des études ont montré que l'autophagie joue un rôle important dans la régulation du dépôt cellulaire de LD Partie 2

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2.14. Dosage de la lactate déshydrogénase (LDH)

Selon les instructions du fabricant, les cellules ont été étalées dans une plaque 96-puits à 5 000 cellules/puits, et un milieu de culture a été collecté pour mesurer les niveaux de LDH avec un kit de dosage (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute). Ensuite, l'absorbance des échantillons a été détectée par le Multiskan Spectrum (Thermo Fisher Scientific) à 450 nm.

2.15. BODIPY493/503, BODIPY 581/591 C11 et coloration rouge foncé MitoTracker

Les cellules vivantes ont été lavées avec du PBS et incubées avec 2 ug/ml de BOD-IPY 493/503 (InvitrogenTM, Cat D3922) ou BODIPY 581/591 C11 (BD-C11）（2.0 μM, InvitrogenTM, Cat D3861) dans du PBS pendant 15 min à 37 degrés. Pour la coloration MitoTracker Deep Red, les cellules vivantes ont été incubées avec 0,5 ug/ml de MitoTracker Deep Red (InvitrogenTM, Cat M22426) dans du PBS pendant 30 min à 37 degrés. Puis les cellules ont été lavés deux fois dans du PBS et fixés dans du PFA à 3,5% pendant 10 min, suivis d'un lavage et d'une contre-coloration avec Hoechst 3342 (Sigma, Cat B2261) pendant 10 min avant d'être recouverts sur des lames de verre pour l'imagerie.combien de cistanche prendreDes images ont été observées et des photographies ont été capturées par microscopie à fluorescence (Olympus, Tokyo, Japon).

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2.16. Hoechst et coloration PI

Les cellules ont été colorées avec Hoechst 33,342（1 ul dilué dans 500ul PBS, Sigma, Cat B2261）et (ou）PI （0,1 ul dilué dans 500ul PBS, Solarbio,(cistanche sleep) CA1020) pendant 10 min et puis fixé et observé par microscopie à fluorescence (Olympus, Tokyo, Japon).

2.17.Cytométrie en flux

Les cellules ont été digérées et rincées avec D-hank puis colorées avec l'annexine V-FITC (5 ul dilué dans 500ul PBS)/PI (0,1 ul dilué dans 500ul PBS) kit d'apoptose (CA1020, Solarbio, Pékin, Chian ) selon le protocole du fabricant. Ensuite, les cellules apoptotiques ont été analysées par cytométrie en flux (guava easyCyterM 8, Millipore, USA). Les mesures du ROS mitochondrial et du potentiel de la membrane mitochondriale ont été effectuées comme publié 【12】. Les cellules SH-SY5Y ont été colorées avec MitoSOX （2,5 μM, Invitrogen, USA） ou avec JC1 （10 ug/ml, T-3168, Invitrogen, USA） à 37 degrés pendant 30 min. Après deux lavages avec du PBS, les cellules ont ensuite été remises en suspension dans du PBS froid contenant 1 % de FBS pour une analyse par cytométrie en flux. Les données ont été analysées avec le logiciel FCS Express (Guava Easy CyterM8, Millipore, Hayward, CA, USA).

2.18. Tests de respiration hippocampe

La fonction respiratoire mitochondriale dans les cellules SH-SY5Y vivantes a été mesurée à l'aide de l'analyseur de flux extracellulaire Seahorse (XFe96) (Agi-lent, Santa Clara, États-Unis) via des modifications du taux de consommation d'oxygène (OCR). Les cellules SH-SY5Y ensemencées à 3 × 10³ cellules / puits ont été autorisées à adhérer aux plaques de culture cellulaire Seahorse et à atteindre environ 80% de confluence au moment de l'expérience. (thé cistanche) Le lendemain, les cellules ont été prétraitées avec Ka puis exposés au MPP* pendant 24 h supplémentaires. L'OCR a été détecté dans des conditions basales, suivi de l'ajout séquentiel d'oligomycine 1 μM, de FCCP 1 μM, ainsi que de roténone et d'antimycine A 1 μM.

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2.19. analyses statistiques

Les données ont été présentées sous forme de moyenne ± SEM. La signification de la différence a été déterminée par le test t de Student, l'analyse de variance à deux voies ou l'analyse de variance à une voie (ANOVA) suivie du test post hoc de Tukey. La différence a été considérée comme significative à P<>

3. Résultats

Résultat1. Ka restaure le dysfonctionnement moteur et augmente les niveaux de dopamine dans le striatum des souris modèles MPTP/p PD

Pour étudier l'effet neuroprotecteur de la pathogenèse de Kaon PD, 4- des souris mâles C57BL/6 âgées d'un mois ont été injectées avec la neurotoxine MPTP pour établir le modèle MPTP/p PD et ont été traitées avec Ka (Fig. la). Après l'induction du modèle, le test du rotarod et le test du pôle ont été utilisés pour évaluer les performances motrices et comportementales des souris dans les différents groupes. Comme indiqué, le temps de performance du rotarod a été nettement réduit chez les souris traitées au MPTP, et cet effet a été empêché par Ka (Fig.1b). (bénéfices de cistanche tubulosa) Ka a également restauré les déficits comportementaux induits par MPTP, comme indiqué par les réductions du temps de rotation et du temps total dans le test du pôle (Fig. 1c et d), sans affecter le poids corporel des souris (Fig. le). De plus, l'analyse HPLC a montré que le niveau de dopamine dans le striatum était significativement diminué chez les souris atteintes de MPTP/p, et ce niveau a été restauré par le traitement au Ka (Fig. 1f). (extrait de cistanche tubulosa) Le traitement au Ka a également atténué le MPTP/ réduction induite par le p des niveaux d'acide dihydroxy-phényl acétique (DOPAC, un métabolite de la dopamine) dans le striatum (Fig.1g).superman herbes cistancheCes résultats suggèrent que Ka restaure le dysfonctionnement moteur et augmente les niveaux de dopamine dans le striatum chez les souris PD induites par MPTP.

Résultat 2. Ka atténue la perte de neurones DA dans le SNpc des souris modèles MPTP/p PD

Ensuite, pour mieux évaluer l'effet neuroprotecteur de la déficience neuronale DA induite par Kaon MPTP/p, nous avons examiné les neurones à tyrosine hydroxylase (TH) dans le SNpc murin par immunocoloration. Comme le montrent les figures 2a et b, MPTP/p a induit une réduction significative du nombre de neurones TH, qui a été atténuée par le traitement Ka. En outre, le nombre stéréologique de neurones totaux dans le SNpc, tel que défini par Nissl

Fig. 1. Le traitement Ka atténue le dysfonctionnement moteur et augmente les niveaux de dopamine dans le striatum des souris modèles MPTP/p PD.

(a) Diagramme schématique de la conception expérimentale. (cistanche tubulosa reddit) (b) Le temps passé sur la tige a été mesuré pour le test rotarod sur trois jours consécutifs. (cd) Le temps nécessaire pour faire demi-tour (temps de virage) et descendre un poteau (temps de montée) a été enregistré pour le test du poteau. (e) Le poids corporel des souris a été mesuré à la fin de l'étude. (fg) La dopamine (DA) et l'acide dihydroxy-phényl acétique (DOPAC) dans le striatum ont été analysés par chromatographie liquide à haute performance. Les données sont exprimées sous forme de moyenne ± SEM.n=9-10 pour chaque groupe dans (b,c,d);n=6-8 pour chaque groupe dans (f,g).ns, non significatif,* P<><><0.001, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.="" mptp,1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine;="" ka,kaempferol.="" staining,="" verified="" that="" the="" loss="" of="" th+="" cells="" reflected="" cellular="" death="" but="" not="" the="" downregulation="" of="" th="" expression="" and="" showed="" that="" ka="" treatment="" restored="" the="" decrease="" in="" the="" number="" of="" nissl-positive="" neurons="" in="" the="" snpc="" of="" mptp-treated="" mice="" from="" 43.3%="" to="" 25.4%="" (fig.="" 2c="" and="" d).in="" addition,="">bienfaits des bioflavonoïdesKa a amélioré de manière significative la réduction induite par MPTP de l'expression des protéines TH et DAT, telle que mesurée par Western blot (Fig.2e-g). Cette preuve confirme l'effet neuroprotecteur de Kaon dans le modèle de souris PD.

Résultat 3. Ka réduit l'accumulation de vacuoles LD et le stress oxydatif dans le SNpc des souris traitées au MPTP/p

De plus en plus de preuves ont montré l'implication des LD dans les NDD [10], de manière cohérente, nos travaux précédents ont identifié une augmentation des LD dans le SNpc des souris PD induites par MPTP [12]. Les LD peuvent être facilement identifiés et montrent des structures rondes à faible densité avec des contenu amorphe [28]. Normalement, les LD peuvent être dégradées par autophagie pour éviter l'accumulation [29].acheter cistanchePour déterminer si Ka pouvait réguler les LD dans la MP, l'accumulation de LD a été analysée par microscopie électronique à transmission (TEM) chez les souris SNpc de contrôle, MPTP/p et MPTP/p ＋ Ka. Comme montré dans nos précédents travaux [12], le nombre et la taille des LDs étaient

augmenté chez les souris MPTP / p par rapport aux témoins traités avec une solution saline (Fig. 3a et b) et ont été significativement réduits chez les souris traitées au Ka (Fig. 3c-e). De plus, chez les souris traitées au Ka, les LD ont été plus fréquemment observées à proximité également, enfermées ou dégradées par des autolysosomes, qui ont été définis comme des granules de lipofuscine denses aux électrons. Une coloration histologique plus poussée des neurones TH avec BODIPY, un colorant qui marque spécifiquement les lipides neutres et est couramment utilisé pour détecter les LD [30], a montré que le nombre et la taille de BODIPY plus LD dans le SNpc étaient plus élevés chez les souris PD que chez les témoins, et ont été significativement diminués par le traitement Ka (Fig.3f-h).

Si les LD ne peuvent pas être dégradées en temps opportun, les LD accumulées peuvent subir une peroxydation et contribuer au stress mitochondrial médié par les ROS [4],distancequi amplifie la neurotoxicité et la progression de la maladie. Par conséquent, nous avons examiné plus en détail les profils d'expression des gènes associés à la protection contre la toxicité des AG libres (Gpx8), la neutralisation des espèces oxydantes, les radicaux superoxydes (Sod3) et le peroxyde d'hydrogène (Cat), et le métabolisme des AG (Acsbg1 et Dbi) comme indiqué [31] , qui ont tous été considérablement réduits dans le SNpc des souris traitées au MPTP par rapport aux témoins, et ces effets ont été améliorés chez les souris PD traitées au Ka (Fig. 3i). De même, MPTP/p a également augmenté les niveaux d'expression de l'ARNm

Fig.2. Ka améliore la perte de neurones DA dans le SNpc de souris modèles MPTP/p PD.

( ab ) Microphotographies de neurones positifs pour la tyrosine hydroxylase (TH) ( a ) et comptages stéréologiques de neurones positifs pour la TH dans la substantia nigra pars compacta (SNpc) ( b ). Les barres d'échelle sont comme indiqué. ( cd ) Microphotographies de cellules positives au violet de crésyle ( c ) et comptages stéréologiques de cellules positives au violet de crésyle dans le SNpc ( d ). Barre d'échelle, 120 um. (par exemple) Analyse Western blot de l'expression des protéines TH et DAT dans le SNpc (e) et analyse quantitative (f, g). Les données quantifiées sont normalisées au groupe de contrôle salin. Les données sont exprimées en moyenne ± SEM.*P<><0.01, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.n="4-5" for="" each="" group.="" ve,="" vehicle,="" ka,="" kaempferol;="" mptp,1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydroloyridine..="" (for="" interpretation="" of="" the="" references="" to="" color="" in="" this="" figure="" legend,="" the="" reader="" is="" referred="" to="" the="" web="" version="" of="" this="" article.="" of="" nadph="" oxidase="" subunits="" such="" as="" nox1,="" nox2,="" and="" nox4="" in="" the="" snpc="" of="" mptp/p="" mice,="" which="" were="" further="" blunted="" by="" ka="" treatment="" (fig.="" 3j).="" taken="" together,="" these="" data="" suggest="" that="" ka="" alleviates="" mptp/p-induced="" ld="" accumulation,="" peroxidation,="" and="" ros-mediated="">

Résultat 4. Ka protège les cellules SH-SY5Y contre l'apoptose induite par le MPP plus

Le MPP, le métabolite actif du MPTP, inhibe les enzymes du complexe mitochondrial et provoque la mort cellulaire directement associée à la MP [32]. Nous avons ensuite étudié si Ka pouvait empêcher l'apoptose neuronale induite par le MPPt in vitro. Comme le montrent les figures 4a et b, MPPt (40 uM, 24 h) a induit la libération de LDH à partir de cellules SH-SY5Y, et Ka (30 et 60 uM) a considérablement atténué la libération de LDH sans affecter la survie des cellules (figure 4a). Puisque Ka a induit un effet protecteur substantiel à une concentration de 30 μM （Fig. 4b）, nous avons utilisé cette concentration dans des expériences ultérieures. Les résultats de la coloration Hoechst / PI ont également montré que Ka réduisait significativement le pourcentage de cellules présentant une condensation de la chromatine induite par le MPPt (Fig. 4c et d) et une apoptose cellulaire, comme en témoigne l'augmentation de l'intensité de fluorescence Hoechst (Fig. 4c) et le pourcentage de Cellules colorées Hoechst / PI (Hoechst plus / PI ') (Fig. 4e). De plus, comme détecté par cytométrie en flux, le MPP plus l'apoptose cellulaire induite, mis en évidence par le pourcentage accru de cellules colorées à l'annexine V (AV / PI et AV plus / PI plus) était protégé par Ka (Fig. 4f et g). De plus, Ka a notamment inversé les changements induits par le MPP dans l'expression des protéines liées à l'apoptose, comme en témoigne la régulation à la hausse de Bcl-2, la régulation à la baisse de Bax (Fig. 4hi-j) et le clivage réduit de la caspase-3 (Fig. 4h, k). Ces données suggèrent que Ka peut abolir les effets néfastes du MPPt sur la survie cellulaire.

Résultat 5. Ka supprime l'accumulation de LD induite par le MPPt et la peroxydation lipidique, qui médient les dommages mitochondriaux dans les cellules SH-SY5Y

Des études récentes ont montré qu'une accumulation inattendue de LD peut entraîner une augmentation du stress induit par la peroxydation lipidique et accélérer le dysfonctionnement mitochondrial, ce qui favorise la neurodégénérescence [10]. Nos travaux antérieurs ont également montré que l'augmentation des DL dans le SNpc était associée à la pathologie de la MP chez la souris [12]. Pour déterminer si l'effet protecteur de Ka était lié à l'accumulation de LD in vitro, nous avons d'abord effectué une coloration spécifique de LD dans des cellules SH-SY5Y à l'aide de BODIPY 493/503 et observé une augmentation du dépôt de LD (niveaux améliorés de lipides neutres)

Résultat 6. Ka favorise l'autophagie et diminue la production de mtROS dans les cellules SH-SY5Y traitées au MPP plus

Normalement, les LD sont délivrés aux lysosomes via l'autophagie et peuvent être décomposés en FA pour éviter la peroxydation. Cependant, des preuves indiquent que l'autophagie est altérée, ce qui joue un rôle crucial dans la MP [2]. Lorsque l'autophagie consiste à répartir les LD à décomposer en lysosomes (Fig. 6a), le processus est spécifiquement appelé lipophagie [2]. Pour déterminer si l'autophagie est impliquée dans l'effet neuroprotecteur de Ka, nous avons examiné les niveaux de protéines associées à l'autophagie. Comme le montre la Fig. 6b-d, dans les cellules SH-SY5Y en culture, le niveau de chaîne légère 3 (LC3) -II de la protéine associée aux microtubules a été nettement réduit, tandis que l'expression de p62 a été nettement augmentée dans les cellules traitées au MPP plus, tel que mesuré par immunotransfert, et cet effet a été significativement inversé par Ka. Nous avons en outre examiné les modifications de l'autophagie par immunomarquage pour LC3. Pour permettre aux autophagosomes de s'accumuler dans les cellules, de la bafilomycine a été ajoutée pour empêcher la fusion des autophagosomes avec les lysosomes. Comme indiqué, un nombre accru de points lacrymaux LC3b a été détecté dans les cellules traitées au MPP *, indiquant une dégradation autophagique altérée, et cet effet a également été inversé par Ka (Fig. 6e et f). Ces résultats indiquent que les LD dans les cellules SH-SY5Y sont mobilisées par autophagie pour une élimination éventuelle et que Ka peut favoriser l'autophagie pour réduire l'accumulation de lipides oxydés. Une peroxydation lipidique accrue peut exacerber les dommages mitochondriaux en augmentant le stress oxydatif mitochondrial [4]. De plus, le traitement Ka a considérablement réduit la génération robuste de mtROS, comme déterminé par la coloration MitoSOX (Fig. 6g et h), et a diminué le nombre de mitochondries dysfonctionnelles, comme déterminé par des étiquettes spécifiques aux mitochondries pour distinguer la respiration (MitoTracker rouge profond) et le total ( MitoTracker vert) mitochondries (Fig. 6i et j). De plus, pour avoir une vision directe des altérations mitochondriales, nous avons en outre détecté le taux de consommation d'oxygène (OCR) par l'analyseur Seahorse XF. Comme le montre la Fig. 6k, la respiration des mitochondries a été réduite dans les cellules traitées au MPPt, tandis que le traitement au Ka inverse évidemment ces dommages causés par le MPP plus (Fig. 6k).

Résultat7. L'inhibition de l'autophagie inverse l'effet suppresseur de l'accumulation de Kaon LD, du dysfonctionnement mitochondrial et des lésions neuronales DA in vitro

Pour déterminer si l'autophagie est l'un des principaux mécanismes par lesquels Ka intervient dans la neuroprotection de la DA, l'inhibiteur de l'autophagie 3-MA a été utilisé. Nous avons constaté que les effets inhibiteurs du Ka sur les lésions induites par le MPP#, y compris la diminution de l'accumulation de LD (Fig. 7a et b), la réduction de la production de mtROS (Fig. 7c et d) et l'atténuation du dysfonctionnement mitochondrial (Fig.7e et f) chez Les cellules SH-SY5Y ont été significativement bloquées par 3-MA. Étant donné que l'oxydation LD et le dysfonctionnement mitochondrial sont étroitement associés à la mort neuronale DA, nous avons ensuite examiné les neurones DA cultivés primaires. Nous avons traité les neurones mésencéphaliques TH plus en culture avec Ka et/ou MPPf et quantifié le nombre et la longueur des processus neuronaux TH plus par immunocoloration. L'analyse morphologique a révélé que le nombre et la longueur des processus neuronaux étaient nettement diminués par MPP plus et protégés par Ka, et cette protection était encore inversée par 3- MA (Fig.7g-i). Ces données indiquent que Ka atténue les dommages neuronaux DA en favorisant l'autophagie.

Résultat 8. Faire taire Atg5 a aboli la prévention médiée par Ka de la perte neuronale in vivo

Pour confirmer davantage que Ka protège contre la TH induite par MPTP / p plus la perte neuronale d'une manière dépendante de l'autophagie, nous avons réduit au silence Atg5 en microinjectant un virus adéno-associé (AAV) exprimant un shARN précédemment caractérisé contre Atg5 dans le mésencéphale bilatéral (Fig. .8a) comme décrit précédemment [25]. Dans des expériences préliminaires, nous avons observé que la transfection du shRNA Atg5 pendant 2 semaines atteignait une expression suffisante de la GFP dans les neurones TH plus (Fig. 8b) et inhibait l'expression de l'ATG5 dans le SNpc des souris injectées (Fig. 8c). Nous avons constaté que le knockdown d'Atg5-inversait l'effet neuroprotecteur de Ka, comme en témoigne l'expression protéique régulée à la hausse de TH (Fig. 8d et e) et l'augmentation du nombre de neurones TH plus (Fig. 8f et g). Ces données confirment davantage la contribution de l'autophagie à l'effet protecteur de Ka chez les souris PD. En conclusion, nous avons confirmé que Ka protège contre les lésions induites par MPTP/p en réduisant l'oxydation de LD et le dysfonctionnement mitochondrial en favorisant l'autophagie.

4. Discussion

La présente étude a montré que la petite molécule naturelle Ka était un facteur clé par lequel la signalisation autophagique pouvait inhiber la toxicité oxydative des lipides. Nos résultats ont démontré que la voie de l'autophagie est une boucle régulatrice clé par laquelle Ka atténue la peroxydation LD et les dommages mitochondriaux ultérieurs et se sont concentrés sur le rôle de la toxicité LD régulée par l'autophagie dans l'atténuation des dommages mitochondriaux tout en préventant la neurodégénérescence due à un stress oxydatif excessif (Fig. 9).

Les LD sont les sites intracellulaires de stockage des lipides neutres [5] et sont essentiels pour le métabolisme des lipides et l'homéostasie énergétique, tandis que le dysfonctionnement des LD a été lié à de nombreuses maladies [16]. L'accumulation de preuves a suggéré que les rôles que jouent les TA dans la biologie et la pathologie sont beaucoup plus larges qu'on ne le pensait auparavant. Dans le SNC, des preuves ont montré qu'une augmentation des LD dans les neurones et la glie est impliquée dans la pathologie neurodégénérative [10, 36]. En détail, des LD ont été détectés à la fois dans les axones des neurones d'aplysie cultivés in vitro [ 37 ] et dans des coupes de cerveau de Modèles de la maladie de Huntington [38]. De plus, il a été montré que les neurones sont particulièrement sensibles à la toxicité des lipides, et l'accumulation de LD qui ne peuvent pas être éliminées en temps opportun conduit à une peroxydation accélérée des LD et peut donner lieu à une neurodégénérescence [17].

L'accumulation de lipides dans les neurones hyperactifs est toxique non seulement en raison de la sensibilité de ces lipides à la peroxydation. De plus, le contenu des LD en excès peut entrer dans des voies métaboliques non oxydantes, déclenchant une production excessive de céramide, qui est toxique pour les cellules [39]. Des études récentes ont également montré que dans les cellules déficientes en LD, les AG peuvent être convertis en acylcarnitines, qui provoquent alors un dysfonctionnement mitochondrial et la production de ROS [40]. Ces processus sont susceptibles d'avoir des conséquences spécifiques et profondes sur les neurones hyperactifs car les mitochondries dysfonctionnelles compromettent la capacité de consommation des AG et la production de mtROS provoque en outre une peroxydation des lipides membranaires.

Ainsi, l'homéostasie LD doit être bien contrôlée dans les neurones, ce qui est essentiel pour éviter la toxicité et, en fin de compte, maintenir la santé du cerveau. Dans la présente étude, nous avons découvert que la petite molécule naturelle Ka inhibe la toxicité LD neuronale qui se manifeste par une accumulation accrue de LD, une peroxydation lipidique élevée et une expression génique liée à la toxicité lipidique régulée positivement dans les cellules SH-SY5Y insultées par le MPP#. Plus important encore, nous avons également montré que le traitement Ka réduit le 45]. Dans la présente étude, nous avons observé une autophagie/lipophagie défectueuse dans les cellules neuronales blessées par MPPt, y compris des niveaux réduits de LC3-II et une expression élevée de p62, et une augmentation du nombre de points lacrymaux LC3B déposés dans les cellules. La lipophagie défectueuse dans les cellules SH-SY5Y blessées a été inversée par un traitement avec Ka. En conséquence, Ka a diminué l'accumulation de LD oxydées, de mitochondries endommagées et de génération de mtROS dans les cellules SH-SY5Y traitées au MPP#. Fait important, l'inhibition de l'autophagie par 3- MA a aboli l'élimination médiée par Ka des LD oxydées et des mitochondries endommagées et l'atténuation des lésions des neurones DA in vitro. De plus, l'inhibition de l'autophagie par l'inactivation d'Atg5 in vivo a inversé les effets protecteurs de la dégénérescence neuronale de Kaon DA dans le modèle de souris PD induite par MPTP. Collectivement, ces résultats indiquent que Ka inhibe les dommages mitochondriaux liés à la toxicité LD en favorisant l'autophagie dans un modèle expérimental de PD.

L'accumulation de preuves indique que la génération accrue de mtROS est une caractéristique principale des neurones à haute activité et a été observée dans de nombreux NDD, y compris la MP [46]. Les rapports indiquant si les ROS sont une cause ou une conséquence de la formation de LD sont contradictoires [47,48]. Fait intéressant, nos résultats in vitro ont démontré que l'inhibition pharmacologique de la peroxydation LD avec l'o-tocophérol empêchait la génération de mtROS et les anomalies potentielles de la membrane mitochondriale et atténuait les réductions mitochondriales, comme en témoigne la coloration Tomm20 dans les cellules SH-SY5Y, qui soutient l'idée que la peroxydation LD joue un rôle causal dans le dysfonctionnement mitochondrial induit par le MPP et la génération de mtROS. Cependant, il est possible qu'une ROS élevée accélère initialement la formation de LD, et par la suite, les LD induisent une génération supplémentaire de ROS et exacerbent les niveaux de ROS intracellulaires et mitochondriaux.

Dans la présente étude, nous avons montré que les souris atteintes de MP induite par le MPTP avaient des niveaux élevés d'accumulation de LD, qui s'accompagnaient d'une perte accrue de neurones DA, d'un stress accéléré par les ROS et de déficits comportementaux. Le traitement Ka a empêché la toxicité LD in vitro et amélioré la perte neuronale DA et les déficits comportementaux dans le modèle de souris PD, et ces effets étaient dépendants de l'autophagie. Par conséquent, il est raisonnable de conclure que Ka favorise l'autophagie, et cette autophagie accrue diminue l'accumulation de LD oxydée, réduit la production de mtROS et atténue les dommages mitochondriaux dans les neurones DA, ce qui contribue à l'inhibition de la toxicité LD, atténuant ainsi la pathologie PD (Fig. . 9).

Financement

Cette recherche a été soutenue par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n° 81903587), le projet financé par la Fondation des sciences postdoctorales de Chine (n° 2019M661807), la Fondation des sciences naturelles de la province du Jiangsu (n° BK20190120) et le Projet ouvert de discipline de première classe en matière de médecine chinoise de l'Université de médecine chinoise de Nanjing (n° 2020YLXK006) et projet majeur d'innovation pharmaceutique (n° 2018ZX09711001-003-007).

Cet article est extrait de Redox Biology 41 (2021) 101911