Partie 1 : L'actéoside supprime l'ostéoclastogenèse médiée par RANKL en inhibant l'induction de C-Fos et la voie NF-KB et en atténuant la production de ROS
Mar 05, 2022
Contact : Audrey Hu Whatsapp/hp : 0086 13880143964 E-mail :audrey.hu@wecistanche.com
Seung-Youp Lee1,2., Keun-Soo Lee3.¤, Sea Hyun Yi2., Sung-Ho Kook, Jeong-Chae Lee22,3*
Résumé
De nombreuses études ont rapporté que les cytokines inflammatoires sont des médiateurs importants pour l'ostéoclastogenèse, provoquant ainsi une résorption osseuse excessive et l'ostéoporose.Actéoside de l'herbe de cistanche, le principal composé actif de Rehmannia glutinosa, largement utilisé dans la médecine traditionnelle orientale, possède des potentiels anti-inflammatoires et antioxydants. Dans cette étude, nous avons constaté queactéosideinhibe nettement la différenciation et la formation des ostéoclastes à partir des macrophages de la moelle osseuse (BMM) et des macrophages RAW264.7 stimulés par l'activateur du récepteur du ligand du facteur nucléaire kappaB (NF-kB) (RANKL).Actéosidele prétraitement a également empêché la résorption osseuse par les ostéoclastes matures de manière dose-dépendante. L'actéoside (10 mM) a atténué l'activation stimulée par RANKL de la kinase p38, des kinases régulées par le signal extracellulaire et de la kinase N-terminale c-Jun, et a également supprimé l'activation de NF-kB en inhibant la phosphorylation de la sous-unité p65 et de l'inhibiteur kBa. De plus, l'augmentation médiée par RANKL de l'expression de c-Fos et du facteur nucléaire des lymphocytes T activés, cytoplasmique 1 (NFATc1), et de la production du facteur de nécrose tumorale-a, l'interleukine (IL)-1b , et IL-6 étaient apparemment inhibés par un prétraitement à l'actéoside. De plus, oralementactéosideréduit la perte osseuse induite par l'ovariectomie et la production de cytokines inflammatoires à des niveaux de contrôle. Nos données suggèrent que l'actéoside inhibe la différenciation et la maturation des ostéoclastes à partir des précurseurs ostéoclastiques en supprimant l'activation induite par RANKL des protéines kinases activées par les mitogènes et des facteurs de transcription tels que NF-kB, c-Fos et NFATc1. Collectivement, ces résultats suggèrent que l'actéoside peut agir comme un agent anti-résorptif pour réduire la perte osseuse en bloquant l'activation des ostéoclastes.
Introduction
L'os est constamment remodelé par une activité équilibrée des ostéoclastes et des ostéoblastes [1]. Les ostéoclastes proviennent de cellules précurseurs hématopoïétiques de la lignée monocyte/macrophage, tandis que les ostéoblastes sont de la lignée mésenchymateuse [2]. Une activation anormale des ostéoclastes ou une ostéoblastogenèse réduite peuvent perturber l'homéostasie osseuse, provoquant éventuellement des maladies telles que l'ostéoporose, l'arthrite et le cancer des os [3,4]. L'ostéoporose est une maladie osseuse courante qui entraîne un risque accru de fracture. La forme la plus courante d'ostéoporose est causée par une carence en œstrogènes chez les femmes ménopausées. Les médicaments tels que les corticoïdes et les antiépileptiques peuvent également provoquer un déséquilibre entre la résorption et la formation osseuse, ce qui peut entraîner une ostéoporose [5].
De nombreux inhibiteurs anti-résorption, notamment les bisphosphonates, la calcitonine, les œstrogènes et les modulateurs sélectifs des récepteurs des œstrogènes, ont été utilisés pour traiter l'ostéoporose. Ces inhibiteurs maintiennent la masse osseuse en inhibant la fonction des ostéoclastes [6]. La thérapie de remplacement des œstrogènes est le traitement le plus populaire pour prévenir et traiter l'ostéoporose post-ménopausique. Cependant, la thérapie de remplacement des œstrogènes à long terme peut augmenter le risque de cancer de l'endomètre et du sein. Par conséquent, de nombreux chercheurs ont concentré leurs efforts sur le développement d'un nouvel agent anti-résorptif qui n'a pas d'effets secondaires [7-10]. Étant donné que les ostéoclastes fonctionnent dans la résorption osseuse, l'inhibition spécifique des ostéoclastes a été considérée comme la cible principale dans de nombreuses études.
Les ostéoclastes sont des cellules géantes multinucléées formées par des progéniteurs mononucléaires de la famille des monocytes/macrophages via la prolifération séquentielle, la différenciation et la fusion de cellules précurseurs hématopoïétiques [11]. Le facteur de stimulation des colonies de macrophages (M-CSF) et l'activateur du récepteur du ligand du facteur nucléaire (NF)-kB (RANK) (RANKL) sont des facteurs essentiels à la différenciation des ostéoclastes [12]. De plus, plusieurs cytokines inflammatoires, telles que le facteur de nécrose tumorale (TNF) et l'interleukine (IL)-1b, contribuent à l'ostéoclastogenèse en modulant l'induction du RANKL, de l'ostéoprotégérine et du M-CSF [7,13]. La liaison de RANKL au récepteur RANK de surface cellulaire entraîne la formation de complexes de facteurs associés RANKL/RANK/TNFR (TRAF) qui activent séquentiellement NF-kB et les protéines kinases activées par les mitogènes (MAPK), y compris la kinase N-terminale c-Jun (JNK), p38 kinase et la kinase liée au signal extracellulaire (ERK) [14]. Cette activation joue un rôle clé dans la médiation de la différenciation, de l'activation et de la survie des ostéoclastes. RANKL active également l'expression de facteurs de transcription tels qu'un facteur nucléaire des lymphocytes T activés, cytoplasmique 1 (NFATc1) et c-Fos, essentiels au développement des ostéoclastes [7,9]. Par conséquent, la signalisation RANKL est considérée comme la cible principale des agents anti-résorption qui suppriment l'activation des ostéoclastes et la perte osseuse.
Actéosideest le principal composé actif de Rehmannia glutinosa, qui est largement utilisé dans la médecine traditionnelle orientale [15,16]. L'actéoside est un puissant antioxydant et possède des activités anti-hépatotoxiques, anti-inflammatoires et anti-nociceptives [17-20]. Nous avons précédemment découvert que l'actéoside diminue l'activité de la tyrosinase et la biosynthèse de la mélanine en régulant la signalisation ERK [21], protège contre les dommages gingivaux médiés par les espèces réactives de l'oxygène (ROS) [22] et supprime les dommages cellulaires médiés par les mycotoxines [23]. Ces effets sont étroitement liés à la capacité des nucléosides à éliminer les ROS et à réguler la signalisation médiée par MAPK. En particulier, les ROS sont suggérés pour médier les voies de signalisation induites par RANKL et les événements cellulaires chez les ostéoclastes. Un prétraitement avec des antioxydants a inhibé l'activation induite par RANKL de NF-kB, ERK et IkBa, supprimant ainsi l'ostéoclastogenèse [24]. Ces résultats suggèrent fortement qu'en plus de l'activité anti-inflammatoire, l'activité antioxydante est cruciale pour un agent anti-résorptif, ainsi l'actéoside peut supprimer l'ostéoclastogenèse induite par RANKL.
Dans la présente étude, nous avons exploré si l'actéoside avait un effet thérapeutique sur la perte osseuse. Nous avons examiné les effets de l'actéoside sur la différenciation des ostéoclastes et la résorption osseuse et les mécanismes cellulaires associés à l'aide de systèmes expérimentaux in vitro et in vivo.
Cistanche actéoside supprime l'ostéoclastogenèse induite par RANKL
Matériaux et méthodes
Déclaration d'éthique
Les pratiques de soin et d'utilisation des animaux ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Université nationale de Chonbuk sur le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire (permis n° CBU 2010-0007). Toutes les expériences de cette étude ont été réalisées conformément aux directives du Animal Care and Use Committee de l'Université.
Souris, produits chimiques et articles de laboratoire
Des souris ICR femelles âgées de quatre semaines ont été achetées chez Orient Bio Inc. (Séoul, Corée) et hébergées à 2261 uC et 5565% d'humidité sur un cycle lumière / obscurité de 12 h avec un accès libre à la nourriture et à l'eau. L'actéoside (3,4-dihydroxy-bphenéthyl-Oa-rhamnopyranosyl-(1R3)-4-O-caféoyl-bD-glucopyranoside ; C29H36O15) (Fig. S1) a été isolé des feuilles de Rehmannia glutinosa. Actéoside a été dissous dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avant utilisation. RANKL, TNF-a, IL-1b, IL-6 et M-CSF ont été achetés auprès de R & D Systems (Minneapolis, MN, États-Unis). Les anticorps spécifiques à c-Fos, p65, p-p65, p-ERK, ERK, JNK, p-JNK, NFATc1, IkBa, p-IkBa et b-actine ont été obtenus auprès de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA ). Les anticorps pour p-p38 et p38 ont été achetés auprès de Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Les kits EIA Calcium Assay et Osteocalcin (OC) ont été achetés auprès de BioAssay Systems (Hayward, CA, USA) et Biomedical Technologies (Stoughton, MA, USA), respectivement, pour déterminer les paramètres biochimiques sériques. Le kit de dosage de la phosphatase acide résistante au tartrate de souris (TRAP) (Immunodiagnostic Systems, Scottsdale, AZ, USA) a également été utilisé pour mesurer le taux sérique de TRAP5b. Sauf indication contraire, des produits chimiques supplémentaires ont été obtenus auprès de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, États-Unis) et les articles de laboratoire provenaient de SPL Life Sciences (Pochun, Corée du Sud).
Cultures cellulaires
Des cellules de moelle osseuse ont été obtenues à partir des tibias et des fémurs de souris ICR femelles âgées de 6 semaines selon les méthodes décrites précédemment [25]. La suspension de moelle osseuse a été incubée dans une boîte de culture de 100- mm en présence de 50 ng/ml de M-CSF. Après 3 jours, les cellules adhérentes ont été utilisées comme macrophages de la moelle osseuse (BMM) pour induire la différenciation ostéoclastique. Certaines cellules de la moelle osseuse ont également été incubées pendant 48 h sans M-CSF, et les cellules adhérentes ont été cultivées dans un milieu de différenciation des ostéoblastes, comme décrit ailleurs [25]. Les cellules macrophages RAW264.7 ont été cultivées dans du milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal (FBS), de L-glutamine 2 mM et d'antibiotiques. Ces cellules ont été utilisées comme lignée cellulaire homologue pour les BMM afin d'explorer l'effet de l'actéoside sur l'ostéoclastogenèse.
Différenciation ostéoclastique et coloration TRAP
Les BMM ont été prétraités avec diverses concentrations (0–50 mM) deactéosidependant 2 h avant de stimuler avec 100 ng/ml de RANKL. Le milieu de culture a été remplacé par du milieu frais aux jours 2 et 5. Après 7 jours d'incubation, les cultures ont été fixées dans du paraformaldéhyde tamponné au PBS à 4 % et colorées avec du TRAP à l'aide d'un kit Sigma Aldrich conformément aux instructions du fabricant. Les cellules TRAP-positives ont été comptées en utilisant la microscopie optique, et les cellules contenant 3 noyaux ou plus ont été considérées comme des ostéoclastes. Les cellules RAW 264.7 ont également été exposées à 100 ng/ml de RANKL après un prétraitement avec de l'actéoside pendant 2 h, et après 7 jours d'incubation, les cellules ont été traitées pour la coloration TRAP.
Mesure de la viabilité cellulaire
La viabilité cellulaire a été déterminée à l'aide d'un réactif de sel de tétrazolium soluble dans l'eau (WST)-8. En bref, les cellules BMM ou RAW264.7 cultivées dans un milieu de croissance contenant 10 % de FBS et des antibiotiques ont été traitées avec 10 mM d'actéoside ou un composé phénolique tel que la quercétine, la lutéoline, l'apigénine ou l'épigallocatéchine-3-gallate (EGCG). Le réactif WST-8 a été ajouté aux cultures après 48 h d'incubation. Après incubation pendant 4 h supplémentaires, l'absorbance spécifique du WST -8- a été mesurée à 450 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques (Packard Instrument Co., Downers Grove, IL, États-Unis).
Test de résorption osseuse
Les BMM (16 105 cellules/ml) ont été mis en suspension dans un MEM contenant 50 ng/ml de M-CSF et 100 ng/ml de RANKL, puis répartis sur une 24-plaque à puits recouverte de nanocristaux de phosphate de calcium (OAAS{{6} }; Osteoclast Activity Assay Substrate, Oscotec Inc., Choongnam, Corée du Sud) à une densité de 26104 cellules/cm2 avec et sans actéoside. Après incubation pendant 7 jours, les cellules ont été retirées des plaques avec de l'hypochlorite de sodium à 5 % et la formation de piqûres a été observée au microscope optique. La surface résorbée a également été mesurée par un analyseur d'images et exprimée en pourcentage de la valeur témoin.
Analyse Western Blot
Des lysats de protéines entières ont été préparés dans un tampon de lyse comme décrit ailleurs [26]. Les protéines cytosoliques et nucléaires ont été préparées comme décrit précédemment [25]. Des quantités égales d'extrait protéique ont été séparées par 12 à 15 % de SDS-PAGE et transférées sur des membranes de difluorure de polyvinyle. Les transferts ont été sondés avec des anticorps primaires pendant une nuit à 4 uC avant incubation avec un anticorps secondaire dans un tampon de blocage pendant 1 h. Les taches étaient
développé avec une chimiluminescence améliorée (Amersham Pharmacia Biotech Inc., Buckinghamshire, Royaume-Uni) et exposé à un film radiographique (Eastman-Kodak Co., Rochester, NY, USA).
Test d'activité MAPK
Les cellules ont été prétraitées avecactéosidependant 2 h, puis stimulé avec RANKL pendant -30 min supplémentaire. Les activités MAPK ont été déterminées à l'aide de kits de dosage immunométrique, tels que le kit de dosage p-p38 kinase (Assay Designs, Inc., MI, USA), le kit de dosage enzymatique p-ERK (Assay Designs) et le kit ELISA sandwich p-SAPK/JNK. (Technologie de signalisation cellulaire, MA, États-Unis). Toutes les procédures ont suivi les instructions du fabricant et l'absorbance a été mesurée par un lecteur de microplaques.
Essai de changement de mobilité électrophorétique (EMSA)
Les réactions de liaison ADN-protéine ont été réalisées pendant 30 min à température ambiante, avec 10 à 15 mg de protéine dans 20 ml de tampon contenant 1 mg/ml de BSA, 0,5 mg/ml de poly (dI-dC), 5 % de glycérol , DTT 1 mM, PMSF 1 mM, Tris-Cl 10 mM (pH 7,5), NaCl 50 mM, 30,000 cpm d'oligonucléotides marqués au dCTP [a-32P] et le fragment de Klenow de l'ADN polymérase. Les échantillons ont été séparés sur des gels de polyacrylamide à 6 %, qui ont été séchés et exposés à un film radiographique (Eastman Kodak Co.) pendant 12 à 24 h à 270 uC. Les séquences d'amorces oligonucléotidiques spécifiques de NF-kB étaient 59-AAG GCC TGT GCT CCG GGA CTT TCC CTG GCC TGG A-39 et 39-GGA CAC GAG GCC CTG AAA GGG ACC GGA CCT GGA A -59.
Dosage de la luciférase NF-kB
Les macrophages RAW264.7 dans des plaques 24-puits ont été transfectés avec 0.8 mg de vecteur rapporteur kB-luciférase en utilisant 2 ml de Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) conformément aux instructions du fabricant. 24h après la transfection, les cellules ont été stimulées avec du RANKL en présence et en absence d'actéoside pendant 24h. Les cellules ont été remises en suspension dans 100 ml de tampon de lyse reporter
(Promega, Madison, WI, États-Unis). Des quantités égales d'échantillons de protéines ont été placées dans des microplaques à puits 96- et mélangées avec un substrat de luciférase. La luminescence a été mesurée à l'aide d'un luminomètre à microplaque (MicroLumat Plus LB 964, Berthold Technologies, Bad Wildbad, Allemagne). Dans cette expérience, un peptide inhibiteur de NF-kB perméable (BIOMOL, Butler Pike, PA, USA) a été utilisé comme inhibiteur de kB positif.
Mesure des cytokines
Les cellules BMM ou RAW264.7 ont été stimulées avec RANKL en présence d'actéoside dans des plaques de culture 24-puits. Après 48 h d'incubation, les surnageants de culture ont été collectés et évalués par ELISA à l'aide de kits OptEIATM spécifiques au TNF-a-, IL-1b- et IL-6- selon les instructions du fabricant.
Transcription inverse en temps réel-réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR)
L'expression de l'ARNm des marqueurs ostéoclastiques, tels que c-Fos, NFATc1 et TNF-a, a été déterminée par RT-PCR en temps réel. En bref, l'ARN total a été extrait des macrophages avec le réactif Trizol selon les instructions du fabricant (Invitrogen). L'ADNc a été synthétisé avec 1 mg d'ARN total à l'aide de SuperScript Reverse Transcriptase II et d'amorces (Invitrogen). Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) a été utilisé pour détecter l'accumulation de produit de PCR pendant le cycle avec le système de détection de séquence ABI 7500 (Applied Biosystems). Après dénaturation à 95uC pendant 10 min, la PCR a été
effectué en utilisant quarante 3- cycles d'étapes de dénaturation à 95 uC pendant 15 secondes, d'hybridation à 60 uC pendant 1 seconde et d'extension à 72 uC pendant 30 secondes. Toutes les réactions de PCR ont été réalisées au moins en triple, et les niveaux d'expression ont été normalisés au gène domestique HPRT dans la même réaction. Cette étude a utilisé les mêmes séquences d'amorces décrites ailleurs [7].
Mesure des ROS intracellulaires
Une solution mère de 29,79-dichlorodihydrofluorescéine-diacétate (DCFH-DA) (50 mM ; Calbiochem, Darmstadt, Allemagne) a été préparée dans du DMSO et stockée à 220 uC dans l'obscurité. En bref, les BMM (106 cellules/ml dans des plaques 6-puits) ont été cultivées avec 50 ng/ml de M-CSF pendant 24 h, puis traitées avec différentes concentrations (0 à 10 mM) deactéoside2 h avant la stimulation avec 100 ng/ml de RANKL. Après 1 h de co-incubation, ces cellules ont ensuite été incubées avec du DCFH-DA 25 mM pendant 30 min. La fluorescence verte de la 29,79-dichlorofluorescéine (DCF) a été enregistrée à 515 nm (FL 1) à l'aide d'un système FACS VantageH (Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA) et 10,000 les événements ont été comptés par échantillon.
Induction de l'ostéoporose induite par l'ovariectomie
Des souris ICR femelles (âgées de 6 semaines) ont été utilisées pour cette étude. Les souris ont subi une opération factice (Sham, n =10) ou une ovariectomie chirurgicale (OVX, n=20) sous anesthésie. Une semaine après la chirurgie, les souris OVX ont été réparties au hasard en 2 groupes de 10 souris chacun : OVX bilatéral et OVX bilatéral additionné de 200 ml
PBS contenant 1 mM d'actéoside par voie orale (groupe AC). L'actéoside par voie orale a été administré une fois tous les 3 jours pendant 8 semaines après la chirurgie, et
la même quantité de PBS a été administrée aux groupes Sham et OVX. Après 1 jour de la dernière administration, les souris ont été sacrifiées, puis les paramètres biochimiques dans le sérum et la structure osseuse dimensionnelle 3- ont été analysés.
Détermination des paramètres biochimiques sériques
Des échantillons de sang ont été prélevés par ponction cardiaque et le sérum a été recueilli par centrifugation. Les échantillons de sérum ont été stockés à 280 uC pour les analyses des paramètres biochimiques. Les taux sériques d'IL-1b et d'IL-6 ont été estimés à l'aide du kit ELISA tel que décrit ci-dessus, tandis que l'activité de la phosphatase alcaline (ALP) a été déterminée à l'aide d'un dosage colorimétrique biochimique qui mesure la quantité de p -nitrophénol produit à partir d'un substrat phosphate de p-nitrophénol, comme décrit par ailleurs [27]. Pour estimer les biomarqueurs de la formation et de la résorption osseuses, les taux sériques d'OC, de calcium et de TRAP5b ont également été déterminés conformément aux instructions des fabricants.
Analyses de la structure osseuse et des paramètres morphométriques
Les fémurs de souris (groupes Sham, OVX et AC) ont été disséqués et remplis de sérum physiologique pour les tests mécaniques. La résistance mécanique du fémur a été mesurée comme décrit ailleurs [28]. La charge de fracture a été enregistrée en tant que force maximale en newtons au point où la diaphyse médiane de la fracture du fémur droit. De plus, le fémur léger de chaque animal a été analysé par histo-morphométrie à l'aide d'un système de tomographie par micro-ordinateur (micro-CT) (SkyScan 1076 microfocus X-ray system, Kontich, Belgique). En bref, les os stockés dans du formaldéhyde à 4% ont été séchés superficiellement sur du papier de soie avant d'être enveloppés dans un «film plastique» ou dans du parafilm, pour éviter le dessèchement lors de la numérisation. Chaque os enveloppé de plastique a été placé dans des tubes en plastique / mousse de polystyrène qui ont été montés verticalement horizontalement dans la chambre d'échantillon du scanner 1076 pour
imagerie micro-CT. Le balayage a été effectué en utilisant une tension de source de 100 kV et un courant de source de 140 mA avec une résolution de 35 mm.
Des modèles tridimensionnels des os trabéculaires du fémur ont été reconstruits à l'aide de SkyScan CT Analyzer version 1.11. Les paramètres structurels tels que la densité minérale osseuse trabéculaire (DMO, g/cm3), le pourcentage de volume osseux (volume osseux (BV)/volume tissulaire (TV), pourcentage), l'épaisseur (Tb.Th, mm), la séparation (Tb.Sp , mm) et le nombre (Tb.N, 1/mm) ont ensuite été mesurés.
Test de différenciation ostéogénique et de minéralisation Des cellules de moelle osseuse cultivées dans des plaques de culture {{{{10}}}}puits ont été traitées avec du DAG (dexaméthasone 10 nM, acide ascorbique 50 mM et b-glycérophosphate 20 mM) dans le présence d'actéoside 10 mM. Après 2 semaines de différenciation, les cellules ont été fixées avec de l'éthanol à 70 % (vol/vol) glacé pendant 1 h et colorées avec 0,2 % de rouge d'alizarine S dans de l'eau distillée pendant 30 min à température ambiante. Une fois les cellules décolorées et séchées à l'air, les plaques de culture cellulaire ont été évaluées par microscopie optique à l'aide d'un microscope inversé (Nikon TS100, Japon). Pour quantifier la quantité de colorant rouge, la tache a été éluée avec du chlorure d'acétylpyridinium à 10 % en secouant pendant 20 min et l'absorbance a été mesurée à 560 nm. La quantité de calcium déposée dans les couches cellulaires a également été mesurée à l'aide d'un kit Calcium C (Wako Chemical Inc. Osaka, Japon) selon les instructions du fabricant. De plus, l'expression de marqueurs d'ARNm spécifiques à l'os, tels que le facteur de transcription lié au runt -2 (Runx2), l'osterix, la sialoprotéine osseuse (BSP) et l'OC a été déterminée par RT-PCR en temps réel. Les amorces oligonucléotidiques de ces marqueurs ont été conçues avec des tailles de produit inférieures à 200 pb à l'aide du logiciel Primer Express 3.0 (Applied Biosystems) comme décrit ailleurs [27].
cistanche actéoside stimule la formation osseuse
Résultats
L'actéoside inhibe la formation d'ostéoclastes par les macrophages de manière dose-dépendante
Pour vérifier l'effet de l'actéoside sur la différenciation des BMM en ostéoclastes, les cellules ont été cultivées avec différentes concentrations (0– 20 mM) d'actéoside pendant 7 jours en présence de 50 ng/ml de M-CSF et 100 ng/ml RANKL. L'actéoside a réduit le nombre d'ostéoclastes de manière dose-dépendante. Lorsque les cellules ont été prétraitées avec de l'actéoside 10 mM pendant 2 h, le nombre d'ostéoclastes a diminué de 43% par rapport aux cellules supplémentées avec du M-CSF et du RANKL (Fig. 1A). La figure 1B montre la différenciation des ostéoclastes médiée par RANKL et son inhibition par un traitement combiné avec l'actéoside. Conformément à ce résultat, le prétraitement par l'actéoside a diminué la différenciation stimulée par RANKL des cellules RAW264.7 et la formation d'ostéoclastes (Figs. 1C et D). Lorsque le potentiel anti-ostéoclastique de l'actéoside sur les BMM a été comparé aux potentiels anti-ostéoclastes de plusieurs composés phénoliques à la même concentration (10 mM), la lutéoline a montré l'activité la plus élevée (Fig. 2A). Cependant, la lutéoline, la quercétine ou l'apigénine elle-même ont diminué la viabilité des cellules (Fig. 2B). Tous les composés ont inhibé la différenciation ostéoclastique par les macrophages RAW264.7 avec les activités relatives suivantes : lutéoline. quercétine=apigénine .
Cistanche actéoside inhibe les ostéoclastes
