CD intratumoral spécifique au vaccin infantile 4+ Coordonnées de rappel des lymphocytes T CD antitumoral 8+ Cellules T et éosinophiles
Oct 17, 2023
ABSTRAIT
Arrière-plan
Les mécanismes antitumoraux des lymphocytes T CD4+ restent grossièrement définis et les moyens d'exploiter efficacement l'aide des lymphocytes T CD4+ pour l'immunothérapie du cancer font défaut. Les cellules T CD4+ mémoire préexistantes ont le potentiel d'être exploitées à cette fin. De plus, le rôle de l’immunité préexistante en virothérapie, en particulier en immunothérapie contre le poliovirus recombinant où l’immunité spécifique au vaccin antipoliomyélitique infantile est omniprésente, reste flou. Ici, nous avons testé l’hypothèse selon laquelle les lymphocytes T mémoire spécifiques au vaccin infantile interviennent dans l’immunothérapie antitumorale et contribuent à l’efficacité antitumorale de la virothérapie contre la polio.
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Méthodes
L'impact de la vaccination contre la polio sur la virothérapie contre la polio et les effets antitumoraux du rappel de la polio et du tétanos ont été testés sur des modèles de mélanome murin syngénique et de cancer du sein. CD8+ knock-out des lymphocytes T et des lymphocytes B, déplétion des lymphocytes T CD4+, transfert adoptif des lymphocytes T CD4+, blocage du CD40L, évaluations de l'immunité antitumorale des lymphocytes T et la déplétion en éosinophiles définit les mécanismes antitumoraux des antigènes de rappel. Des ensembles de données sur le transcriptome pan-cancer et les corrélats des essais cliniques de virothérapie contre la polio ont été utilisés pour évaluer la pertinence de ces résultats chez l'homme.
Résultats
Une vaccination antérieure contre le poliovirus a considérablement renforcé l'efficacité antitumorale de la virothérapie antipoliomyélitique chez la souris, et le rappel intratumoral de l'immunité contre le poliovirus ou le tétanos a retardé la croissance tumorale. Les antigènes de rappel intratumoraux ont augmenté la fonction antitumorale des lymphocytes T, provoqué une infiltration tumorale marquée de cellules lymphoïdes innées de type 2 et d'éosinophiles, et une diminution des proportions de lymphocytes T régulateurs (Tregs). Les effets antitumoraux des antigènes de rappel étaient médiés par les lymphocytes T CD4+, limités par les lymphocytes B, indépendants du CD40L et dépendants des éosinophiles et des lymphocytes T CD8+. Une relation inverse entre les signatures des éosinophiles et des Treg a été observée pour tous les types de cancer du Cancer Genome Atlas (TCGA), et la déplétion des éosinophiles a empêché la réduction des Treg après le rappel de la poliomyélite. Les titres d'anticorps neutralisant la poliomyélite avant le traitement étaient plus élevés chez les patients vivant plus longtemps, et les taux d'éosinophiles ont augmenté chez la majorité des patients après une virothérapie contre la poliomyélite.
Conclusion
L’immunité anti-polio préexistante contribue à l’efficacité antitumorale de la virothérapie anti-polio. Ce travail définit le potentiel d'immunothérapie anticancéreuse des vaccins infantiles, révèle leur utilité pour impliquer les lymphocytes T CD4+ dans les lymphocytes T CD8+ antitumoraux et implique les éosinophiles en tant qu'effecteurs antitumoraux du CD4+ Cellules T.
INTRODUCTION
Bien que les lymphocytes T CD4+ soient des médiateurs clés de la fonctionnalité immunitaire adaptative et de la mémoire, il manque 1 à 3 voies permettant d'exploiter leur potentiel pour l'immunothérapie du cancer. La mémoire immunitaire adaptative permet des réponses immunitaires robustes aux agents pathogènes rencontrés précédemment. En conséquence, les réponses de rappel, c'est-à-dire l'activation des cellules mémoire adaptatives par un antigène apparenté, orchestrent une inflammation innée et adaptative localisée.4 5 Basé sur des travaux récents démontrant l'utilité de l'immunothérapie anticancéreuse de l'antiviral intratumoral CD Réponses des lymphocytes T , 6 7 nous avons émis l'hypothèse que le rappel des lymphocytes T CD4+ localisés dans une tumeur et associés au vaccin infantile pourrait activer les fonctions antitumorales des lymphocytes T CD4+. PVSRIPO (maintenant connu sous le nom de « Lerapolturev »), le vaccin contre le poliovirus vivant atténué de type 1 (Sabin) modifié avec le site d'entrée ribosomique interne du rhinovirus humain de type 2,8, a montré des preuves précoces de son efficacité contre le glioblastome récurrent (rGBM)9 et les maladies récurrentes. , mélanome non résécable10 11 après administration intratumorale (it). La vaccination contre le poliovirus (polio) fait partie du calendrier de vaccination pédiatrique standard dans le monde entier, soit avec le vaccin vivant atténué (Sabin), soit avec le vaccin inactivé (IPOL). La séquence codante du PVSRIPO est identique à celle du vaccin Sabin de type 1. La réactivité sérique préexistante des anticorps anti-PVSRIPO/polio a été confirmée chez tous les patients recevant un traitement par PVSRIPO. 9 10 12 De plus, l'utilisation clinique du PVSRIPO nécessite un rappel préalable avec de l'IPOL trivalent au moins 1 semaine avant son administration, ce qui a provoqué une neutralisation du PVSRIPO sérique. les anticorps augmentent chez tous les patients.9 10 Les effets antitumoraux de la virothérapie contre la polio comprennent des lésions cellulaires néoplasiques et une infection virale sublétale des cellules myéloïdes entraînant une signalisation soutenue de l'interféron de type I (IFN).12–15 La mémoire immunitaire anti-polio entrave probablement la réplication de PVSRIPO. dans la tumeur, mais peut fournir un mécanisme d'action antitumoral alternatif grâce au rappel des cellules T spécifiques du vaccin contre la polio. À l'aide de modèles de tumeurs murines de mélanome et de cancer du sein, nous démontrons qu'une immunité préexistante contre la polio potentialise l'efficacité antitumorale de la virothérapie contre la polio en activant les fonctions antitumorales des lymphocytes T CD4+. Le rappel de la polio ou du tétanos a déclenché des lymphocytes T CD4+ marqués, des cellules lymphoïdes innées de type 2 (ILC2) et un afflux d'éosinophiles ; médiation de l'efficacité antitumorale via les lymphocytes T CD8+ et les éosinophiles de manière indépendante du CD40L. Dans les cohortes de patients atteints de GBMr traités par Lerapolturev (PVSRIPO), des taux plus élevés d'anticorps neutralisant la poliomyélite avant le traitement ont été associés à une survie plus longue, et une induction périphérique des éosinophiles a été observée chez les patients atteints de mélanome après un traitement par Lerapolturev. Ainsi, la virothérapie contre la polio et les antigènes associés au vaccin infantile coordonnent l’immunité antitumorale de type I et II via le rappel des lymphocytes T CD4+.
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MATÉRIELS ET MÉTHODES
Des documents et méthodes étendus sont présentés dans des informations supplémentaires en ligne.
Souris, lignées cellulaires, virus, poly(I:C) et anticorps de qualité in vivo
(Tokyo, Japon). Wildtype (wt) (#000664), CD8 knock-out (k/o) (#002665), B-cell k/o (#002288), OT-I (#003831) et souris CD45.1 C57BL/6 (# 002014) provenaient du Jackson Laboratory. Des souris OT-I et CD45.1 C57BL/6 ont été croisées pour générer des souris CD45.1+OT-I. B16.F10 (American Type Culture Collection), E0771 (G. Palmer, Duke University, États-Unis), E0771hCD155, B16.F10hCD155 et B16. Des cellules F10.9hCD155-OVA ont été cultivées dans du milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM, Gibco) à haute teneur en glucose contenant 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. Les cellules F10.9hCD155-OVA, B16-F10hCD155 et E0771hCD155 ont été précédemment dérivées.12 13 Toutes les lignées cellulaires ont été confirmées négatives pour les mycoplasmes. Du PVSRIPO de qualité laboratoire, du PVSRIPO adapté à la souris (mRIPO) et du PVSRIPO inactivé par les UV (UVP) ont été générés dans des cellules HeLa, suivis d'une purification par exclusion de taille du surnageant résultant comme décrit précédemment. 12 13 PVSRIPO a été utilisé pour la vaccination ; L'UVP a été utilisée pour isoler les effets de la capside de la polio (qui contient des épitopes spécifiques du vaccin contre la polio) ; mRIPO est une version adaptée à la souris de PVSRIPO qui a été utilisée pour tester le plein impact de la virothérapie contre la polio chez la souris. Le poly(I:C) de poids moléculaire élevé VacciGrade (InvivoGen) a été reconstitué conformément aux instructions du fabricant. Anticorps de qualité in vivo contre l'interleukine (IL)-5 (TRFK5) ou le contrôle (HRPN), CD4 (GK1.5) ou contrôle (LTF-2), CD40L (MR-1) ou le contrôle (# BP0091) et le CD40 (FGK4.5) ou le contrôle (2A3) provenaient de Bio X Cell.
Vaccins, vaccinations et titres viraux
Sauf indication contraire, les vaccins utilisant PVSRIPO (1×107 unités formant plaque (ufp)/souris), l'anatoxine tétanique (Tet) (MilliporeSigma ; 0,5 µg/souris) ou l'hémocyanine-patelle (KLH, Sigma -Aldrich ; 100 µg/souris) ont été dilués dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avec de l'Alhydrogel (1 : 1 ; InvivoGen) ; 50 µL de vaccin ont été administrés bilatéralement dans les muscles quadriceps. Des vaccinations combinées d'IPOL et de Tenivac (Sanofi Pasteur) ont été administrées unilatéralement pour chaque vaccin. Des rappels de vaccins ont eu lieu 14 jours plus tard. Pour les titres viraux, les tumeurs ont été récoltées, pesées et homogénéisées mécaniquement dans 1 ml de PBS. L'homogénat a été testé par test sur plaque.16
Expériences sur des modèles de tumeurs murines
Avantages de la cistanche tubulosa-Antitumorale
Pour les implantations B16, 2 × 1 0 5 cellules ont été implantées par voie sous-cutanée dans le flanc de souris mâles et femelles ; pour les implantations E0771, 5 x 105 cellules ont été implantées dans le quatrième coussinet adipeux mammaire de souris femelles. Des souris hCD155-tg C57BL/6 ont été utilisées avec mRIPO pour récapituler la virothérapie contre la polio (réplication virale active ± immunité préexistante) ; tandis que des souris wt C57BL/6, qui ne permettent pas la polio, ont été utilisées avec UVP pour isoler les effets du rappel de la polio. Les tumeurs ont été traitées avec du DMEM ou du PBS (véhicule), du mRIPO (1 × 107 pfu), de l'UVP (1 × 108 pfu pré-inactivés), du Tet (0,5 µg) et/ou du poly(I: C) (30 µg) comme indiqué. dans les légendes des figures. Les groupes de traitement ont été randomisés en fonction du volume de la tumeur (mesures au pied à coulisse, en utilisant l'équation L × W × W/2) le premier jour de traitement. Les souris ont été euthanasiées lorsque le volume de la tumeur dépassait 1 000 mm3, sauf si elles étaient précédées d'une ulcération (qui était peu fréquente et non associée à un traitement particulier), auquel cas les souris ont été exclues de l'étude. La taille des groupes était basée sur des évaluations de puissance issues d'expériences pilotes ou d'expériences antérieures.12 Les mesures des tumeurs ont été effectuées en aveugle pour le groupe de traitement informatique, en commençant après la dernière dose de thérapie informatique/antigène. Les souris présentant un volume tumoral initial aberrant au moment de la randomisation (1 écart-type par rapport à la moyenne) ont été exclues.
Analyse par cytométrie en flux des tumeurs
Les tumeurs ont été récoltées à des moments indiqués dans les légendes des figures et dissociées dans un milieu RPMI-1640 (Thermo Fisher) contenant 100 µg/mL de Liberase-TM (Sigma-Aldrich) et 10 µg/mL de DNAse I (Roche) pendant 30 min à 37 degrés. , suivi d'un passage dans un tamis cellulaire de 70 µM (Olympus Plastics), d'une centrifugation et d'un lavage dans du PBS. Pour les expériences utilisant Zombie Aqua (BioLegend), les cellules ont été colorées avec Zombie Aqua dans du PBS (1: 500) en suivant les instructions du fabricant. Les suspensions cellulaires ont ensuite été incubées avec TruStain FcX de souris 1:50 (BioLegend), suivie d'une coloration spécifique au panneau dans du PBS contenant 2% de FBS. La coloration des facteurs de transcription intracellulaires, des cytokines et du granzyme B a été réalisée à l'aide de l'ensemble de tampons de coloration Foxp3/Transcription Factor (Thermo Fisher) en suivant les instructions du fabricant. Voir les informations supplémentaires en ligne pour plus d’informations sur les panels et les anticorps utilisés. Les données ont été collectées sur un Fortessa X20 au centre de cytométrie en flux du Duke Cancer Institute ; Les fichiers FCS ont été analysés à l'aide de FlowJo V.10 (BD Biosciences). Les stratégies de contrôle sont présentées dans des informations supplémentaires en ligne ; des contrôles d'isotype, des contrôles de fluorescence moins un et une comparaison avec des populations de cellules négatives établies ont été utilisés pour définir la positivité.
Analyses associées aux essais cliniques
Les tests de titre de neutralisation PVSRIPO ont été effectués conformément au protocole d'essai clinique9, et les valeurs des deux essais cliniques de rGBM ont été utilisées à partir des tests d'inscription aux essais cliniques. Les titres de polio de phase I rGBM (NCT01491893) ont été précédemment signalés et la survie a été mise à jour le 29 avril 2020 ; La survie de phase II (NCT02986178) a été mise à jour le 27 avril 2021. Mélanome (NCT03712358)10 11 les pourcentages de globules blancs des participants à l'essai clinique ont été acquis à partir de tests cliniques de formule sanguine complète (CBC).
Analyses statistiques et cohortes d’essais cliniques
Les tests statistiques spécifiques au test sont indiqués dans les légendes des figures correspondantes. GraphPad Prism V.8 a été utilisé pour effectuer des analyses statistiques. Une analyse de variance bidirectionnelle (ANOVA) a été utilisée pour évaluer la différence de croissance tumorale au fil du temps entre les groupes, et des tests post-hoc ANOVA ont été utilisés pour tenir compte de comparaisons multiples, sauf indication contraire dans la figure et/ou la légende de la figure. Une probabilité statistique de (p<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
RÉSULTATS
La vaccination contre la polio potentialise la virothérapie contre la polio
Nous avons d'abord testé la production d'anticorps anti-polio (c'est-à-dire la séroconversion) chez des souris transgéniques pour le récepteur du poliovirus humain CD155 (hCD155-tg) lors d'une immunisation avec IPOL ou PVSRIPO (pour imiter Sabin de type 1) avec et sans adjuvant d'alun ( Alhydrogel ; ALH), qui fait partie des formulations vaccinales homologuées (par exemple, Pentacel, Pediarix, Kinrix). 17 45 jours entre l'immunisation initiale et l'implantation de la tumeur ont permis l'établissement d'une mémoire immunologique.18 L'IPOL a obtenu une séroconversion limitée et l'immunisation PVSRIPO a suscité une plus forte réponse en anticorps ; ALH a renforcé les réponses en anticorps contre les deux (figure supplémentaire en ligne S1A, B). Pour récapituler les niveaux élevés d'anticorps anti-polio chez les patients atteints de cancer9, nous avons choisi la vaccination PVSRIPO+ALH (ci-après « polio ») pour déterminer le rôle de l'immunité préexistante contre la polio dans l'immunothérapie PVSRIPO. Des modèles de tumeurs murines et des souris exprimant hCD155 ont déjà été développés pour permettre l'entrée et la réplication de PVSRIPO, et PVSRIPO a été adapté aux cellules murines pour récapituler la réplication virale dans les cellules cancéreuses murines (mRIPO).13 19 Dans des études antérieures sur des naïfs de vaccin contre la polio, modèles de tumeurs syngéniques de souris, une seule injection de mRIPO nécessitait un blocage de la protéine de mort cellulaire programmée -1 (PD1)/du ligand de mort programmé -1 ou de l'expression tumorale de la protéine immunogène de l'ovalbumine (OVA) pour induire des effets antitumoraux durables .12 13 Cependant, l'efficacité antitumorale durable médiée par mRIPO chez les souris immunisées contre la polio dans les modèles de mélanome (B16) et de cancer du sein (E0771), par rapport aux homologues immunisées témoins (KLH) (figure 1A, B, figure supplémentaire en ligne S1C) . Ainsi, une vaccination préalable contre la polio renforce l’efficacité antitumorale de la virothérapie contre la polio. La virothérapie contre la polio est associée à une inflammation des lymphocytes T dans la tumeur.12 13 La réplication de mRIPO dans les tumeurs a été considérablement réduite chez les souris immunisées contre la polio 2 jours et 5 jours après le traitement (figure 1C, D), ce qui correspond à un taux élevé d'anticorps neutralisants. titres (figure supplémentaire en ligne S1B). Pourtant, nous avons observé une augmentation de la densité de cellules immunitaires totales (CD45.2+) chez des souris immunisées contre la polio après un traitement par mRIPO, expliquée en grande partie par un afflux de lymphocytes T CD4+ conventionnels et de cellules myéloïdes (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (figure 1E, figures supplémentaires en ligne S2A, S3). Une analyse ultérieure a révélé que l'augmentation du nombre de cellules myéloïdes CD11b+ chez les souris immunisées contre la polio et traitées avec mRIPO était des éosinophiles (figure 1F) ; les niveaux de cellules dendritiques (DC) n’étaient pas significativement modifiés. Facteur de nécrose tumorale (TNF) élevé, facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF), taux d'IL-1 et d'IL-17A dans l'homogénat tumoral et niveaux plus élevés d'IL-4 et d'IL{ {51}} dans des cultures de ganglions lymphatiques drainant la tumeur (TDLN) explantées provenant de souris immunisées contre la polio et traitées avec mRIPO ont indiqué des réponses inflammatoires distinctes après le traitement par mRIPO (figure supplémentaire en ligne S2B). Le GM-CSF et l'IL-5 sont des inducteurs connus de la production et du recrutement des éosinophiles,20 expliquant peut-être l'afflux d'éosinophiles dans les tumeurs (figure 1F). Des lymphocytes T CD4+ conventionnels et une infiltration d'éosinophiles en réponse au traitement par mRIPO de souris immunisées contre la polio ont également été observés dans un modèle distinct, E0771 (figure supplémentaire en ligne S2C, D). Ainsi, l’immunité préexistante contre la polio accentue les réponses inflammatoires au mRIPO qui sont associées à une efficacité antitumorale accrue.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000 mm3 ; voir la figure supplémentaire en ligne S1C ; représentatif de deux expériences. (C) Schéma pour les expériences en D – H. (D) Titres viraux d’homogénat de tumeur après mRIPO ; ND, non détecté. (E) Analyses de cytométrie en flux des tumeurs au jour 7 (n=13/groupe simulé ; n=14/groupe mRIPO). (F) Analyses de cytométrie en flux pour les cellules myéloïdes et les cellules dendritiques (DC : Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) au jour 11. (G) Marqueurs d’activation dans les TIL aux jours 7 et 12 ; ont été regroupés à partir de deux expériences ; les valeurs moyennes KLH-DMEM sont affichées. (H) Expression du facteur de transcription TIL au jour 12 ; mêmes échantillons que le jour 12 de (A) ; des données représentatives de trois répétitions sont affichées. Voir les figures supplémentaires en ligne S1 à S4 pour les données étendues. (E – H) Test post hoc de Tukey p< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Phénotypes fonctionnels augmentés des lymphocytes T chez des souris immunisées contre la polio traitées avec mRIPO
Les lymphocytes infiltrant les tumeurs (TIL) CD8+ et CD4+ chez les souris vaccinées contre la polio ont exprimé des taux plus élevés d'IFN-, de TNF et de granzyme B intracellulaires après le traitement par mRIPO, ce qui implique un état fonctionnel amélioré (figure 1G). , figure supplémentaire en ligne S4). Les TIL de souris immunisées contre la polio traitées avec mRIPO présentaient également une expression accrue des facteurs de transcription T-bet, GATA3 et ROR t ; ainsi que l'induction d'IRF4, un promoteur de l'activation et de la fonction des lymphocytes T (figure 1H).21 Expression des marqueurs d'épuisement des lymphocytes T PD1 et de l'immunoglobuline des lymphocytes T et de la protéine 3 contenant le domaine mucine (TIM3) sur CD{{20 }} Les lymphocytes T de la tumeur et les TDLN des souris vaccinées contre la polio et traitées avec mRIPO ont été réduits (figure supplémentaire S2E en ligne). Les modifications des marqueurs d'activation/différenciation des lymphocytes T étaient cohérentes dans le modèle de cancer du sein orthotopique E0771 (figures supplémentaires en ligne S2F, G). Ainsi, les réponses de rappel à la polio augmentent les phénotypes fonctionnels dans les TIL après une virothérapie intratumorale contre la polio.
La poliomyélite et le tétanos rappellent les antigènes médiateurs de l'efficacité antitumorale
Les lymphocytes T mémoire CD8+ spécifiques au réovirus tuent directement les cellules cancéreuses infectées par le réovirus pendant le traitement par réovirus oncolytique,22 et les lymphocytes T mémoire spécifiques au tétanos4+ tuent les cellules cancéreuses infectées par Listeria exprimant Tet.23. Alternativement, les réponses inflammatoires provoquées par le rappel des lymphocytes T mémoire dans le microenvironnement tumoral (TME) peuvent également renforcer la surveillance immunitaire.6 7 Nous avons émis l'hypothèse que l'inflammation induite par le rappel expliquait l'efficacité antitumorale accentuée de la virothérapie contre la polio chez les souris vaccinées contre la polio depuis la réplication virale— nécessaire à la production d'antigène viral dans les cellules tumorales, à l'oncolyse et à l'inflammation antivirale12, a été fortement réduite chez les souris immunisées contre la polio (figure 1D). Pour sonder les effets antitumoraux du rappel de la polio dans le TME, nous avons utilisé un modèle dépourvu de hCD155 (souris et tumeurs ; souris wt C57BL/6) et traité les tumeurs avec du PVSRIPO inactivé par les UV (UVP) pour empêcher l'infection/la réplication virale. Nous avons inclus des comparaisons avec un autre antigène de rappel associé au vaccin, Tet, dont il a été démontré qu'il induisait des effets antitumoraux dans d'autres études.23 24 Son traitement par UVP a exercé une efficacité antitumorale exclusivement chez les souris immunisées contre la polio ; Le traitement Tet a induit des effets antitumoraux transitoires chez les souris immunisées contre le Tet (figure 2A – C, fichier supplémentaire en ligne 1). Les réponses de rappel naturelles se produisent en présence d'une réponse immunitaire innée localisée à la réplication de l'agent pathogène. Pour imiter cela, des souris Tet ou immunisées contre la polio ont été traitées avec du poly(I:C) seul ou en combinaison avec UVP ou Tet. L'UVP et le Tet ont tous deux induit des effets antitumoraux prononcés dans ce contexte (figure 2D). Ces données révèlent que le rappel des cellules T mémoire dans le TME, indépendamment de la présentation de l'expression/du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de leur antigène apparenté par les cellules malignes, est à l'origine de l'efficacité antitumorale.
Les lymphocytes T CD4+ interviennent dans l'efficacité antitumorale des antigènes de rappel
Pour déterminer quel(s) compartiment(s) adaptatif(s) expliquent l'efficacité antitumorale des réponses de rappel de la poliomyélite (indépendantes de la réplication virale), nous avons comparé son traitement à l'UVP chez des souris CD8+ à cellules T et B k/o par rapport au poids. souris (figure 3A). Les souris CD4 k/o n'ont pas été testées en raison du rôle des lymphocytes T CD4+ dans la réponse des lymphocytes T CD8+ et des lymphocytes B à la vaccination. Comme prévu, l’immunisation contre la polio chez les souris WT et CD8 k/o, mais pas chez les souris k/o à cellules B, a conduit à la production d’anticorps anti-PVSRIPO (figure 3B). La croissance de la tumeur B16 était similaire dans chaque contexte génétique après un traitement simulé. Par rapport aux souris wt, l'efficacité antitumorale de l'UVP chez les souris immunisées contre la polio était limitée chez les souris CD8 k/o à des moments ultérieurs, mais était améliorée chez les souris k/o à cellules B (figure 3C ; p=0,007wt vs cellules B k/o courbes traitées UVP, ANOVA bidirectionnelle). De plus, le k/o des cellules B n'a pas empêché l'afflux d'éosinophiles ou de CD4+ TIL (figure supplémentaire en ligne S6A) associé au rappel de la poliomyélite (figure 1). Ainsi, l'efficacité antitumorale du rappel de la poliomyélite dépend en partie des lymphocytes T CD8+ et est limitée par les lymphocytes B. Ces observations, ainsi que l'augmentation des TIL CD4+ après un traitement par mRIPO chez des souris immunisées contre la polio (figure 1E), impliquent que les lymphocytes T CD4+ dictent l'efficacité antitumorale des réponses de rappel contre la polio. Ainsi, nous avons ensuite testé l'effet antitumoral du rappel de la polio avec et sans déplétion transitoire des lymphocytes T CD4+ (figure 3D, commençant le prétraitement de 1- jours). Malgré une forte déplétion des lymphocytes T CD4+ dans le TDLN, la déplétion des lymphocytes T CD4+ dans la tumeur était incomplète et préférentiellement réduite des populations de lymphocytes T régulateurs (Treg), expliquant peut-être de modestes effets antitumoraux et une augmentation de la CD. 8+ Densités de lymphocytes T après l'épuisement des lymphocytes T CD4+ (figure 3D, figure supplémentaire en ligne S6B). Néanmoins, la déplétion des lymphocytes T CD4+ a presque supprimé l'efficacité antitumorale de l'UVP chez les souris immunisées contre la polio et empêché le recrutement d'éosinophiles en réponse à l'UVP (figure 3D) ; L'épuisement des lymphocytes T CD4+ a également empêché l'induction du granzyme B dans les lymphocytes T CD8+ après le traitement UVP (figure supplémentaire en ligne S6B). Collectivement, ces résultats indiquent que les effets antitumoraux et inflammatoires du rappel de la poliomyélite dépendent des lymphocytes T CD4+. Confirmant que les lymphocytes T CD4+ spécifiques à la polio sont suffisants pour potentialiser l'efficacité antitumorale de la virothérapie antipoliomyélitique (avec réplication virale active), le transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ à partir de rate de souris immunisées contre la polio, mais non celui du Tet a renforcé l’efficacité antitumorale du mRIPO (figure 3E, figure supplémentaire en ligne S6C).
Il rappelle que la thérapie antigénique potentialise la fonction antitumorale des lymphocytes T CD8+
Il a été démontré que les lymphocytes T CD4+ spécifiques à la tumeur tuent directement les cellules tumorales25–27, engagent les cellules immunitaires innées cytotoxiques28 29 et aident les lymphocytes T CD8+ effecteurs.1–{ {7}} Conformément à ce dernier, les effets antitumoraux des antigènes de rappel ont été observés après l'administration au TME (figures 2 et 3), étaient partiellement dépendants des lymphocytes T CD8+ (figure 3C) et CD{{12 }} Les TIL présentaient des phénotypes polyfonctionnels améliorés après le traitement par mRIPO chez des souris vaccinées contre la polio (figure 1G).
Figure 2 Les antigènes de rappel de la polio et du tétanos assurent l'efficacité antitumorale. Des souris porteuses de tumeurs B16 (A) ou E0771 (B) immunisées contre la polio ou le Tet ont été traitées intratumorales avec du Tet ou du PVSRIPO (UVP) inactivé par les UV. (C) Des souris naïves ou immunisées Tenivac et IPOL du même âge ont été traitées avec du PBS, du Tet ou de l'UVP. (D) Les souris immunisées comme dans (A, B) ont été traitées intratumorales avec du poly(I:C) (30 µg), du poly(I:C) + Tet ou du poly(I:C) + UVP comme indiqué. (A – D) La moyenne + SEM d’une expérience représentative d’au moins deux répétitions est affichée ; les astérisques indiquent le test de Dunnett p< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Ainsi, nous avons ensuite cherché à déterminer si la polio (UVP) et le rappel du Tet améliorent la fonction des lymphocytes T CD8+ antitumoraux. À cette fin, nous avons transféré de manière adoptive des lymphocytes T CD45.1+OT-I CD8+ (spécifiques à l'OVA) à des souris vaccinées contre la polio ou le Tet et déterminé l'impact du rappel induit par l'UVP et le Tet sur B{ {7}}phénotypes OVA OT-I TIL (figure 4A). L'induction de réponses de rappel dans la tumeur après UVP ou Tet était associée à un retard de croissance tumorale et à une infiltration tumorale accrue de cellules CD45.2+ endogènes, d'éosinophiles et de cellules T CD4+ conventionnelles ; notamment, les niveaux de cellules T antitumorales OT-I n'étaient pas augmentés de manière significative (figure 4B). Cependant, l'analyse des cellules T OT-I CD8+ infiltrant la tumeur a révélé une augmentation du granzyme B, du TNF et de l'IFN- ; et expression réduite du marqueur d’épuisement terminal TIM3 après un rappel de polio ou de Tet (figure 4C). Une expression variée du facteur de transcription associé à Th dans les cellules OT-I et T endogènes a été observée, y compris celle de GATA3, ROR t et BCL6 (figure 4C). L'analyse transcriptomique des TIL OT-I après le rappel de la poliomyélite a révélé une expression accrue des granzymes ; gènes liés à l'activation, à la fonction ou à l'homéostasie des lymphocytes T (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 et BCL6) ; les gènes associés à l'immunité Th1 (Ptger4, Fgl2) ; ainsi que les gènes associés à l'immunité Th2 (Alox15, Ccl8 et GATA3) (figure 4D, figure supplémentaire en ligne 8C). Nous avons confirmé ces observations en testant l'impact du rappel de la poliomyélite sur les CD TIL endogènes spécifiques du TRP 2- (un antigène B16 endogène) 8+ dans les tumeurs B16 sans expression d'OVA. Les TIL TRP2-CD spécifiques8+ présentaient une augmentation de la granzyme B et une expression réduite de TIM3 après le rappel de la polio de manière dépendante des lymphocytes T CD4+ (figure supplémentaire en ligne S9). Ensemble, ces données indiquent une amélioration des phénotypes cytolytiques et fonctionnels des cellules T antitumorales après le rappel de la poliomyélite. Démontrant fonctionnellement une immunité antitumorale améliorée des lymphocytes T après leur rappel, les lymphocytes T isolés de la rate de souris traitées avec cet antigène de rappel (UVP chez les vaccinés contre la polio ou Tet chez les vaccinés Tenivac) ont retardé la croissance tumorale après le transfert à des receveurs naïfs (figure 4E). Les lymphocytes T CD4+ aident à promouvoir la fonction antitumorale des lymphocytes T CD8+ en partie grâce à la signalisation CD40L vers CD40 sur les cellules présentatrices d'antigène,1 mais peuvent également aider les lymphocytes T CD8+ antitumoraux à être indépendants du blocage de CD40L.31 CD40L n'a pas empêché les éosinophiles induits par les UVP, les lymphocytes T CD 4+ conventionnels ou l'afflux antitumoral d'OT-I T ; il n’a pas non plus contrarié les effets antitumoraux (figure supplémentaire en ligne S10). De plus, la ligature du CD40 n'a pas récapitulé l'afflux d'éosinophiles observé après un traitement antigénique de rappel (figure supplémentaire S10 en ligne). Ainsi, le rappel des lymphocytes T CD4+ potentialise la fonction antitumorale des lymphocytes T CD8+ antitumoraux d'une manière indépendante du CD40L.
Figure 3 Les lymphocytes T CD4+ assurent l'efficacité antitumorale du rappel de la poliomyélite. (A) Conception d’expériences dans (B, C). (B) ELISA pour les anticorps anti-polio dans chaque fond génétique au jour 0 (n=4/groupe). (C) Volume tumoral moyen + SEM après traitement simulé (à gauche) ou traitement simulé versus UVP (panneaux de droite) pour chaque contexte de génotype ; Les valeurs p proviennent d'une comparaison par analyse de variance bidirectionnelle (ANOVA) de l'UVP avec le groupe témoin. (D) Les souris immunisées contre la polio ont été traitées avec une simulation ou une UVP comme dans (A), avec des injections intrapéritonéales (ip) d'IgG (témoin) ou d'anticorps déplétant les lymphocytes T CD4+ (250 µg délivrés tous les 3 jours à partir du jour −1); le volume moyen de la tumeur + l'analyse par cytométrie en flux SEM et des lymphocytes T CD4 et des éosinophiles infiltrant la tumeur sont présentés ; n=9 par groupe ; La valeur p provient d'une ANOVA bidirectionnelle comparant les UVP IgG aux UVP CD4 ; (*) indique le p post hoc de Tukey<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Figure 4 La thérapie antigénique de rappel intratumorale potentialise la fonction antitumorale des lymphocytes T CD8+. (A) Des souris immunisées contre la polio ou le Tet (Tenivac) ont été implantées avec des tumeurs B16-OVA, suivies d'un transfert adoptif de cellules OT-I activées (CD45.1+) et d'un traitement avec Tet ou UVP. . (B) Analyses de volume tumoral et de cytométrie en flux des cellules immunitaires (B) et des sous-ensembles TIL (C) ; La figure supplémentaire en ligne S7 présente le déclenchement des TIL OT-I. (D) Les transcriptomes des TIL OT-I isolés de souris immunisées contre la polio 12 jours après le traitement (DMEM ou UVP) ont été analysés. Les décomptes normalisés moyens centraux et échelonnés sont affichés pour les transcriptions qui étaient significativement différentes après un ajustement de la valeur p du taux de fausses découvertes dans deux expériences distinctes (panneau supérieur, n=4/groupe et n=3/groupe, respectivement ) ou pour les caractéristiques pertinentes pour (C) qui approchaient de l'importance dans les deux ensembles de données, y compris les granzymes, IRF4, BCL6 et GATA3 (panneau inférieur) ; n=4 réplicats/groupe sont affichés dans une carte thermique. Les figures supplémentaires en ligne S8B et C présentent des décomptes normalisés pour des échantillons individuels et des données étendues. (E) Progression tumorale chez des souris naïves transférées de manière adoptive avec des cellules T provenant de la rate de souris en A – C. Le volume moyen de la tumeur + SEM est affiché ; la valeur p provient d'une analyse de variance bidirectionnelle. Toutes les barres de données représentent la moyenne + SEM ; les cartes thermiques dans (C) ont été normalisées par la moyenne du pli du contrôle d'antigène incompatible ; Test post hoc de Tukey p<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Les éosinophiles infiltrant les tumeurs s'associent inversement aux Treg dans les tumeurs humaines
L'engagement d'autres effecteurs immunitaires antitumoraux via la sécrétion de cytokines est un mécanisme clé indépendant du CD40L des cellules T CD4+.31 32 La capside de la polio (UVP) et la virothérapie (mRIPO) ont systématiquement provoqué une infiltration robuste des éosinophiles ( figures 1, 3 et 4), de manière dépendante des lymphocytes T CD4+ (figure 3D). L'afflux d'éosinophiles tumoraux est associé à la réponse à l'immunothérapie,33–35 et des travaux récents ont démontré que les lymphocytes T CD4+ enrôlent les fonctions antitumorales des éosinophiles après le blocage de PD1 via l'IL-5.36 Premièrement, nous avons demandé si la densité des éosinophiles était en corrélation avec celui des lymphocytes T CD4+ ou d'autres caractéristiques du TME des tumeurs humaines en interrogeant un ensemble de données pan-cancer du Cancer Genome Atlas (TCGA).37 En utilisant la prédiction CIBERSORT38 des infiltrats cellulaires,37 des échantillons de chaque type de cancer ont été stratifiés en fonction de la présence ou de l'absence de signatures d'expression génique des éosinophiles détectées (figure 5A, figure supplémentaire en ligne S11, 12) ; Les tumeurs des cellules germinales testiculaires (TGCT) et le mélanome uvéal (UVM) ont été exclus en raison du nombre limité de cas d'enrichissement en éosinophiles (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
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Immunité antitumorale de type II après traitement mRIPO de souris immunisées contre la polio
Nous avons ensuite cherché à déterminer l'importance de l'infiltration d'éosinophiles après un rappel contre la poliomyélite chez la souris. Les éosinophiles sont des médiateurs des réponses immunitaires de type II, qui jouent un rôle dans l'immunité antihelminthique et l'inflammation allergique.39 Le recrutement des éosinophiles peut être médié par d'autres médiateurs immunitaires de type II, notamment les ILC2, qui coordonnent les réponses Th2 via des interactions directes avec CD{{4} } Les lymphocytes T40 expriment le facteur de transcription GATA3 et l'éosinophile favorisant la cytokine IL-5, mais manquent d'expression du récepteur des lymphocytes T. En effet, les cellules GATA3+ CD3Neg ont augmenté dans les tumeurs de souris après leur rappel (figure 5C), reflétant peut-être l'afflux d'ILC2. Nous avons ensuite testé l’impact des éosinophiles sur la virothérapie contre la polio (mRIPO) chez des souris immunisées contre la polio et mesuré directement les ILC2. L'épuisement des éosinophiles (via la neutralisation de l'IL -541) a atténué les effets antitumoraux du mRIPO chez les souris porteuses de B 16- OVAhCD155 et immunisées contre la polio (figure 5D, E); n'a pas réduit l'afflux de lymphocytes T CD4+ ; mais bloqué les réductions de la proportion de Treg (figure 5F). De plus, la virothérapie contre la polio (mRIPO) a conduit à un afflux d'ILC2 (figure 5F) et à une modification des phénotypes ILC2 chez des souris immunisées contre la polio, avec une réduction de l'IL-5 et une expression induite de PD1 et de granzyme B (figure 5G). Outre son rôle dans le contrôle des niveaux d'éosinophiles, l'IL-5 est également essentielle à la différenciation des cellules B.42 Cependant, étant donné que les effets antitumoraux du rappel de la polio sont indépendants des cellules B, et éventuellement contrés par celles-ci (figure 3C), et en raison de l'infiltration systématiquement robuste des éosinophiles lors du rappel de la polio, nous concluons que la neutralisation de l'IL -5 diminue les effets antitumoraux du rappel de la polio via la déplétion des éosinophiles. Collectivement, ces données démontrent les rôles antitumoraux des éosinophiles et le recrutement d'ILC2 avec des phénotypes modifiés après le rappel de la poliomyélite et impliquent que les éosinophiles régulent les densités de Treg.
Les anticorps anti-polio préexistants sont associés à une survie plus longue après le traitement par Lerapolturev (PVSRIPO) ; les éosinophiles périphériques augmentent après Lerapolturev
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 mois après Lerapolturev (la survie médiane typique dans le rGBM est d'environ 9 mois) 9 43 avait des titres d'anticorps neutralisants avant traitement significativement plus élevés (figure 6A, B). Pour déterminer si des réponses immunitaires de type II peuvent être engagées ou non chez les patients traités par virothérapie contre la poliomyélite, nous avons analysé les CBC longitudinaux disponibles dans le cadre d'un petit essai d'augmentation de dose de Lerapolturev dans le mélanome récurrent non résécable (phase I, n=12) .10 11 Ces données ont révélé une augmentation des taux sanguins d'éosinophiles après Lerapolturev chez 8/12 patients (figure 6C), coïncidant avec une réduction des neutrophiles (10/12 patients). Ces résultats peuvent indiquer que l'immunité préexistante contribue à l'efficacité antitumorale de la virothérapie contre la polio et que la virothérapie contre la polio induit des réponses immunitaires de type II chez les patients atteints de cancer.
Figure 5 Les éosinophiles s'associent inversement aux Treg dans les tumeurs humaines ; mRIPO induit une immunité antitumorale de type II chez les souris immunisées contre la polio. (A) Sous-ensembles de lymphocytes T déconvolués CIBERSORT dans les types de cancer de l'Atlas du génome du cancer (n=29) stratifiés par statut d'éosinophiles, valeurs p du test t apparié. (B) HR (survie) ± IC à 95 % pour le statut des éosinophiles par type de cancer ; les types de cancer entraînant moins de 20 décès ont été exclus ; Les valeurs p proviennent du test de log-rank de Mantel-Cox. (C) Pourcentage de cellules GATA3+ CD3Neg à partir des données de la figure 4C, les valeurs p proviennent d'un test t non apparié. (D) Conception pour (E – H) : des souris transgéniques immunisées contre la polio, B16-OVAhCD155 porteuses de tumeur hCD155-, ont été traitées avec une simulation ou une déplétion en éosinophiles de PVSRIPO ± (anti-IL-5 ou contrôle IgG, 1 mg par semaine). Volume tumoral moyen + SEM (E), densité d'éosinophiles et d'ILC2 dans les tumeurs (F) et phénotype des ILC2 infiltrant la tumeur (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+) par rapport à la lignée CD négative 90+ cellules de comparaison sont affichées (G). (E) (*)Analyse bidirectionnelle de la variance p<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
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DISCUSSION
Ce travail révèle le potentiel d’immunothérapie anticancéreuse du rappel des lymphocytes T CD4+ localisés dans une tumeur. CD4+ L'aide des lymphocytes T est essentielle pour générer un CD antitumoral entièrement fonctionnel8+ une immunité aux lymphocytes T1 44 et une mémoire à long terme.2 45 CD antitumoral8+ Les lymphocytes T ont présenté des phénotypes polyfonctionnels plus importants après le rappel, le transfert adoptif de lymphocytes T à partir de souris traitées à l'antigène de rappel a retardé la croissance tumorale chez les receveurs naïfs et les effets antitumoraux UVP ont été atténués chez les souris immunisées contre la polio dépourvues de lymphocytes T CD8+. Cela indique que la fourniture de lymphocytes T CD4+ aide à lutter contre les lymphocytes T CD8+ antitumoraux. En effet, l'aide des lymphocytes T CD4+ est liée à une régulation négative des marqueurs d'épuisement, à une expression élevée du TNF/IFN-/granzyme B et à l'induction de Tbet/IRF4 dans les lymphocytes T effecteurs « aidés »,3 qui se sont tous produits avec la polio. virothérapie chez la souris immunisée. Une telle aide des lymphocytes T est probablement multiforme, y compris l'octroi de licences aux CD ; Sécrétion de cytokines par les lymphocytes T CD4+ (par exemple, IL-21, IFN- ); Reprogrammation TME ; ou par les effets positifs des éosinophiles recrutés sur la surveillance immunitaire des lymphocytes T CD8+.36 46 Peut-être en raison de l'activité des anticorps neutralisants contre la polio limitant l'activation des lymphocytes T CD4+ en réduisant la disponibilité de l'antigène de rappel ou de persistance, les lymphocytes B étaient contre-productifs par rapport aux effets antitumoraux du rappel de la poliomyélite. Le rappel de la polio a systématiquement induit des réponses antitumorales et inflammatoires plus fortes que celles du Tet dans nos études. Une possibilité est que cela soit dû à des différences dans l’intensité et/ou la qualité de l’immunité préexistante induite après la vaccination contre la polio par rapport à la vaccination contre le Tet dans nos systèmes modèles. À l'appui de cette possibilité, les effets antitumoraux du Tet et de l'UVP étaient similaires lorsque les souris étaient immunisées avec le vaccin IPOL de qualité clinique (figure 2C), ce qui induisait une immunité anti-polio plus faible que la stratégie d'immunisation contre la polio (PVSRIPO + ALH) utilisée pour d'autres expériences dans notre étude (figure supplémentaire en ligne S1B). Cependant, il est également bien établi que la nature de l'antigène (par exemple, la densité des épitopes, qui est probablement plus élevée dans la capside de la poliomyélite) peut influencer les réponses immunitaires adaptatives. 47 48 L'efficacité antitumorale du rappel de la poliomyélite ne dépendait que partiellement des lymphocytes T CD8+. La thérapie antigénique de rappel a provoqué un afflux d'éosinophiles et d'ILC2, et la déplétion des éosinophiles a diminué les effets antitumoraux chez les souris immunisées contre la polio traitées avec mRIPO. Soulignant l'importance du contexte, il a également été démontré que les éosinophiles et les ILC2 médient les effets protumorigènes.49 50 Dans l'asthme, les lymphocytes T CD4+ recrutent des éosinophiles51 via les ILC2.52 Les ILC2 expriment le CMH de classe II et propagent les réponses Th2 dans infections par les helminthes.40 Dans le cancer, l'infiltration tumorale des éosinophiles est liée à la réponse à l'immunothérapie, il a été démontré que les éosinophiles33 34 soutiennent la surveillance immunitaire des lymphocytes T CD8+,46 et les ILC2 contribuent à l'efficacité antitumorale anti-PD1. 35 53 Nos travaux indiquent que les fonctions antitumorales des éosinophiles, et éventuellement celles des ILC2, peuvent être engagées par les lymphocytes T CD4+. La manière dont le rappel des lymphocytes T CD4+ recrute les éosinophiles dans la tumeur reste à déterminer. Cependant, des travaux récents fournissent une explication potentielle en montrant que pendant le blocage de PD1, la sécrétion d'IL-5 par CD4+ Les lymphocytes T induisent l'expansion des éosinophiles et leur recrutement.36 De plus, l'analyse des cytokines des homogénats de tumeurs et des explants de TDLN après une virothérapie contre la polio a également révélé une augmentation du GM-CSF et de l'IL favorisant les éosinophiles chez les souris immunisées contre la polio (figure supplémentaire S2B en ligne). ).
Figure 6 Les anticorps anti-polio préexistants sont associés à une survie plus longue après un traitement par Lerapolturev (PVSRIPO) ; les éosinophiles périphériques augmentent après Lerapolturev. (A, B) Les titres de neutralisation sérique de Lerapolturev avant traitement ont été mesurés dans des essais de phase I (A, Ph1, NCT01491893) et de phase II (B, Ph2, NCT02986178) sur le glioblastome récurrent (rGBM). Survie après séparation par titre de neutralisation médian (1 : 2000), ainsi que par titre moyen + SEM pour les patients survivants
Nous avons également découvert une relation inverse entre l'afflux d'éosinophiles tumoraux et la densité de Treg dans les tumeurs humaines, et la thérapie antigénique de rappel a entraîné une diminution des proportions de Treg qui covariaient avec l'afflux d'éosinophiles, impliquant un rôle réciproque des éosinophiles dans le contrôle des lymphocytes T CD4+. la biologie. Déterminer précisément comment les éosinophiles interviennent dans les effets antitumoraux après le rappel des lymphocytes T CD4+ et si les ILC2 contribuent à ce processus nécessite des études plus approfondies. Les différences de densité d'éosinophiles à elles seules ne semblent pas être un pronostic dans la plupart des types de cancer, à l'exception potentielle du LGG, où les taux d'éosinophiles étaient également les plus élevés parmi tous les autres types de tumeurs. Il est intéressant de noter qu’une corrélation négative entre les éosinophiles périphériques et le grade du gliome a été rapportée54 ; et les allergies respiratoires et l'atopie sont associées à une incidence plus faible de gliomes.55 Nous avons utilisé des stratégies de vaccination polarisantes Th2, cohérentes avec l'utilisation clinique des vaccins contre la polio et le tétanos, pour déchiffrer le potentiel antitumoral du rappel des lymphocytes T CD4+. Bien que, canoniquement, les polarisations Th1/Tc1, Th2/Tc2 et Th17/Tc17 s'excluent mutuellement, la thérapie antigénique de rappel dans ce contexte a produit Th1 (engagement des lymphocytes T CD8+, expression Tbet/IFN- dans CD{{ 20}} cellules T ); Th2 (recrutement d'éosinophiles/ILC2, expression de GATA3 dans les cellules T CD4+) ; et dans une moindre mesure, les caractéristiques polarisantes Th17 (expression ROR t dans les cellules T CD4+/CD8+). Ces données s’ajoutent aux preuves croissantes selon lesquelles diverses polarisations de lymphocytes T CD4+, au-delà de celle de Th1, peuvent générer des réponses immunitaires antitumorales compatibles et productives.56–58 Nos travaux montrent que, même si l’immunité préexistante limite la réplication virale au sein la tumeur, il améliore l’efficacité antitumorale de la virothérapie contre la polio. Une limite de ce travail est qu'il a été réalisé sur des systèmes murins qui ne capturent pas l'hétérogénéité des réponses des lymphocytes T CD4+ mémoire polio/Tet ou du TME chez l'homme. De plus, en raison de la croissance rapide des modèles de tumeurs utilisés, les tumeurs étaient relativement petites au moment du début du traitement. Néanmoins, ce qui suggère l'applicabilité de nos observations à l'homme, les titres d'anticorps neutralisant la poliomyélite avant le traitement étaient plus élevés chez les patients atteints de GBMr qui vivaient plus longtemps après la virothérapie contre la polio, et les taux sanguins d'éosinophiles ont augmenté chez la majorité des patients atteints de mélanome (8/12) après un traitement avec virothérapie contre la polio (Lerapolturev). À titre de mise en garde, des titres plus élevés d’anticorps neutralisants contre la poliomyélite peuvent refléter un statut fonctionnel immunitaire supérieur. Bien que nous ne puissions pas exclure cette possibilité, ces données révèlent au minimum que l’immunité préexistante n’empêche pas le succès de la virothérapie antipoliomyélitique chez les patients. Nos observations impliquent également que des doses multiples de Lerapolturev pourraient être justifiées pour accentuer les effets antitumoraux du rappel de la poliomyélite. En effet, les réponses chez les patients atteints de mélanome traités par Lerapolturev se sont regroupées dans la cohorte ayant reçu le plus grand nombre de traitements.10 Compte tenu de l'importance éminente des lymphocytes T CD4+ dans l'immunothérapie du cancer,1 32 des efforts croissants visent à tirer parti Les lymphocytes T CD4+ aident dans les tumeurs, par exemple, avec des anticorps agonistes CD40,59 ou avec des vaccins peptidiques comprenant des épitopes du CMH de classe II44 qui amorcent les CD4+ et CD8+ T spécifiques des néoantigènes. cellules.60 Nos travaux révèlent le potentiel d’exploiter les lymphocytes T CD4+ mémoire spécifiques aux vaccins infantiles pour activer les mécanismes antitumoraux à multiples facettes des lymphocytes T CD4+.
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