L'administration in vivo de consortiums de bactéries intestinales reproduit les métabotypes A et B de l'urolithine dans un modèle de rat non producteur d'urolithineⅡ

Résultats

Analyse de la spécificité et de la sensibilité des amorces et sondes conçues pour Ellagibacter et Enterocloster

La spécificité des amorces et de la sonde Ellagibacter et Enterocloster a été confirmée en téléchargeant leurs séquences sur le programme d'alignement de séquences ProbeMatch.31 Les résultats sont présentésdans les tableaux 1S et 2S.† Par la suite, la spécificité des amorces et de la sonde a été vérifiée par qPCR en utilisant les conditions de réaction optimisées décrites dans la section Matériels et méthodes. Les espèces bactériennes représentatives des familles Eggerthellaceae et Lachnospiraceae présentant la plus grande similitude avec Ellagibacter et Enterocloster dans la séquence du gène de l'ARNr 16S ont été testées en plus d'autres espèces étroitement apparentées fréquemment détectées dans l'intestin humain (Tableaux 1S et 2S†). La figure 2 montre les tracés d'amplification correspondant aux courbes standards de quantification.

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Les valeurs CT ont été tracées par rapport à la concentration bactérienne (Co) sous forme de log 10 équivalents génomiques/réaction (6,25 × 10−6 ng, pour le génome haploïde). La pente de la courbe de régression linéaire, calculée à l'aide de l'ADN génomique, était de −3,78 et la valeur R2 était supérieure à 0,99. Concernant la sensibilité du système qPCR, 1,5 équivalent génome était nécessaire au minimum pour une réaction positive en utilisant le mode TaqMan. Les valeurs CT obtenues avec la courbe d'étalonnage d'E. isourolithinifaciens et d'E. bolted variaient de 15,5 ± 0,7 à 37,8 ± 0,7, alors qu'aucune amplification de l'ADN n'était détectée pour les autres souches testées.

La quantification d'Ellagibacter et d'Enterocloster dans les échantillons fécaux des rats a été réalisée avec cette méthode (qPCR), en considérant la moyenne de trois répétitions. Les résultats ont été exprimés en log 10 bactéries par g de matières fécales et comparés aux valeurs d'abondance relative obtenues par séquençage de l'ARNr 16S. Nous avons observé une corrélation positive entre les résultats obtenus par les deux méthodes chez Ellagibacter (r=0,660, p < 0,001) et Enterocloster (r=0,459, p< 0.001) (data not shown).

Effet de consortiums bactériens administrés par voie orale sur la production in vivo d'urolithines

L'analyse de l'Uro dans les fèces a montré qu'initialement (T{{0}}), les rats ne produisaient pas d'Uros après avoir ingéré de la poudre d'EA (Fig. 3A – C). Cependant, après avoir administré les consortiums bactériens A (Fig. 3A )et B (Fig. 3B), les rats sont devenus capables de produire des Uros. Au cours des trois premières semaines, lorsque les rats des groupes A et B ont ingéré uniquement de la poudre d'EA, la concentration d'Uro (plage : 0–1,43 µg g− 1) et celle de leur précurseur EA (plage : 0,07 à 4,54 µg g−1) dans les fèces était faible. Cependant, à partir du 21e jour, lorsque la consommation de noix a commencé comme deuxième source d'EA, il y a eu une augmentation très significative de la production fécale d'EA (Fig. 3A – C) et d'Uro dans les groupes A (Fig. 3A) et B (Fig. 3B). ).

De plus, des différences dans le profil Uro ont été observées entre les groupes A et B. Dans le groupe A, l'Uro-C fécal, l'Uro-M6, l'Uro-M7 et le métabolite final Uro-A étaient prédominants. En revanche, dans le groupe B, les trois Uros finaux (Uro-A, UroB et IsoUro-A) étaient présents, alors que les intermédiaires étaient rares. Cependant, une concentration fécale plus élevée de l'Uro-G récemment décrit a été détectée dans le groupe B que dans le groupe A. De plus, la concentration d'Uro-B était inférieure à celle de l'Uro-A et de l'IsoUro-A dans le groupe B. De plus, l'Uro-A et Des isoUro-A, mais pas des Uro-B, ont été produits chez tous les rats du groupe B (Fig. 3B). Lorsque des noix ont été ajoutées au régime alimentaire des rats témoins (groupe C) au jour 21, une concentration fécale plus élevée d'EA a également été observée. qu'avant la consommation de noix, où la concentration fécale en EA était très faible (Fig. 3C). Cependant, ni la consommation d'EApowder ni la consommation de noix n'ont favorisé la production d'Uros dans l'intestin des rats témoins (c'est-à-dire sans consortium bactérien).

Colonisation intestinale de bactéries administrées par voie orale Initialement, avant que les rats des groupes A et B ne commencent à consommer les consortiums bactériens, Gordonibacter ou Ellagibacter étaient sous la limite de détection dans les échantillons fécaux lorsque l'analyse de séquençage métagénomique a été réalisée à l'aide de la plateforme MiSeq-Illumina (Fig. 3D – F ). Lorsque la qPCR a été utilisée,Les niveaux de Gordonibacter chez les rats étaient faibles (<5.8 log bacteria per g faeces), and Ellagibacter levels were under the limit of detection (data not shown). In contrast, Enterocloster was detected using the MiSeq-Illumina and qPCR in the faeces of rats from all groups (A, B, and C) at the baseline (Fig. 3D–F). 

L'abondance relative (moyenne ± écart-type) d'Enterocloster dans les groupes A, B et C était de {{0}}.03 ± 0.02, {{10 }},04 ± 0,06 et 0,13 ± 0,17%, respectivement, mais sans différences significatives (p=0,570). L'administration des consortiums bactériens A et B a entraîné l'apparition et l'augmentation progressive de Gordonibacter et d'Ellagibacter dans les selles correspondantes des groupes A et B, respectivement (Fig. 3D et E). De plus, les taux d'Enterocloster fécaux ont augmenté tout au long de l'étude dans les groupes A et B (Fig. 3D et E).

Cependant, l'analyse LEfSe a montré de rares différences dans d'autres groupes bactériens intestinaux lorsque les données de séquençage métagénomique des groupes A et B ont été comparées à celles du groupe témoin (Fig. 4A et B). Il est intéressant de noter qu'une réduction du genre Streptococcus et de la famille des Streptococcaceae a été observée dans les groupes A. et B par rapport au groupe témoin (Fig. 4A et B). Cinq jours après l'arrêt de l'administration orale des consortiums bactériens (date de fin de l'étude), une réduction de l'abondance d'Ellagibacter et d'Enterocloster a été détectée dans le groupe B, ce qui a également entraîné une diminution significative de la production d'Uro (Fig. 3B et E). Dans le groupe A, une réduction de l'abondance de Gordonibacter mais pas d'Enterocloster a également été observée (Fig. 3A), ce qui a entraîné une diminution de la concentration d'Uro mais était moins prononcée que dans le groupe B (Fig. 3D et E). Dans le groupe témoin, Ellagibacter était sous la limite de détection tout au long de l'étude, et Enterocloster et Gordonibacter sont restés à des niveaux très bas (Fig. 3F).

Etude de la toxicité des bactéries intestinales administrées par voie orale

Les effets secondaires potentiels de l’ingestion du consortium bactérien ont été étudiés. Aucun effet indésirable sur la croissance, la prise de poids, la prise alimentaire et les organes vitaux n'a été observé après 4 semaines d'administration orale par gavage de consortiums bactériens chez les rats des groupes A et B par rapport au groupe témoin. Cependant, les rats mâles ont pris 107,4 ± 2,4 g, tandis que les rats femelles ont pris moins.poids (25,7 ± 5 g) à la fin de l'étude sans différences par rapport au groupe témoin. La consommation alimentaire par cage était de 63,1 ± 1,4 g pour les rats mâles et de 33,8 ± 1,8 g pour les rats femelles. Cependant, la consommation d'eau était de 136,1 ± 37,2 g et de 76,0 ± 12,6 g, respectivement par les rats mâles et femelles par cage. .

Des différences hématologiques ont été observées entre les hommes et les femmes dans certaines variables, telles que la distribution des érythrocytes (RDW, p {{0}},005), les leucocytes (p=0,005), la largeur de distribution des plaquettes (PDW, p =0,005) et la teneur en hémoglobine des réticulocytes (CHr, p=0,013) (Tableau 2). Pourtant, aucune différence n’a été observée pour les variables entre les groupes ayant consommé les consortiums bactériens (groupes A et B) et le groupe témoin (groupe C). Les valeurs biochimiques ont également été analysées et des différences ont été détectées uniquement entre les hommes et les femmes dans certaines variables telles que l'indice de créatinine (p < 0,001), le phosphore (p=0,007), la phosphatase alcaline (ALP) (p {{13 }}.003), et la thyroxine (T4) (p=0.002)(Tableau 3). Cependant, aucune différence n'a été observée pour aucune des variables entre les groupes ayant consommé les consortiums bactériens (groupes A et B) et le groupe témoin (groupe C).

Phytothérapie naturelle pour soulager la constipation-cistanche

Cistanche est un genre de plantes parasites appartenant à la famille des Orobanchaceae. Ces plantes sont connues pour leurs propriétés médicinales et sont utilisées en médecine traditionnelle chinoise (MTC) depuis des siècles. Les espèces de Cistanche se trouvent principalement dans les régions arides et désertiques de Chine, de Mongolie et d'autres régions d'Asie centrale. Les plantes Cistanche se caractérisent par leurs tiges charnues et jaunâtres et sont très appréciées pour leurs bienfaits potentiels pour la santé. En MTC, on pense que le Cistanche a des propriétés toniques et est couramment utilisé pour nourrir les reins, améliorer la vitalité et soutenir la fonction sexuelle. Il est également utilisé pour traiter les problèmes de vieillissement, de fatigue et de bien-être général. Bien que le Cistanche soit utilisé depuis longtemps en médecine traditionnelle, les recherches scientifiques sur son efficacité et sa sécurité sont en cours et limitées. Cependant, il contient divers composés bioactifs tels que des glycosides phényléthanoïdes, des iridoïdes, des lignanes et des polysaccharides, qui peuvent contribuer à ses effets médicinaux.

Chez Wecistanchepoudre de cistanche, comprimés de cistanche, capsules de cistanche, et d'autres produits sont développés en utilisantdésertcistecomme matières premières, qui ont tous un bon effet sur le soulagement de la constipation. Le mécanisme spécifique est le suivant : On pense que le cistanche présente des avantages potentiels pour soulager la constipation en raison de son utilisation traditionnelle et de certains composés qu'il contient. Bien que les recherches scientifiques portant spécifiquement sur l'effet du Cistanche sur la constipation soient limitées, on pense que de multiples mécanismes pourraient contribuer à son potentiel à soulager la constipation. Effet laxatif :Cistancheest utilisé depuis longtemps en médecine traditionnelle chinoise comme remède contre la constipation. On pense qu’il a un léger effet laxatif, qui peut aider à favoriser les selles et provoquer la constipation. Cet effet peut être attribué à divers composés présents dans le Cistanche, tels que les glycosides phényléthanoïdes et les polysaccharides. Humidification des intestins : Basé sur une utilisation traditionnelle, le Cistanche est considéré comme ayant des propriétés hydratantes, ciblant spécifiquement les intestins. Favoriser l'hydratation et la lubrification des intestins peut aider à adoucir les outils et à faciliter leur passage, soulageant ainsi la constipation. Effet anti-inflammatoire : La constipation peut parfois être associée à une inflammation du tube digestif. Cistanche contient certains composés, notamment des glycosides phényléthanoïdes et des lignanes, qui auraient des propriétés anti-inflammatoires. En réduisant l’inflammation des intestins, cela peut aider à améliorer la régularité des selles et à soulager la constipation.