PARTIE 2 L'échinacoside inhibe la libération de glutamate en supprimant l'entrée de Ca2 plus dépendante de la tension et la protéine kinase C dans les terminaisons nerveuses cérébrocorticales du rat

Pour plus d'information veuillez contacter:Joanna.jia@wecistanche.com

CLIQUEZ ICI POUR LA PARTIE 1

3. Débat

Dans cette étude, l'échinacoside, un composé actif dansHerba Cistanche, a inhibé la libération de glutamate induite par l'4-aminopyridine dans les terminaisons nerveuses du cortex cérébral du rat. Les mécanismes sous-jacents possibles de l'inhibition de la libération de glutamate médiée par l'échinacoside sont étudiés et discutés plus en détail ici.

Cistanche deserticola a de nombreux effets, cliquez ici pour en savoir plus

3.1. Mécanismes sous-jacents à l'inhibition de la libération de glutamate par l'échinacoside Libération de glutamate

évoqué par l'4-aminopyridine comprend deux composants : un composant dépendant du Ca2 plus physiologiquement pertinent, qui est produit par l'exocytose des vésicules synaptiques contenant du glutamate ; et un composant Ca2 plus indépendant, qui provient d'une dépolarisation prolongée provoquant un déplacement médié par le potentiel membranaire de l'état d'équilibre du transporteur de glutamate vers l'extérieur, affectant ainsi l'efflux cytosolique du glutamate [31]. Ici, nous avons observé queéchinacosiden'a pas inhibé de manière significative la libération de glutamate induite par l'4-aminopyridine en présence d'un milieu sans Ca2 plus (libération indépendante de Ca2 plus). De plus, l'observationéchinacoside-l'inhibition médiée par la 4-libération de glutamate induite par l'aminopyridine a été efficacement empêchée par la bafilomycine A1 (qui épuise la teneur en glutamate des vésicules synaptiques), mais pas par le DL-TBOA (qui inhibe de manière non sélective tous les sous-types de transporteurs d'acides aminés excitateurs). Ces résultats suggèrent queéchinacosideaffecte l'exocytose dépendante du Ca2 plus de la libération de glutamate sans affecter l'efflux cytosolique indépendant du Ca2 plus du glutamate par l'inversion du transporteur de glutamate de la membrane plasmique de la terminaison nerveuse. Dans les terminaisons synaptiques, l'inhibition du canal Na plus ou l'activation du canal K plus stabilise l'excitabilité membranaire et par conséquent réduit l'entrée évoquée de Ca2 plus et la libération de neurotransmetteurs [32,33]. Par conséquent, le mécanisme potentiel sous-jacentéchinacosideL'inhibition de la libération de glutamate médiée implique une réduction de l'excitabilité synaptosomale. Cependant, cette possibilité est intenable sur la base de deux observations : (1) la dépolarisation du potentiel de membrane induite par la 4- aminopyridine, mesurée avec le colorant sensible au potentiel de membrane DiSC3(5) n'a pas été affectée par l'ajout deéchinacoside; et (2) l'échinacoside n'a pas affecté la libération de glutamate indépendante du Ca2 plus induite par l'4-aminopyridine, un composant de la libération qui ne dépend que du potentiel de membrane [31]. Si l'effet n'est pas causé par la suppression de l'excitabilité synaptosomale, il peut se manifester par une réduction de l'activité des canaux Ca2 plus Cav2.2 (type N) et Cav2.1 (type P/Q) couplée à une exocytose du glutamate dans le terminaisons nerveuses [34–36]. En utilisant fura-2, nous démontrons queéchinacosideréduit significativement l'augmentation de la concentration de Ca2 plus induite par l'4-aminopyridine. De plus, nos données montrent que l'effet inhibiteur deéchinacosidesur 4-la libération de glutamate évoquée par l'aminopyridine a diminué de 42,4 % ˘ 2,3 % à 12,1 % ˘ 3,9 % après exposition à un bloqueur de Cav2.2 (type N) et Cav2.1 (type P/Q) Ca2 ainsi que des canaux. De plus, nous avons observé queéchinacosidea continué à inhiber de manière significative la libération de glutamate induite par l'4-aminopyridine en présence d'inhibiteurs de libération intracellulaire de Ca2 plus. Ces résultats indiquent que la suppression simultanée de l'activité des canaux Ca2 plus Cav2.2 (type N) et Cav2.1 (type P/Q) est le mécanisme potentiel sous-jacent.échinacoside- Inhibition de la libération de glutamate médiée. Cependant, l'activation combinée de l'activité du canal Ca2 plus Cav2.2 (type N) et Cav2.1 (type P/Q) n'a pas pu bloquer l'action deéchinacosidetotalement. Par conséquent, d'autres types non identifiés de canaux Ca2 plus ou d'autres voies présynaptiques peuvent être impliqués dans l'inhibition. Par exemple, les récepteurs GABAA sont présents au niveau présynaptique et il a été démontré que leur activation inhibe l'influx de Ca2 et la libération de glutamate [37]. Dans la présente étude, les antagonistes des récepteurs GABAA SR95531 et la bicuculline n'ont pas bloqué l'inhibition de la libération de glutamate médiée par l'échinacoside, ce qui suggère que les récepteurs GABAA ne sont pas impliqués dans la réduction de l'activité du canal Ca2 plus voltage-dépendant et dans l'inhibition subséquente de la libération de glutamate.

L'entrée de Ca2 plus par les canaux Ca2 plus dépendants de la tension active plusieurs protéines kinases associées à la libération de glutamate dans les terminaisons nerveuses, notamment la protéine kinase activée par un mitogène, la protéine kinase C et la protéine kinase A. Ici, nous démontrons que les inhibiteurs de la protéine kinase C antagonisent efficacement leéchinacoside-l'inhibition médiée de la libération de glutamate ; néanmoins, l'inhibiteur de la protéine kinase activée par un mitogène PD98059 ou l'inhibiteur de la protéine kinase A H89 était inefficace. En plus, ça. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 de 13 4-la phosphorylation induite par l'aminopyridine de la protéine kinase C a diminué dans les synaptosomes après un prétraitement avecéchinacosideà une concentration efficace pour inhiber la libération de glutamate. Par conséquent, la voie de signalisation duéchinacosideL'inhibition de la libération de glutamate médiée peut impliquer la protéine kinase C. La protéine kinase C est un système de signalisation intracellulaire important qui est présent au niveau présynaptique et joue un rôle crucial dans l'exocytose des neurotransmetteurs. Par exemple, plusieurs protéines synaptiques impliquées dans le trafic ou le recrutement et l'exocytose des vésicules synaptiques, comme le substrat myristoylé de la kinase C riche en alanine, sont phosphorylées par la protéine kinase C [38,39]. Ce processus de phosphorylation peut être augmenté par l'entrée de Ca2 plus stimulée par la dépolarisation, ce qui facilite la libération de glutamate [40]. Par conséquent, nous pouvons raisonnablement supposer que l'effet inhibiteur deéchinacosidesur Ca2 plus l'entrée observée ici peut réduire l'activité de la protéine kinase C et par conséquent la libération de glutamate.

3.2. Implications thérapeutiques

L'excitotoxicité, un processus pathologique causé par une libération excessive de glutamate et l'activation des récepteurs du glutamate, est la principale cause de mort neuronale dans les troubles cérébraux aigus et chroniques tels que les accidents vasculaires cérébraux, les lésions cérébrales traumatiques, les maladies de Parkinson et d'Alzheimer [13,41], et les stratégies thérapeutiques. impliquant l'inhibition de la libération de glutamate peuvent être des stratégies neuroprotectrices prometteuses pour le traitement de ces maladies.Échinacosidea été confirmé pour pénétrer la barrière hémato-encéphalique (BHE) et présente des effets neuroprotecteurs dans divers modèles in vivo de neurotoxicité [8,10–12,42]. Bien que le mécanisme de ces effets neuroprotecteurs ne soit pas complètement compris, plusieurs mécanismes possibles ont été rapportés, notamment l'inhibition de la réponse inflammatoire, la stabilisation de la fonction mitochondriale, l'antioxydation, le piégeage des radicaux libres et l'imitation de la fonction neurotrophique [5,9,12,42]. Dans la présente étude, la capacité de l'échinacoside à réduire la libération de glutamate par les terminaisons nerveuses peut également expliquer en partie son mécanisme neuroprotecteur. Cependant, la question de savoir si cet effet contribue au potentiel thérapeutique apparent de l'échinacoside dans les troubles cérébraux associés à l'excitotoxicité du glutamate justifie des recherches supplémentaires.

4. Matériels et méthodes

4.1. Produits chimiques

L'ester de fura-2-acétoxyméthyle (Fura-2-AM) et l'iodure de 3',3',3'-dipropylthiadicarbocyanine [DiSC3(5)] ont été achetés chez Invitrogen (Carlsbad, Californie, États-Unis). ω-conotoxine MVIIC, rottlerine, 2-[1-(3-diméthylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl) maléimide ( GF109203X), 5,6,7,13-tétrahydro-13-méthyl-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,{ Le {27}}c]carbazole-12-propanenitrile (Go6976) et le N-[2-(p bromocinnamylamino)éthyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H89) ont été achetés auprès de TocrisBioscience (Bristol, Royaume-Uni). Échinacoside, dantrolène, DL-thréo-bêta-benzyl-oxyaspartate (DL-TBOA),7-chloro-5-(2-chlorophénie)-1,5-dihydro -4,1-benzothiazépine-2(3H)-one (CGP37157), 2-(2-amino-3-méthoxyphényl)-4 H-1-benzopyran-4-one) (PD98059), éthylène glycol bis( -aminoéthyl éther)-N,N,N1,N1-acide tétraacétique (EGTA) et tous les autres réactifs ont été achetés de Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, États-Unis).

4.2. Animaux

Des rats mâles Sprague-Dawley âgés de deux mois ont été utilisés. Les animaux ont été logés dans des conditions environnementales standardisées (22 ˘ 1 ˝C ; 50 % d'humidité relative ; cycle lumière/obscurité de 12 h) et ont eu un accès illimité à la nourriture et à l'eau. Les animaux ont été sacrifiés par décapitation et le cortex cérébral a été rapidement prélevé à 4˝C. Les procédures expérimentales ont été approuvées par le Fu Jen InstitutionalAnimal Care and Utilization Committee (A10259), conformément au National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Tous les efforts ont été faits pour minimiser la souffrance des animaux et pour utiliser un nombre minimum d'animaux nécessaires pour produire des résultats fiables.

4.3. Préparations synaptosomales

Les synaptosomes ont été purifiés à partir du cortex cérébral de rats sur des gradients de Percoll discontinus comme décrit précédemment [43,44]. Brièvement, le tissu a été homogénéisé dans un milieu contenant 0.32 M de saccharose (pH 7,4), l'homogénat a été centrifugé pendant 10 min à 3000ˆ g (5{{25 }}00 rpm dans un rotor JA 25.5 ; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) et 4 ˝C, et le surnageant a été centrifugé à nouveau pendant 12 min à 14 500 ˆ g ( 11,000 rpm dans un rotor JA 25.5). Le culot a été doucement remis en suspension dans du saccharose 0,32 M (pH 7,4) et une aliquote de cette suspension synaptosomale (2 ml) a été placée sur un gradient discontinu de Percoll de 3 ml contenant du saccharose 0,32 M, de l'EDTA 1 mM, du DL-dithiothréitol 0,25 mM et 3 %, 10 % et 23 % Percoll (pH 7,4). Après centrifugation à 32 500ˆ g (16 500 rpm dans un rotor JA 20.5) pendant 7 min à 4 ˝C, les synaptosomes ont été récupérés entre les bandes Percoll 10% et 23%, et ils ont été dilués dans un volume final de 30 mL de milieu tampon HEPES (NaCl 140 mM, KCl 5 mM, NaHCO3 5 mM, MgCl2¨ 6H2O 1 mM, Na2HPO4 1,2 mM, glucose 10 mM et HEPES 10 mM (pH 7,4)). Après une nouvelle centrifugation à 27,000ˆ g (15 000 tr/min dans un JA 25,5) pendant 10 min, le culot de synaptosome a été remis en suspension dans 3 ml de milieu tampon HEPES et la teneur en protéines a été déterminée à l'aide d'un test de Bradford. Enfin, 0,5 mg de la suspension de synaptosomes a été dilué dans 10 ml de milieu tampon HEPES et centrifugé à 3000ˆ g (5000 rpm dans un rotor JA 20.1) pendant 10 min. Le surnageant a été jeté et les culots contenant les synaptosomes ont été stockés sur de la glace et utilisés dans les 4 à 6 h.

4.4. Libération de glutamate

La libération de glutamate a été dosée par fluorimétrie en ligne comme décrit précédemment [45,46]. Les culots synaptosomiques ont été remis en suspension dans un milieu tampon HEPES (0 0,5 mg/mL) et préincubés à 37 °C pendant 10 min en présence d'albumine de sérum bovin 16 µM pour lier tous les acides gras libres libérés des synaptosomes pendant la préincubation. Une aliquote 2- mL des synaptosomes a été transférée dans une cuvette agitée contenant 2 mM de NADP plus , 50 unités de glutamate déshydrogénase et 1,2 mM de CaCl2, et la fluorescence FL du NADPH a été mesurée dans un Perkin-Elmer LS{{ 14}} spectrofluorimètre (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) à des longueurs d'onde d'excitation et d'émission de 340 et 460 nm, respectivement. Comme les synaptosomes ne se prêtent pas à la stimulation électrique, le bloqueur des canaux potassiques 4-aminopyridine a été utilisé pour stimuler la libération de glutamate. 4- L'aminopyridine déstabilise le potentiel membranaire et on pense qu'elle provoque une dépolarisation spontanée répétitive dépendante des canaux Na plus qui se rapproche étroitement de la dépolarisation in vivo du terminal synaptique qui conduit à l'activation des canaux Ca2 plus dépendants de la tension et à la libération de neurotransmetteurs [47 ]. Les données ont été obtenues à des intervalles de 2 s. Un standard de glutamate exogène (5 nmol) a été ajouté à la fin de chaque expérience. La valeur du changement de fluorescence FL produit par l'ajout d'étalon a été utilisée pour calculer le glutamate libéré en nanomoles de glutamate par milligramme de protéine synaptosomale (nmol/mg). Les valeurs de libération citées dans le texte sont des niveaux atteints à l'état d'équilibre après 5 min de dépolarisation (nmol/mg/5 min). Les données cumulatives ont été analysées à l'aide des feuilles de calcul Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, États-Unis) et MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, États-Unis).

4.5. Potentiel de la membrane plasmique

Le potentiel de membrane plasmique a été déterminé avec un colorant sensible au potentiel de membrane, DiSC3(5) [48]. Les synaptosomes ont été remis en suspension dans un milieu tampon HEPES et des aliquotes de 2 ml ont été transférées dans une cuvette agitée contenant 5 µM de DiSC3(5) à 37 ˝C dans un spectrofluoromètre Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, États-Unis). Après avoir laissé le mélange s'équilibrer pendant 3 min, la fluorescence FL a été déterminée à des longueurs d'onde d'excitation et d'émission de 646 et 674 nm, respectivement. Les données ont été recueillies à des intervalles de 2 s. Les données cumulatives ont été analysées à l'aide de MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, États-Unis) et exprimées en unités de fluorescence FL.

4.6. Concentration cytosolique de Ca2 plus ([Ca2 plus ]C)

Le [Ca2 plus ]C a été mesuré avec l'indicateur Ca2 plus fura-2. Les synaptosomes (0.5 mg/mL) ont été préincubés dans un milieu tampon HEPES contenant 5 µM fura-2 et 0.1 mM CaCl2, pendant 30 min à 37 ˝C dans un test agité tube. Après le chargement de fura-2, les synaptosomes ont été centrifugés dans une microcentrifugeuse pendant 30 s à 3 000 g (5 000 tr/min). Les culots synaptosomiques ont été remis en suspension dans un milieu tampon HEPES et la suspension synaptosomale a été agitée dans une cuvette thermostatée dans un spectrofluorimètre Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Du CaCl2 (1 mM) a été ajouté après 3 minutes et d'autres additions ont été effectuées après 10 minutes supplémentaires. Les données de fluorescence ont été accumulées à des longueurs d'onde d'excitation de 340 et 380 nm (longueur d'onde d'émission 505 nm) à des intervalles de 2 s. [Ca2 plus ]C (nM) a été calculé à l'aide des procédures d'étalonnage [49] et des équations décrites précédemment [50]. Les données cumulées ont été analysées à l'aide de MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, États-Unis).

4.7. Western blot

Les synaptosomes ont été homogénéisés dans un tampon de lyse (tampon HEPES 10 mM, pH 7,4), 1 % de Triton X-100 et un mélange d'inhibiteurs de protéase. Les lysats ont été clarifiés par centrifugation et la concentration en protéines a été déterminée à l'aide d'un kit de dosage des protéines (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Des quantités égales de protéines ont été séparées par électrophorèse sur gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide (SDS-PAGE) et transférées sur la membrane de nitrocellulose. Les membranes ont été bloquées avec une solution saline tamponnée au Tris contenant 5 % de lait faible en gras et incubées avec un anticorps primaire approprié (phospho-protéine kinase C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, États-Unis) pendant une nuit à 4 ˝C. Après trois lavages dans une solution saline tamponnée au Tris, la membrane a ensuite été traitée avec l'anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort (1: 3000) pendant 1 h à température ambiante. Les membranes ont ensuite été lavées au moins trois fois avec une solution saline tamponnée au Tris et visualisées à l'aide du système de chimiluminescence amélioré (Amersham, Buckinghamshire, Royaume-Uni). Une aliquote d'échantillons a été chargée et sondée avec un anticorps anti-PKC pour la détection de PKC comme contrôle de charge. Le niveau d'expression ou de phosphorylation a été évalué par la densité de bande, qui a été quantifiée par densitométrie. La quantification densitométrique des bandes a été analysée à l'aide du logiciel Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Analyses statistiques

Les données ont été obtenues à partir d'une seule préparation synaptosomale et n'étaient pas indépendantes les unes des autres. Pour tester la signification de l'effet d'un médicament par rapport au contrôle, un test t de Student bilatéral a été utilisé. Lorsqu'une comparaison supplémentaire était nécessaire (par exemple, si un deuxième traitement influençait l'action de l'échinacoside), une ANOVA unidirectionnelle suivie du test de Tukey a été utilisée. L'analyse a été réalisée via le logiciel SPSS (17.0 ; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Les données sont exprimées en moyenne ˘ SEM ; la signification a été évaluée à p < 0.05="" pour="" toutes="" les="" mesures="">

5. Conclusions

Il s'agit de la première étude démontrant queéchinacosideinhibe la libération de glutamate par les synaptosomes cérébrocorticaux du rat en réduisant l'afflux de Ca2 plus par les canaux Cav2.2 et Cav2.1, et cette inhibition de la libération dépend probablement de la suppression de la voie de la protéine kinase C, au moins en partie. La présente découverte est précieuse car elle fournit un nouvel aperçu des mécanismes d'action de l'échinacoside dans le cerveau.

Remerciements :Ce travail a été soutenu par une subvention du ministère des Sciences et de la Technologie (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Les contributions de l'auteur:Tzu Yu Lin et Su Jane Wang ont conçu et conçu les expériences ; Cheng Wei Lu a réalisé les expériences; Cheng Wei Lu et Shu Kuei Huang ont analysé les données ; Su Jane Wang a écrit le papier.

Les conflits d'intérêts:Les auteurs ne déclarent aucun conflit d'intérêts.

Conflits d'intérêts : Les auteurs ne déclarent aucun conflit d'intérêts.

Références

1. Tu, PF ; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analyse des glycosides phényléthanoïdes deCistanche aux herbespar RP-HPLC. Acta Pharma. Péché. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK ; Meyer, AS ; Molgaard, P. Effets antioxydants synergiques des alcamides, des dérivés de l'acide caféique et des fractions polysaccharidiques d'Echinacea purpurea sur l'oxydation in vitro des lipoprotéines humaines de basse densité. J. Agric. Chimie alimentaire. 2005, 53, 9413-9423. [Référence croisée] [PubMed]

3. Dapas, B. ; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Immunomodulation médiée par un sirop à base de plantes contenant un extrait standardisé de racine d'échinacée: une étude pilote chez des sujets humains en bonne santé sur l'expression des gènes de cytokines. Phytomédecine 2014, 21,1406-1410. [Référence croisée] [PubMed]

4. Lui, WJ; croc, TH; Tu, PF Progrès de la recherche sur les activités pharmacologiques de l'échinacoside. Chine J. Chin. Mater. Méd. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M. ; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH L'échinacoside sauve les cellules neuronales SHSY5Y de l'apoptose induite par le TNFalpha. EUR. J. Pharmacol. 2004, 505,11-18. [Référence croisée] [PubMed]

6. Koo, KA ; Chanté, SH; Parc, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Activités neuroprotectrices in vitro des glycosides phényléthanoïdes de Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [Référence croisée] [PubMed]

7. Wang, YH ; Xuan, ZH ; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside protège contre le dysfonctionnement mitochondrial induit par l'hydroxydopamine et les réponses inflammatoires dans les cellules PC12 via la réduction de la production de ROS. Evid. Complément à base. Alterner. Méd. 2015, 2015, 189239. [Référence croisée] [PubMed]

8. Zhu, M. ; Lu, C.; Li, W. L'exposition transitoire à l'échinacoside est suffisante pour activer la signalisation Trk et protéger les cellules neuronales de la roténone. J. Neurochem. 2013,124, 571-580. [Référence croisée] [PubMed]

9. Geng, X. ; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Effets neuroprotecteurs de l'échinacoside dans le modèle murin MPTP de la maladie de Parkinson. EUR. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [Référence croisée] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Effets de l'échinacoside sur les niveaux histio-centraux de masse active chez les rats d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne. Biomédical. Environ. Sci. 2012, 25, 238-244. [Pub Med]

11. Wu, CR ; Lin, HC; Su, MH Inversion par extraits aqueux deCistanche tubulosades déficits comportementaux dans le modèle de rat ressemblant à la maladie d'Alzheimer : pertinence pour le dépôt d'amyloïde et la fonction centrale des neurotransmetteurs. Complément BMC. Alterner. Méd. 2014, 14, 202. [Référence croisée] [PubMed]

12. Zhao, Q. ; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Effets neurotrophiques et neurosauvetage de l'échinacoside dans le modèle murin MPTP subaigu de la maladie de Parkinson. Cerveau Res. 2010, 1346, 224-236. [Référence croisée] [PubMed]

13. Meldrum, BS Le glutamate en tant que neurotransmetteur dans le cerveau : un examen de la physiologie et de la pathologie. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [Pub Med]

14. Lee, D.; Shim, MS ; Kim, KY ; Non, YH ; Kim, H.; Kim, SY ; Weinreb, RN; Ju, WK La coenzyme Q10 inhibe l'excitotoxicité du glutamate et l'altération mitochondriale médiée par le stress oxydatif dans un modèle murin de glaucome. Investig. Ophtalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [Référence croisée] [PubMed]

15. Choi, DW Calcium et lésion neuronale excitotoxique. Anne. NY Acad. Sci. 1994, 747,162-171. [Référence croisée] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Récepteurs du glutamate, neurotoxicité et neurodégénérescence. Pflugers. Cambre. 2010, 460, 525-542. [Référence croisée] [PubMed]

17. Sattler, R. ; Tymianski, M. Mécanismes moléculaires de la mort cellulaire neuronale excitotoxique médiée par les récepteurs du glutamate. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [Référence croisée]

18. Schauwecker, PE Neuroprotection par les antagonistes des récepteurs du glutamate contre la mort cellulaire excitotoxique induite par les crises dans le cerveau vieillissant. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [Référence croisée] [PubMed]

19. Yeganeh, F. ; Nikbakht, F.; Bahmanpoui ; S. ; Rastegar, K.; Namavar, R. Effets neuroprotecteurs du NMDA et des antagonistes des récepteurs métabotropiques du glutamate du groupe I contre la neurodégénérescence induite par l'homocystéine dans l'hippocampe du rat : étude in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [Référence croisée] [PubMed]

20. Doble, A. Le rôle de l'excitotoxicité dans les maladies neurodégénératives : implications pour la thérapie. Pharmacol. Là. 1999, 81,163-221. [Référence croisée]

21. Muir, KW Approches thérapeutiques basées sur le glutamate : Essais cliniques avec des antagonistes du NMDA. Courant. Avis. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [Référence croisée] [PubMed]

22. Gonzalez, JC ; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; García, AG ; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, JM La minocycline neuroprotectrice déprime la neurotransmission glutamatergique et la signalisation Ca2 plus dans les neurones de l'hippocampe. EUR. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [Référence croisée] [PubMed]

23. Lu, CW ; Lin, TY; Wang, SJ La mémantine déprime la libération de glutamate par l'inhibition de l'entrée de Ca2 plus dépendante de la tension et de la protéine kinase C dans les terminaisons nerveuses du cortex cérébral du rat : un mécanisme indépendant des récepteurs NMDA. Neurochem. Int. 2010, 57,168-176. [Référence croisée] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS L'antagoniste non compétitif des récepteurs métabotropiques du glutamate 5 (E)-2-méthyl-6- styryl-pyridine (SIB1893) diminue la libération de glutamate en inhibant l'entrée de Ca2 dépendant de la tension dans les terminaisons nerveuses cérébrocorticales du rat (synaptosomes). J. Pharmacol. Exp. Là. 2004, 309, 951-958. [Référence croisée] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, Île-du-Prince-Édouard ; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Une méthode rapide pour l'isolement des synaptosomes sur des gradients de Percoll. Cerveau Res. 1986, 372,115-129. [Référence croisée]

26. Araque, A. ; Li, N.; Doyle, RT ; Haydon, PG SNARE libération de glutamate dépendante des protéines des astrocytes. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [Pub Med]

27. Dunlop, J. Approches thérapeutiques basées sur le glutamate : ciblage du système de transport du glutamate. Courant. Avis. Pharmacol. 2006, 6,103-107. [Référence croisée] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Le réticulum sarcoplasmique Ca2 plus canal/récepteur de la ryanodine : Modulation par des effecteurs endogènes, des médicaments et des états pathologiques. Pharmacol. Rév. 1997, 49,1-51. [Pub Med]

29. Fan, Y. ; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protéine kinase C delta médiée par la cytotoxicité de l'6- hydroxydopamine via l'activation soutenue de la kinase 1/2 régulée par le signal extracellulaire dans les cellules PC12. Neurol. Rés. 2014, 36, 53-64. [Référence croisée] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, un nouvel inhibiteur de protéine kinase. Biochimie. Biophys. Rés. Commun. 1994, 199, 93-98. [Référence croisée] [PubMed]

31. Nicholls, DG ; Sihra, TS ; Sanchez-Prieto, J. Libération dépendante et indépendante du calcium de glutamate à partir de synaptosomes surveillée par fluorométrie continue. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [Référence croisée] [PubMed]

32. Nicoll, RA Le couplage des récepteurs des neurotransmetteurs aux canaux ioniques dans le cerveau. Sciences 1988, 241, 545-551. [Référence croisée] [PubMed]

33. Wu, LG ; Saggau, P. Inhibition présynaptique de la libération de neurotransmetteurs provoquée. Tendances Neurosci. 1997, 20, 204-212. [Référence croisée]

34. Turner, TJ ; Dunlap, K. Caractérisation pharmacologique des canaux calciques présynaptiques à l'aide de mesures biochimiques inférieures à la seconde de la neurosécrétion synaptosomale. Neuropharmacologie 1995, 34, 1469-1478. [Référence croisée]

35. Millan, C. ; Sanchez-Prieto, J. Couplage différentiel des canaux calciques de type N et P/Q à l'exocytose du glutamate dans le cortex cérébral du rat. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [Référence croisée]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. La modulation présynaptique de la libération de glutamate cible différents canaux calciques dans les terminaisons nerveuses cérébrocorticales du rat. EUR. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [Référence croisée] [PubMed]

37. Longue, P ; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS ; Jovanovic, JN Les récepteurs GABAA terminaux nerveux activent la signalisation dépendante du Ca2 plus / de la calmoduline pour inhiber l'afflux de Ca2 plus dépendant de la tension et la libération de glutamate. J. Biol. Chim. 2009,284, 8726-8737. [Référence croisée] [PubMed]

38. Turner, JR ; Angle, JM ; Noir, ED ; Joyal, JL; Sacs, DB ; Madara, JL Régulation dépendante de la PKC de la résistance transépithéliale : Rôles de la MLC et de la MLC kinase. Un m. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [Pub Med]

39. Vaughan, PF ; Walker, JH; Peters, C. La régulation de la sécrétion de neurotransmetteurs par la protéine kinase C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [Référence croisée] [PubMed]

40. Coffey, ET ; Sihra, TS ; Nicholls, DG ; Pocock, JM La phosphorylation de la synapsine I et de MARCKS dans les terminaisons nerveuses est médiée par l'entrée de Ca2 plus via un canal Ca2 plus sensible à l'Aga-GI qui est couplé à l'exocytose du glutamate. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [Référence croisée]

41. Obrénovitch, TP ; Urenjak, J. Transmission glutamatergique altérée dans les troubles neurologiques : du glutamate extracellulaire élevé à une efficacité synaptique excessive. Programme. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [Référence croisée]

42. Zhang, D. ; Li, H.; Wang, JB L'échinacoside inhibe la fibrillation amyloïde de HEWL et protège contre la neurotoxicité induite par Ap. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [Référence croisée] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ L'hispiduline inhibe la libération de glutamate dans les terminaisons nerveuses cérébrocorticales du rat. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [Référence croisée] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, Sask.; Wang, YC; Chou, SS ; Wang, SJ L'hespéridine inhibe la libération de glutamate et exerce une neuroprotection contre l'excitotoxicité induite par l'acide kaïnique dans l'hippocampe des rats. Neurotoxicologie 2015,2015,157-169. [Référence croisée] [PubMed]

45. Nicholls, DG ; Sihra, TS Les synaptosomes possèdent un pool exocytotique de glutamate. Nature 1986, 321, 772-773. [Référence croisée] [PubMed]

46. ​​Wang, CC ; Kuo, JR ; Wang, SJ Dimebon, un antihistaminique, inhibe la libération de glutamate dans les terminaisons nerveuses cérébrocorticales du rat. EUR. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [Référence croisée] [PubMed]

47. Tibbs, GR ; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT ; Nicholls, DG Potentiels d'action répétitifs dans les terminaisons nerveuses isolées en présence de 4- aminopyridine : effets sur le Ca2 plus libre cytosolique et la libération de glutamate. J. Neurochem. 1989,53,1693-1699. [Référence croisée] [PubMed]

48. Akerman, KE ; Scott, LG ; Heikkila, JE; Heinonen, E. Dépendance ionique du potentiel membranaire et des réponses liées aux récepteurs du glutamate dans les synaptoneurosomes, mesurées avec un colorant cyanine, DiSC2 (5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [Référence croisée] [PubMed]

49. Sihra, TS ; Bogonez, E.; Nicholls, DG L'entrée localisée de Ca2 plus affecte préférentiellement la déphosphorylation des protéines, la phosphorylation et la libération de glutamate. J. Biol. Chim. 1992, 267,1983-1989. [Pub Med]

50. Grynkiewicz, G. ; Poenie, M.; Tsien, RY Une nouvelle génération d'indicateurs Ca2 plus avec des propriétés de fluorescence grandement améliorées. J. Biol. Chim. 1985, 260,3440-3450. [Pub Med]