Les extraits de Cistanche sont-ils utiles pour traiter la MP (maladie de Parkinson) ?

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Introduction : la mutation DJ-1 est une cause dela maladie de Parkinson(PD). Leucine166Proline (L166P) et C106S sont deux mutations DJ-1 importantes. Dans cette étude, nous avons établi des modèles cellulaires de PD(la maladie de Parkinson) et a étudié les effets deExtraits de Cistancheet des composés bioactifs clés, notamment l'actéoside, l'échinacoside, l'acide caféique et les glycosides totaux de Cistanche sur ces deux modèles. Méthodes : Après avoir exprimé les plasmides L166P et C106S DJ -1 marqués FLAG dans Escherichia coli, les plasmides exprimés ont été collectés, traités avec une enzyme de restriction et identifiés par électrophorèse de l'ADN. Après purification, les plasmides L166P DJ-1 et C106S DJ-1 ont été transfectés séparément dans des cellules SH-SY5Y à l'aide de liposomes. Les cellules SH-SY5Y transfectées ont été détectées par western blot et immunocytochimie. La viabilité cellulaire a été déterminée à l'aide d'un test MTT.

Résultats : Western blot et immunocytochimie ont montré que L166P et C106S DJ-1 étaient fortement exprimés dans les cellules SH-SY5Y transfectées. Les tests MTT ont montré que la transfection avec L166P ou C106S DJ -1 réduisait la viabilité des cellules SH-SY5Y exposées à H, O, par rapport aux cellules SH-SY5Y non transfectées. En outre,Extraits de Cistancheet des composés bioactifs clés, notamment l'actéoside, l'échinacoside, l'acide caféique et les glycosides totaux de Cistanche, ont inhibé de manière significative les diminutions de la viabilité cellulaire causées par les cellules SH-SY5Y transfectées par H, O, inL166P et C106S DJ-1-. Conclusions : Ces résultats suggèrent que nous avons réussi à établir des modèles de cellules SH-SY5Y transfectées par H, O, induites par L166P DJ-1- et C106S DJ-1-transfectées avec succès.(la maladie de Parkinson)etExtraits de Cistanchepeut donc être utile pour traiter la MP(la maladie de Parkinson).

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DISCUSSION

Les mutations de DJ‐1 sont étroitement associées à la MP autosomique récessive précoce(la maladie de Parkinson)(Bonifati et al., 2003 ; Park et al., 2015). Dans une famille italienne, la cause est une mutation faux-sens dans DJ‐1 (L166P) (Bonifati et al., 2003). Leu‐166 se localise au milieu de l'hélice C‐terminale (Bonifati et al., 2003). La présence de Pro, un puissant brise-hélice, déstabilise probablement l'hélice terminale chez le mutant DJ‐1 (Bonifati et al., 2003), entraînant le dépliement de la partie C‐terminale de la protéine, ce qui nuirait à son homogénéité. oligomérisation (Bonifati et al., 2003). Dans les cellules transfectées, L166P DJ‐1 est instable en raison d'une dégradation excessive (Bonifati et al., 2003 ; Gorner et al., 2004 ; Moore, Zhang, Dawson, & Dawson, 2003). Bonifati et al. (2003) ont suggéré que la mutation L166P altère l'homodimérisation et la fonction normale de DJ -1, et conduit ainsi à l'apparition précoce de la MP(la maladie de Parkinson).

Dans cette étude, nous avons découvert que L166P DJ-1 est présent dans un polymère/complexe d'une masse moléculaire de 70 kDa dans les cellules SH-SY5Y transfectées. La structure de DJ-1 a été supposée adopter la même structure sandwich a/ que la protéase PH1704 (Bonifati et al., 2003). En raison des structures similaires de DJ-1 et PH1704, nous avons supposé que, comme PH1704, DJ-1 forme des agrégats supérieurs (trimères de gradateurs). Gorer et al. (2004) ont montré qu'au sein des cellules transfectées et des lymphocytes de la MP(la maladie de Parkinson)patients, le monomère L166P DJ-1 est présent dans les structures supérieures des cellules transfectées et des lymphocytes de la MP(la maladie de Parkinson)les patients. Cela peut être le résultat direct du mauvais repliement de la protéine L166P DJ-1 ou de la formation de complexes entre le monomère L166P DJ-1 et d'autres protéines. De plus, en plus de la structure de la protéine, la mutation L166P DJ-1 a également modifié la fonction antioxydante de DJ-1 (Macedo et al., 2003 ; Taira et al, 2004). Ceci est remarquable, car le stress oxydatif est un facteur important dans la MP(la maladie de Parkinson), et les cellules SH-SY5Y transfectées avec L166P DJ-1 étaient plus sensibles à H, O, que les cellules non transfectées. Combiné avec les recherches précédentes selon lesquelles des cellules SH-SY5Y transfectées par DJ-1 de type sauvage ont été établies avec succès dans notre laboratoire (Zhang, Wang et Pu, 2007), nous suggérons que H, O, induit L166P DJ{{10 }} les cellules SH-SY5Y transfectées sont un nouveau modèle cellulaire utile de la MP(la maladie de Parkinson).

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Il a été rapporté que DJ-1 réduit le stress oxydatif (Taira et al, 2004 ; Zhou & Freed, 2005). L'un des mécanismes est l'oxydation de la protéine elle-même (Taira et al., 2004). Parmi les trois résidus Cys de DJ-1, Cys-106 est le plus sensible au stress oxydatif. De plus, le

la fonction antioxydante de DJ-1 est régulée par l'oxydation de Cys-106 (Freed & Zhou, 2006), et la mutation de Cys-106 entraîne la perte de la fonction antioxydante de DJ-1 (Blackinton et al, 2009 ; Kinumi, Kimata, Taira, Ariga et Niki, 2004). DJ -1 agit également comme un chaperon moléculaire qui inhibe la formation d'agrégats de -synucléine (Shendelman et al., 2004) lorsque Cys-106 est oxydé en acide sulfinique (Zhou & Freed, 2005). Ces résultats indiquent que Cys-106 est un contributeur clé à la bonne fonction DJ-1. Comme le montre le tableau 1, les cellules SH-SY5Y transfectées avec C106S DJ -1 étaient plus sensibles à H, O que les cellules non transfectées. Sur la base des recherches précédentes (Zhang et al., 2007), cela suggère également que les cellules SH-SY5Y transfectées par H, O, C106S DJ -1- peuvent également être un modèle cellulaire utile de la maladie de Parkinson(la maladie de Parkinson).

En utilisant des cellules SH-SY5Y transfectées avec L166P DJ-1 ou C106S DJ-1, nous avons détecté leeffet des extraits de Cistancheet des composés bioactifs clés, notamment l'actéoside, l'échinacoside, l'acide caféique et les glycosides totaux de Cistanche sur HO, ont induit des réductions de la viabilité cellulaire. Les présents résultats montrent que l'actéoside, l'échinacoside, l'acide caféique et les glycosides totaux de Cistanche ont tous augmenté la viabilité cellulaire d'une manière dépendante de la concentration, indiquant une relation stable et linéaire entre les niveaux de L166P DJ-1et C106S DJ-1 et la viabilité des cellules SH-SY5Y.

En résumé, nous avons établi avec succès des modèles de cellules SH-SY5Y transfectées par H, O2 induites par L166P DJ-1-et C106S DJ-1-transfectées avec succès.(la maladie de Parkinson)et a confirmé queExtraits de Cistancheamélioré la neurotoxicité induite par H, O, dans ces deux modèles. Nous prévoyons que ces deux modèles cellulaires seront efficacement utilisés pour la MP(la maladie de Parkinson)recherche etExtraits de Cistanchepeut donc être utile pour traiter la MP(la maladie de Parkinson)à l'avenir.

Bienfaits des extraits de Cistanche : anti-la maladie de Parkinson

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