessus 2 fois. Combinez les trois solutions d'extraction, effectuez la concentration de décompression et les étapes suivantes sont les mêmes que l'eau pour soulever la poudre de cistanche.

Le cistanche frais utilisé dans l'expérience est acheté auprès de Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd., toute la poudre de cistanche doit être emballée, stérilisée et stockée dans un environnement sec pour une utilisation ultérieure.

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2.2. Système HS-GC-IMS

Les analyses des échantillons de Cistanches Herba ont été réalisées sur un dispositif de spectre de mobilité ionique en phase gazeuse FlavourSpec® (le département GAS de Shandong Hai Neng Science Instrument Co., Ltd., Shan-dong, Chine))

Tout d'abord, un échantillon de 0 0,5 g a été placé dans un flacon d'échantillon d'espace de tête de 20 mL, puis l'échantillon a été incubé à 70 degrés pendant 20 minutes. Ensuite, la vitesse de la centrifugeuse était de 500 tr/min et la température de l'aiguille d'injection était de 85 degrés. Finalement, 200 μL d'échantillon ont été injectés.

Le GC équipé d'une colonne chromatographique MXT{{0}} (15 m × 0.53 mm) a été utilisé pour la séparation à 60 degrés, N2 (pureté supérieure ou égale à 99,999 %) a été utilisé comme gaz vecteur, et le débit était : 0–2 min - 2 mL/min ; 2–10 min - 2–10 mL/min ; 10–20 min - 10–100 mL/min, après 20 min, l'analyse a été arrêtée. Le tube de dérive a été maintenu à 45 degrés sous N2 en tant que gaz de dérive à 150 mL/min.

La température de l'IMS a été fixée à 45 degrés.

2.3. analyses statistiques

Le logiciel d'analyse de données comprend le logiciel Laboratory Analytical Viewer (LAV) et le logiciel de recherche de bibliothèque GC-IMS, qui peuvent être exécutés sous différents angles. LAV comprenait VOCal et trois plug-ins, VOCal qui a été utilisé pour visualiser le spectre d'analyse et l'analyse qualitative et quantitative des données. Chaque point du diagramme représente un composé organique volatil. L'analyse qualitative des substances peut être effectuée en combinaison avec la base de données intégrée du logiciel. Le plug-in Reporter est utilisé pour comparer directement les différences spectrales entre divers produits, tels que les spectres de différence d'échantillon et les spectres de vue de dessus bidimensionnels. Le plug-in de tracé de galerie a été utilisé pour comparer les empreintes digitales entre les échantillons et comparer visuellement les différences de COV entre différents échantillons ; Le plug-in Dynamic PCA a été utilisé pour l'analyse par grappes d'échantillons, ce qui était pratique pour déterminer rapidement le type d'échantillons inconnus.

L'analyse en composantes principales a été utilisée pour déterminer les relations entre les échantillons de cistanche traités différemment et les composés organiques volatils détectables. La matrice de données PCA pour l'analyse statistique des résultats des tests chromatographiques comportait 38 colonnes (noms des composés volatils) et 15 lignes (échantillons traités de différentes manières). La matrice d'entrée a été mise à l'échelle automatiquement.

3. Résultats et discussion

3.1. Représentations topographiques HS-GC-IMS de différentes méthodes de traitement sur cistanche

Dans cette étude, HS-GC-IMS a été utilisé pour analyser les différences de composés volatils dans différentes méthodes de traitement sur cistanche. Les données ont été représentées par le spectre 3D généré par HS-GC-IMS dansFig. 1, il comprend le temps de rétention, le temps de migration et l'intensité maximale. DeFig. 1, les composés volatils dans différents traitements des cistanches sont très similaires, mais il existe des différences dans les cercles rouges et l'intensité du signal est légèrement différente.


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Fig. 1Relevés topographiques 3D.


Afin d'avoir une meilleure observation, la vue de dessus a été utilisée pour comparer ces échantillons en détail. Tout l'arrière-plan de la vue de dessus est bleu et la ligne verticale rouge à l'abscisse 1.0 est le pic de déchirure (pic d'ions réactifs, normalisé). Chaque point à droite de RIP Peak représente un composé organique volatil. La coordonnée en ordonnée représente le ou les temps de rétention de la chromatographie en phase gazeuse et l'abscisse représente le temps de migration des ions (processus de normalisation). Comme on peut le voir deFigure 2a, la plupart des signaux se produisent à un temps de rétention de 100–800 s et un temps de dérive de 1,0–1,7 ms. La couleur représente la force du signal de la substance, le blanc indique une intensité plus faible et le rouge indique une intensité plus élevée. Plus la couleur est foncée, plus l'intensité est grande.


Afin de comparer plus clairement les effets de différentes méthodes de traitement sur les substances volatiles du cistanche,Figure 2b sélectionne les spectres de l'échantillon (a) comme référence, et déduit le traitement de référence des spectres des 4 autres échantillons pour obtenir un tracé de comparaison de différence d'échantillon. Si les composés organiques volatils de l'échantillon sont cohérents, le fond après déduction est blanc, s'il y a une différence entre les deux, le rouge signifie que la concentration de la substance est supérieure à la référence, le bleu signifie que la concentration de la substance est inférieure à la référence, et plus la couleur est foncée, plus la concentration est élevée. En comparant les échantillons a et b, on peut constater que la concentration de composés organiques volatils contenus dans b est significativement plus élevée que celle de a pendant le temps de dérive de 1,2 à 1,6 ms. L'analyse a été que le cistanche peut libérer certains composants volatils au cours du processus synergique, réduisant la concentration de composants volatils retenus dans la poudre de cistanche et affectant la saveur du cistanche (Yang et al., 2021). En comparant les échantillons a et c, on peut constater que le temps de dérive est compris entre 1,4 et 1,6 ms et que la différence de concentration entre les échantillons est différente. L'analyse était due au fait que les propriétés chimiques ou physiques de certaines substances volatiles ont été modifiées lorsque le tamis a été broyé avec un broyeur ultra-fin (Zhao et al., 2009), ce qui le rend instable et sujet à la volatilisation et à la perte pendant le stockage ou le fonctionnement (YBLi, Li, Liu et Lu, 2020), entraînant une diminution de la concentration de substances volatiles restantes. D'après le tableau de comparaison des différences des échantillons d et e, on peut constater que la différence entre la poudre de cistanche et la poudre de cistanche de viande moelleuse et la poudre de cistanche cuite à la vapeur est généralement la même, mais dans la plage de temps de rétention 10{{ 7}}–200 s et un temps de dérive de 1,0 à 1,3 ms, il y avait des différences significatives dans les concentrations de substances volatiles de l'extrait d'eau de cistanche et de l'extrait d'alcool de cistanche, et les substances volatiles de l'extrait d'eau de cistanche étaient principalement concentrées près du temps de rétention de 1,0 ms et la concentration était élevée, tandis que les substances volatiles de l'extrait d'alcool de cistanche étaient dispersées et légèrement plus élevées. On peut analyser que lors de l'extraction de cistanche à partir d'éthanol, en raison de la « solubilité de phase similaire », il peut y avoir des substances volatiles insolubles dans l'éthanol perdues au cours du processus d'extraction, ce qui entraîne une concentration plus faible de certaines substances volatiles (Xu et al., 2014). Il se peut également que, parce que l'éthanol lui-même est volatil, certaines substances volatiles se volatilisent avec l'éthanol pendant le processus de concentration, ce qui entraîne des concentrations plus faibles. Les extraits à l'eau de Cistanche, en revanche, peuvent être perdus lors de la filtration du fait que certaines substances volatiles sont insolubles dans l'eau ou insolubles dans l'eau, ce qui entraîne une faible concentration finale de détection.

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3.2. Identification des composants volatils du cistanche traité par différentes méthodes de traitement

Cistanche s'est avéré contenir 49 composés volatils, qui comprennent principalement des huiles essentielles, 17 glycosides phényléthanoïdes (PhG) et 10 iridoïdes ont été identifiés (Xu et al., 2014). Hui et al. utilisé la méthode GC/MS pour confirmer que l'huile volatile cistanche contient 24 produits chimiques, tels que 3 aldéhydes, 2 phénols, 3 alcools et 3 cétones, et l'eugénol est le principal composant de l'huile volatile cistanche (Hui et al., 2003).

Dans cette recherche, l'analyse des composés volatils cistanche traités avec différents traitements par HS-GC-IMS utilisé pour donner des informations qualitativement caractérisent. Comme représenté sur laFigure 3, l'abscisse représente le temps différentiel, l'ordonnée représente le(s) temps de résolution, et les nombres rouges correspondent aux composés dansTableau 1. Au total, 48 pics sont détectés dans l'échantillon et 32 ​​composés volatils ont été identifiés, dont 5 cétones, 5 alcools, 17 aldéhydes, 1 furanes, 1 lactone, 3 esters. Parmi eux, les composés de méthypropanal, 3-méthylbutanal, 2-méthylbutana, heptanal, (E)-2-hepténal, 2-heptanone, (E)-2-hexénal , (E)-2-octénal, n-nonanal, octanal, acétate d'éthyle, 2-méthylpropanol, (E)-2-penténal, furfural, gamma-butyrolactone et hexanoate de méthyle de cistanche avaient les formes de monomères et de dimères.


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Figure 3Spectres HS-GC-IMS de cistanche après traitement des méthodes de traitement. Les nombres sont des composants volatils identifiés. a : poudre de cistanche synergique, b : poudre de cistanche fraîche, c : poudre de cistanche super micro viande, d : l'extrait aqueux de poudre de Cistanches Herba, e : l'extrait éthanolique de poudre de Cistanches Herba.


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