Les glycosides phényléthanoïdes de Paraboea Martinii protègent les cellules du phéochromocytome de rat (PC12) contre les lésions cellulaires induites par le peroxyde d'hydrogène
Mar 04, 2022
Contact : Audrey Hu Whatsapp/hp : 0086 13880143964 E-mail :audrey.hu@wecistanche.com
Xue Gong†a , Yan Xu†b , Kai Renc , Xiaorong Baid
Le stress oxydatif est connu pour jouer un rôle essentiel dans la pathogenèse de plusieurs maladies. Il est lié à l'étiologie de la maladie d'Alzheimer (MA), de la maladie de Parkinson (MP), de l'épilepsie et d'autres maladies [1–3]. À l'heure actuelle, des progrès continus ont été réalisés dans l'étude de la pathogenèse de la MA, de la MP et d'autres maladies. Cependant, en raison de la connaissance limitée des mécanismes moléculaires sous-jacents à la MA, à la MP et à d'autres maladies, des stratégies préventives ou curatives efficaces pour ces maladies n'ont pas été réalisées [4]. H2O2 est un composant important des espèces réactives de l'oxygène (ROS). En conséquence, la lésion des cellules PC12 induite par H2O2-est le modèle de stress oxydatif le plus couramment utilisé et est largement utilisé dans les études expérimentales des effets neuroprotecteurs [5]. L'hème oxygénase 1 (HO-1) et la sous-unité catalytique de la glutamate-cystéine ligase (GCLC) sont des enzymes antioxydantes cellulaires importantes, et les deux gènes sont régulés en aval du facteur nucléaire érythroïde 2 (Nrf2), qui émerge comme une thérapeutique prometteuse cible de neuroprotection [6,7]. Les glycosides phényléthanoïdes, dérivés de l'unité C-6-C-3, contiennent de nombreux groupes hydroxyles phénoliques et ont des activités antioxydantes et antivieillissement importantes. Au cours des dernières années, des études ont indiqué que de nombreuses plantes médicinales contiennent des glycosides phényléthanoïdes qui présentent une activité antioxydante importante. Par exemple, les glycosides phényléthanoïdes dérivés deCistanche aux herbessont connus pour exercer des effets protecteurs sur les déficits cognitifs dans la MA. Cette étude a étudié le mécanisme de protection associé à l'aide d'un modèle de souris sujette à la sénescence accélérée par la MA 8 (SAMP8). Les résultats ont indiqué que la capacité des glycosides phényléthanoïdes à améliorer les déficits cognitifs chez les souris SAMP8 pourrait être liée à la promotion de la plasticité synaptique impliquant des processus antioxydants [8]. Dans cette étude, deux glycosides phényléthanoïdes ont été séparés et purifiés à partir de nœuds de bois de Tectona grandis (teck); ces composés ont montré des effets antioxydants notables qui ont été déterminés à l'aide d'une méthode ampérométrique [9]. En outre, les composés glycosides de caféoyl phényléthanoïde de Lindernia ruellioides exercent des effets antioxydants et anion superoxyde dépendants de la dose sur les radicaux libres in vitro [10]. Les mécanismes d'action des glycosides phényléthanoïdes sont liés à la régulation de la voie de signalisation Nrf2/ARE, qui influence la synthèse de SOD, CAT, GSH-PX et d'autres enzymes antioxydantes [11]. La famille des Gesneriaceae, qui contient 150 genres et environ 3700 espèces, est principalement distribuée dans les régions tropicales et tempérées de l'Asie orientale et méridionale, de l'Océanie, de l'Amérique du Sud, de l'Afrique, de l'Europe du Sud et du Mexique [12].
Gesnériacées en Chine. Il a été rapporté qu'environ 100 espèces ont une efficacité médicale et la plupart d'entre elles sont principalement distribuées dans les provinces du Guangxi et du Guizhou [13]. Ces dernières années, les recherches sur les plantes Gesneriaceae se sont progressivement multipliées dans différentes régions du monde, et de nouveaux constituants ayant des activités physiologiques ont été découverts [14]. Paraboea martinii (Levl.) Burtt appartient à Parabola (Gesneriaceae) et est une plante herbacée. Basé sur "The Chinese Traditional Medicine Resource Records", il a été enregistré que la plante entière est utilisée comme médicament. De plus, il peut exercer de nombreuses activités pharmacologiques sur des conditions telles que l'hématémèse, l'œdème, la dysenterie, les lésions traumatiques et les fractures [15]. Bai a prouvé que les glycosides phényléthanoïdes sont l'un des principaux constituants chimiques des plantes Gesneriaceae [16]. Certains chercheurs ont également découvert que les glycosides phényléthanoïdes ont des activités antioxydantes importantes [17]. Li a démontré que les glycosides phényléthanoïdes deCistanche désertique have significant antioxidant activity [18]. In addition, Ju systematically studied the neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides using PC12 cell models. The results indicated that phenylethanoid glycosides significantly attenuate the damage induced by Aβ1-42 [19]. In our studies, we isolated eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) from P. martini [20]. All compounds were isolated from the genus Parabola for the first time, and the compounds paraboside A, paraboside B, p paraboside I, paraboside II, and paraboside III were new compounds [20]. In a continuing search for molecules with antioxidant properties, phenylpropanoid glycosides were examined. However, whether these phenylpropanoid glycosides from P. martini could protect against H2O2-induced PC12 cell injury was previously unclear. In this study, we examined the protective effects of phenylpropanoid glycosides on H2O2-induced damage to PC12 cells. We also examined the effects and preliminary mechanism underlying the activity of phenylpropanoid glycosides with respect to the activation of HO-1 and GCLC in vitro. Materials and methods Materials Paraboea martini (Level.) Burtt was collected from Daxin County, Guangxi Autonomous Region in August 2014 and verified by Dr. Minhui Li (Baotou Medical College). Voucher specimens were deposited at the Laboratory of Pharmacognosy and Phytochemistry. Eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) were extracted and separated from P. martinii (Levl.) Burtt by prof. Xiaoqin Wang [20]. The purity (>98 pour cent) de huit glycosides phénylpropanoïdes a été mesuré par la méthode de normalisation de la surface de pic HPLC. À titre d'exemple, les diagrammes de chromatographie du paraboside B et du paraboside II sont présentés à la figure 1, et leur teneur relative s'est avérée être de 98,23 % et de 99,20 %, respectivement. La lignée cellulaire de phéochromocytome surrénalien de rat peu différenciée (PC12) a été achetée auprès de la banque de cellules de l'Académie des sciences de Chine (Shanghai, Chine). Le milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et le sérum de cheval ont été achetés chez Gibco (Gaithersburg, MD, USA). Le sérum de veau fœtal (FBS) a été acheté auprès de Thermo Fisher Scientific (Hyclone, Waltham, MA, USA). H2O2 a été obtenu auprès de Tianjin Fu Yu Reagent Co., Ltd. (Tianjin, Chine). Trizol a été acheté chez Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Le kit de réactifs PrimeScriptTM RT (Perfect Real Time) a été obtenu auprès de TaKaRa Biotechnology Co. (Dalian, Chine). Les amorces pour HO-1, GCLC et GAPDH ont été synthétisées par Sangon Biotech (Shanghai, Chine). Le kit CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) a été obtenu auprès de Promega Corp. (Madison, USA). Les inhibiteurs de la protoporphyrine de zinc HO -1 (ZnPP) ont été achetés auprès de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Un incubateur à CO2 Thermo311 (Thermo, USA), StepOnePlusTM Real-Time PCR Instrument Thermal Cycling Block (Thermo), Thermo Scientific Multiskan FC (Thermo) et xCELLigence RTCA DPlus Analyzer et E-Plate 16 (ACEA Biosciences, USA) ont également été utilisés .
Cistanche désertique
Culture cellulaire et traitement
Les cellules PC12 ont été cultivées dans du DMEM contenant 5 % de FBS et 5 % de sérum de cheval à 37 degrés dans une atmosphère humidifiée à 5 % de CO2. Les cellules PC12 ont été divisées en trois groupes comme suit : un groupe témoin, un groupe modèle et un groupe de traitement. Huit glycosides phénylpropanoïdes ont été dissous dans du DMSO (< 0.01%)="" and="" then="" diluted="" with="" a="" complete="" culture="" medium.="" to="" study="" the="" effects="" of="" the="" eight="" phenylpropanoid="" glycosides="" on="" h2="" o2-induced="" cell="" injury,="" pc12="" cells="" were="" cultured="" with="" the="" eight="" compounds="" at="" concentrations="" of="" 3.125,="" 6.25,="" 12.5,="" 25,="" and="" 50="" μm="" for="" 12="">
Détermination de H2O2
Nous avons déterminé la concentration appropriée de H2O2 en utilisant l'analyse cellulaire en temps réel (RTCA). Les cellules PC12 ont été ensemencées dans une microplaque CIM-plate-16 à un volume de 100 µL, puis incubées pendant 12 h à 37 degrés dans une atmosphère à 5 % de CO2. Les cellules PC12 ont été divisées en groupes témoins et modèles. Ensuite, 10 μL de H2O2 (50, 100, 200 et 400 μM) ont été ajoutés aux groupes modèles et les groupes témoins ont été traités avec 10 μL de DMEM complet, mis en place dans trois puits complexes. La E-Plate 16 a été placée dans le xCELLigence RTCA, contrôlée toutes les 15 min, et les résultats ont été enregistrés pendant 32 h. L'effet de H2O2 sur les cellules PC12 a été analysé à l'aide du logiciel d'analyse de données xCELLigence RTCA. La valeur de l'indice cellulaire (IC) a été utilisée pour déterminer la concentration optimale de H2O2 et la durée d'action.
Extraction et isolement de composés
Les fractions ont été séparées en fonction de leur polarité en utilisant les méthodes décrites précédemment. Séché à l'air, P. martini en poudre (4 kg) a été successivement extrait trois fois avec une solution aqueuse d'éthanol à 75 % [20]. Les extraits obtenus ont ensuite été concentrés à l'aide d'un évaporateur rotatif pour éliminer l'éthanol, et des extraits bruts ont été obtenus. Les échantillons ont été dissous dans de l'eau déminéralisée puis extraits successivement avec de l'éther de pétrole, de l'acétate d'éthyle, du n-butanol et de l'eau. L'extrait de n-butanol (400 g) a été fractionné à l'aide d'une colonne de résine macroporeuse AB-8 et d'une solution d'éthanol-H2O2 (0, 1{{47} }, 30, 50, 70 et 95 %). Six fractions (fractions 1 à 6) ont finalement été obtenues. Les fractions 3 et 4 ont été soumises à une séparation à l'aide d'une colonne MCI avec un gradient progressif de MeOH-H2O2 (10 à 100 %). Ensuite, les produits ont été isolés à l'aide de Sephadex LH-20 avec 50 % de MeOH comme éluant. Les composés 1 (41,0 mg) et 6 (15,6 mg) ont été isolés de la fraction 3. Les composés 2 (62,0 mg), 3 (34,7 mg), 7 (11,0 mg) et 8 (26,0 mg) ont été obtenus à partir de la fraction 4 à l'aide de Sephadex Chromatographie LH-20 avec 50 % de MeOH comme éluant. Les isolements finaux ont été réalisés par HPLC semi-préparatoire en phase inversée (Merck LiChrosorb, RP -18, RP -18, 250 × 10 mm) avec 50 % de MeOH et détection UV à 280 nm pour produire les composés 4 (39,0 mg) et 5 (9,0 mg) [20].
Essai de viabilité cellulaire
Les cellules PC12 ont été ensemencées dans des 96-plaques à puits à une densité de 2 × 1{{10}}4 cellules/puits à un volume final de 100 µL . Les cellules PC12 ont été incubées à 37 degrés avec 5 % de CO2 pendant 12 h. Ensuite, les cellules ont été traitées avec diverses concentrations d'extraits bruts (0.025, 0,05, 0,1, 0,2 et 0,4 mg/mL) et composés 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8 à cinq concentrations (3,125, 6,25, 12,5, 25 et 50 μM). Après un prétraitement de 24 h, la viabilité cellulaire a été déterminée par des tests MTS. Les cellules PC12 ont été préincubées avec ou sans l'inhibiteur HO-1 sans ZnPP (15 μM) pendant 30 min, puis incubées avec ou sans caleolarioside B, paraboside B et paraboside II (3,125 μM) pendant 12 h, et enfin incubées avec 400 μM H2O2 pendant encore 6 h. Après traitement, le nombre de cellules survivantes a été déterminé par un test MTS [6].
Effets protecteurs des extraits bruts et des composés monomères sur les cellules PC12 traitées à l'H2O2-
Les cellules ont été cultivées dans une plaque {{0}}puits à un volume final de 100 µL. Des dilutions en série d'extraits bruts (0.025, 0,05, 0,1, 0,2 et 0,4 mg/mL) ont été ajoutées au groupe traité. Après un prétraitement de 12 h, 400 μM de solution H2O2 (concentration optimale) ont été ajoutés au groupe traité et au groupe H2O2 de chaque puits pendant 6 h. Une solution de MTS a ensuite été ajoutée à chaque puits et les plaques ont été incubées pendant 3 h à 37 °C. Les plaques ont été oscillées à faible vitesse pendant 5 min à température ambiante jusqu'à ce que tous les cristaux soient complètement dissous. La protection cellulaire a été déterminée sur la base des résultats du test MTS selon le fabricant 2204 X. GONG ET AL. Téléchargé depuis https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145 par invité le 27 août 2021instructions. La densité optique a été déterminée à une longueur d'onde d'absorbance de 490 nm. Nous avons en outre suivi l'activité des composés 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8 isolés des fractions 3 et 4. Dilutions en série des composés 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8 (3,125, 6,25, 12,5, 25 et 50 μM) ont été ajoutés au groupe traité pour déterminer leurs effets protecteurs respectifs sur les cellules PC12 induites par H2O2-.
Glycosides phényléthanoïdes de Cistanche deserticola : Protège les neurones & anti-âge
PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR)
Les cellules PC12 ont été récoltées 12 h après le traitement avec 3,125 μM de caleolarioside B, de paraboside B et de paraboside II. L'ARN total a été extrait à l'aide du réactif TRIzol et des aliquotes d'ARN total ont été transcrites à l'aide d'un kit Primescript RT Master conformément aux instructions du fabricant. Les amorces suivantes ont été utilisées pour les expériences conformément à un rapport précédent [21]. HO-1 : avant 5′ -GC CTGCTAGCCTGGTTCAAG-3′, arrière 5′ -AGC GGTGTCTGGGATGAACTA-3′ ; GCLC : 5′ avant - GTCCTCAGGTGACATTCCAAGC-3′, 5′ arrière -TG TTTCTTCAGGGGCTCCAGTC-3′ ; GAPDH : 5′-AAGCTGGTCATCAACGGGAAAC-3′, 5′-GAAGACCGCCAGTAGACTCCACG-3′. Des aliquotes des ADNc obtenus ont ensuite été amplifiées par PCR. Les conditions de réaction étaient les suivantes : dénaturation initiale à 95 degrés (30 s), suivie de 40 cycles à 95 degrés (5 s), 60 degrés (34 s) et 72 degrés (35 s). Toutes les amorces ont été testées et le signal fluorescent FL a été détecté ; ensuite, la valeur △Ct a été calculée et les valeurs relatives ont été comparées à celles du groupe témoin en utilisant l'équation suivante : △Ct=Ct (échantillon) − Ct (témoin endogène), △△Ct {{36} } △Ct (échantillon) −△Ct (non traité) et changement de pli=2−△△Ct. La glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) a été utilisée comme contrôle interne.
Extraction de protéines
Les cellules PC12 ont été ensemencées sur des boîtes de 100- mm à 1 × 107 cellules/boîte. Après fixation, les cellules ont été respectivement traitées avec du caleolarioside B, du paraboside B et du paraboside II (3,125 µM) pendant 12 h. Les glycosides ont ensuite été éliminés et les cellules ont été incubées avec H2O2 pendant 6 h supplémentaires. Après incubation, les cellules ont été lavées deux fois avec du PBS froid et grattées des boîtes avec 1 ml de PBS. Les homogénats cellulaires ont été centrifugés à 1500 tr/min pendant 10 min. Après traitement, les protéines cellulaires ont été extraites à l'aide d'un tampon de lyse cellulaire Beyotime RIPA avec 1 mM de PMSF selon les instructions du fabricant. De plus, les protéines cytoplasmiques et nucléaires ont été isolées comme décrit dans le protocole du kit d'extraction nucléaire et cytoplasmique Beyotime. Les concentrations de protéines des échantillons ont été détectées à l'aide d'un kit de dosage de protéines Beyotime BCA, et tous les échantillons ont été stockés à -80 degrés pour une analyse par transfert Western [6].
Analyse Western blot
L'électrophorèse SDS-PAGE a été réalisée après extraction et dénaturation ultérieure des protéines totales de différents groupes. Après électrophorèse, la protéine a été transférée sur des membranes en PVDF, qui ont ensuite été bloquées avec du lait écrémé en poudre à 5 % pendant 4 h. Après lavage, anticorps primaire (anticorps polyclonal de lapin GAPDH (1:10,000 dilution), anticorps polyclonal de lapin HO-1 (dilution 1:1000) ou anticorps polyclonal de lapin GCLC (dilution 1:1000) a été ajouté aux membranes, qui ont été incubées pendant une nuit à 4 degrés. Le lendemain, les membranes de PVDF ont été lavées trois fois dans du TTBS. Ensuite, un anticorps secondaire (IgG de chèvre anti-lapin pur d'affinité conjugué (dilution 1:1000) marqué avec de la peroxydase de raifort a été ajoutée aux membranes, qui ont ensuite été incubées à température ambiante pendant 2 h.Les membranes de PVDF ont été lavées et soumises à un réactif de détection de chimiluminescence ECL pour signaler l'exposition sur un film radiographique, qui a ensuite été fixé et scanné [22].
analyses statistiques
Les données ont été analysées à l'aide de SPSS 19.0, et les résultats sont présentés sous forme de moyennes avec écart type (SD) de trois expériences indépendantes. Les valeurs de p < 0.05="" ont="" été="" considérées="" comme="" indiquant="" des="" différences="" statistiquement="">
Résultats Etablissement du modèle H2O2
Comme le montre la figure 2, H2O2 à 50, 100 et 200 μM n'a pas provoqué le niveau approprié de mort cellulaire. Cependant, 400 μM H2O2 ont agi sur les cellules PC12 en 2 à 6 h, et les dommages oxydatifs aux cellules avaient tendance à être stables. Par conséquent, nous avons considéré que l'induction avec H2O2 à une concentration de 400 μM pendant 6 h était appropriée pour imiter les lésions induites par le stress oxydatif sur les cellules PC12.
Effets protecteurs des extraits bruts sur les cellules PC12 traitées avec H2O2
Comparé à celui du groupe modèle H2O2 (Figure 3), extrait de n-butanol à des concentrations de 0.05, 0.1, {{10} }.2 et 0.4 mg/mL ont significativement amélioré les dommages oxydatifs des cellules PC12 induits par H2O2 (p < 0.05)="" d'une="" manière="" dépendante="" de="" la="" concentration.="" ces="" données="" suggèrent="" que="" la="" fraction="" de="" n-butanol="" contient="" une="" activité="" protectrice="" plus="" puissante.="" cependant,="" les="" extraits="" d'éther="" de="" pétrole="" et="" d'acétate="" d'éthyle="" n'ont="" montré="" une="" activité="" protectrice="" qu'à="" des="" concentrations="" élevées="" (éther="" de="" pétrole :="" 0.1="" et="" 0.2="" mg/ml,="" p="">< 0.{{31}="" }5="" ;="" acétate="" d'éthyle="" :="" 0,2="" et="" 0,4="" mg/ml,="" p="">< 0,05).="" de="" plus,="" différentes="" concentrations="" d'extraits="" de="" phase="" aqueuse="" n'ont="" montré="" aucun="" effet="" protecteur="" (p=""> 0,05). De plus, nous avons ajouté des données d'une étude de validation utilisant des lignées cellulaires de neuroblastome humain SH-SY5Y (SH-SY5Y) dans le fichier supplémentaire. Le traitement avec 250 μM H2O2 a entraîné une diminution de la viabilité cellulaire ; cependant, le traitement au caleolarioside B, au paraboside B et au paraboside II (3,125, 6,25, 12,5, 25 et 50 μM) a considérablement atténué la mort des cellules SH-SY5Y. Les résultats de l'expérience ont prouvé que le caleolarioside B, le paraboside B et le paraboside II protégeaient les cellules SHSY5Y des lésions cellulaires induites par H2O2-.
Structures des composés isolés de la fraction n-butanol
Pour confirmer que l'extrait de n-butanol contenait des composants actifs, nous avons en outre fractionné huit composés de l'extraction. Les structures des composés 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8 ont été identifiées par différentes données spectrales (1 H-NMR, 13C-NMR et ESI-MS) basées sur des comparaisons avec les données publiées pour le paraboside A , paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B et isonuomioside A, respectivement [20]. Par exemple, les données pour le paraboside B étaient les suivantes : gomme brune ; ½ 20 D -55,7 (c 0,05, CH3OH) [20] ; UVMeOH max nm (logε) : 220 (3,61), 291 (3,54), 330 (3,66) [20] ; IRKBr max cm−1 : 3392, 2943, 2885, 1699, 1683, 1606, 1521, 1361, 1282, 1163, 1114, 1039, 995, 817 cm−1 [20] ; pour les données spectroscopiques RMN 1H et 13C détaillées présentées dans la référence 20; HR-ESI-MS (négatif) m/z 741,2231 [MH]− (calculé pour C33H41O19, 741,2242) [20]. Les données pour le paraboside II étaient les suivantes : poudres blanches amorphes ; ½ 20 D -80,5 (c 0,05, CH3OH) [20] ; UVMeOH max nm (logε) : 229 (3,74), 322 (3,73) [20] ; IRKBr max cm−1 : 3419, 1699, 1625, 1596, 1515, 1456, 1419, 1263, 1159, 1139, 1068, 1022, 808 cm−1 [20] ; pour les données spectroscopiques RMN 1H et 13C détaillées présentées dans la référence 20; ESI-MS (négatif) m/z 637
Effets protecteurs de composés isolés contre la toxicité induite par H2O2-dans les cellules PC12
Des tests MTS ont été utilisés pour étudier l'effet de composés isolés sur la viabilité des cellules PC12 exposées à la toxicité induite par H2O2-. Comme le montre la figure 5, par rapport à celle du groupe témoin, les cellules PC12 ont été prétraitées avec cinq concentrations différentes de caleolarioside B, de paraboside B, de paraboside II ou de paraboside A (3,125, 6,25, 12,5, 25 et 50 μM) pendant 24 h n'a montré aucune différence significative dans la viabilité cellulaire (p > 0,05). Ainsi, le prétraitement des cellules PC12 avec le caleolarioside B, le paraboside B et le paraboside II n'a entraîné aucune cytotoxicité. Comme le montre la figure 6, 400 µM H2O2 a considérablement diminué la viabilité cellulaire par rapport à celle du groupe témoin. De plus, la viabilité cellulaire des cellules PC12 traitées à l'H2O2- a nettement augmenté après le prétraitement des cellules PC12 avec différentes concentrations de caleolarioside B, de paraboside B et de paraboside II ; en outre, la viabilité cellulaire était la plus élevée après un traitement avec 50 µM de caleolarioside B, 50 µM de paraboside B et 12,5 µM de paraboside II. Les cinq autres composés n'ont montré aucun effet protecteur significatif sur les cellules PC12 traitées à l'H2O2-. Pour illustrer cette constatation, nous discutons de l'un d'entre eux à titre d'exemple, tandis que les autres ne sont pas décrits dans le manuscrit.
Niveaux de transcription de HO-1 et GCLC
Nous avons ensuite testé les niveaux transcriptionnels de HO{{0}} et GCLC dans des cellules PC12 traitées avec le caleolarioside B, le paraboside B et le paraboside II. L'ARNm total a été collecté à partir de cellules PC12 traitées et non traitées pendant 12 h, puis soumis à une analyse d'expression par qRT-PCR. Comme le montre la figure 7 (a, c, e), les niveaux de transcription de HO -1 ont augmenté de manière significative après que les cellules PC12 ont été prétraitées avec les concentrations indiquées de caleolarioside B, de paraboside B et de paraboside II pendant 12 h (p < 0.05).="" comme="" le="" montre="" la="" figure="" 7="" (b),="" les="" niveaux="" de="" transcription="" de="" gclc="" ont="" également="" augmenté="" de="" manière="" significative="" dans="" les="" cellules="" pc12="" prétraitées="" avec="" les="" concentrations="" indiquées="" de="" caleolarioside="" b="" pendant="" 12="" h.="" cependant,="" les="" niveaux="" de="" gclc="" dans="" les="" cellules="" pc12="" prétraitées="" avec="" du="" paraboside="" b="" pendant="" 12="" h="" ont="" diminué="" de="" manière="" significative="" par="" rapport="" à="" ceux="" du="" groupe="" modèle="" (p=""><0, 05;="" figure="" 7="" (d)).="" de="" plus,="" avec="" le="" traitement="" au="" paraboside="" ii,="" les="" niveaux="" de="" gclc="" dans="" les="" cellules="" pc12="" n'étaient="" pas="" significativement="" différents="" de="" ceux="" du="" groupe="" modèle="" (p=""> 0, 05; figure 7 (f)).
Expression de HO-1 et GCLC
HO{{0}} et GCLC sont des enzymes antioxydantes cellulaires importantes, et les deux sont des gènes en aval régulés par Nrf2-. L'expression protéique de HO-1 et GCLC a également été observée après traitement [6]. La figure 8 montre les niveaux de protéines de HO -1 et GCLC dans les cellules PC12 après traitement avec 400 μM H2O2 ; les résultats ont indiqué que les intensités de fluorescence FL de HO-1 dans les groupes caleolarioside B et paraboside B étaient supérieures à celles des groupes traités avec H2O2- (Figure 8(a,c)). Cependant, l'expression de GCLC n'a pas été significativement modifiée par les composés, à l'exception du caleolarioside B (Figure 8(b)). Ensuite, des inhibiteurs chimiques de HO-1 ont été utilisés pour évaluer davantage les rôles des enzymes antioxydantes dans la régulation des effets protecteurs exercés par le caleolarioside B, le paraboside B ou le paraboside II contre la cytotoxicité induite par H2O2-. Le caléolarioside B, le paraboside B et le paraboside II (3,125 μM) ont empêché la cytotoxicité induite par H2O2-, mais ces effets protecteurs ont été inversés par l'inhibiteur de HO-1 ZnPP (p <0,01) à="" 15 μm="" (figure="" 8="">
Le bienfait de Cistanche : Augmenter la reproduction mâle
Discussion
Le vieillissement de la population est un grave problème mondial. De nombreuses maladies sont liées à la sénilité, telles que la MA et la MP, qui constituent de sérieuses menaces pour la santé publique. La MA et la MP sont devenues les troisièmes maladies les plus meurtrières au monde, après les maladies cardiovasculaires et le cancer. Par conséquent, la neurodégénérescence est devenue un sujet de recherche urgent dans le monde entier. Cependant, la pathogénie de la MA et de la MP, maladies neurodégénératives du système nerveux central, est restée incertaine à ce jour. De plus, seuls quelques médicaments peuvent traiter efficacement la MA ou la MP en raison de leurs mécanismes pathogènes complexes [23]. Des études antérieures ont montré que les ROS, tels que l'anion superoxyde (O2−) et H2O2, sont les principaux facteurs contribuant aux maladies neurodégénératives. Les changements pathologiques au cours de la MP comprennent la dégénérescence neuronale et la mort de la substance noire et de la dopamine striatale [24,25]. En conséquence, il est important de développer des médicaments antioxydants efficaces pour traiter la MP, et une telle découverte de médicaments est devenue une direction de recherche importante [26]. Actuellement, la voie de signalisation Nrf2/ARE semble être la voie de stress antioxydant endogène la plus importante [27]. Ares est situé dans les régions de classement 5′-remplir des gènes, tels que HO-1 et GCLC [28,29]. HO-1 et GCLC sont des gènes liés à Nrf2- qui sont régulés en aval de cette protéine [6]. Les ARE peuvent ensuite affecter les niveaux d'antioxydants et activer l'expression en aval de HO-1 et d'autres gènes protecteurs, ce qui pourrait améliorer les activités de protection cellulaire [30,31]. De plus, les résultats suggèrent que les effets protecteurs du resvératrol contre la toxicité induite par A {{2{{50}}}} dans les cellules PC12 se produisent par la régulation à la hausse de l'expression de HO-1 via l'activation du Nrf2 intracellulaire voie de signalisation [32]. Les cellules PC12 sont un modèle accepté de cellules neurales et sont largement utilisées dans les études d'effet neuroprotecteur [33]. H2O2 peut facilement traverser la membrane cellulaire et se combiner avec le fer pour former des radicaux libres hautement actifs, qui induisent un stress oxydatif et des lésions cellulaires [34]. H2O2 est un ROS important, et les radicaux libres sont facilement générés et relativement stables, ils sont donc généralement utilisés pour établir un modèle de stress oxydatif à l'aide de cellules PC12 [5]. Dans cette étude, le prétraitement des cellules PC12 avec des concentrations non toxiques de l'extrait de plante a protégé les cellules de la cytotoxicité induite par H2O 2- en diminuant la génération de ROS. Les glycosides phényléthanoïdes contiennent de nombreux groupes hydroxyles phénoliques qui ont des activités antioxydantes et antivieillissement. Dans cette étude, nous avons constaté que l'extraction du n-butanol produisait une meilleure protection que les autres fractions de polarité (Figure 3). Ainsi, nous avons en outre criblé les activités protectrices de huit composés isolés de la fraction n-butanol. Les résultats ont montré pour la première fois que Figure 8. Analyse des niveaux de protéines HO-1 et GCLC sur des cellules PC12. ( a ) L'analyse par Western blot de l'expression de HO -1 et GCLC et GAPDH a été utilisée comme contrôle de chargement. ( b ) Analyse par Western blot Expression de la protéine GCLC. (c) Analyse Western blot Expression de la protéine HO-1. ( d ) L'inhibiteur de HO -1 ZnPP a réduit l'effet neuroprotecteur. Les données sont présentées sous forme de moyennes ± SD, n=3. ***p < 0.001="" versus="" groupe="" témoin ;="" #p="">< 0,05="" versus="" groupe="" h2o2="" (sans="" znpp="" traité),="" ##p="">< 0,01="" versus="" groupe="" h2o2="" (sans="" znpp="" traité),="" ###p="">< 0,001="" versus="" groupe="" h2o2="" (sans="" znpp="" traité)="" ;="" et="" p="">< 0,01,="" contre="" le="" groupe="" h2o2="" (avec="" znpp="" traité),="" et="" &p="">< 0,001,="" contre="" le="" groupe="" h2o2="" (avec="" znpp="" traité).="" (groupe="" témoin ;="" groupe="" modèle :="" h2o2 ;="" groupe="" négatif="" znpp :="" caleolarioside="" b="" plus="" h2o2,="" paraboside="" b="" plus="" h2o2,="" paraboside="" ii="" plus="" h2o2 ;="" groupe="" positif="" znpp :="" znpp="" plus="" caleolarioside="" b="" plus="" h2o2,="" znpp="" plus="" paraboside="" b="" plus="" h2o2,="" znpp="" plus="" paraboside="" ii="" plus="" h2o2).="" 2210="" x.="" gong="" et="" coll.="" téléchargé="" à="" partir="" de="" https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145="" par="" un="" invité="" le="" 27="" août="" 2021,="" le="" caleolarioside="" b,="" le="" paraboside="" b="" et="" le="" paraboside="" ii="" ont="" des="" effets="" protecteurs="" significatifs="" contre="" l'oxydation="" induite="" par="" h2o2-="" dommages="" dans="" les="" cellules="" pc12.="" les="" résultats="" ont="" également="" indiqué="" que="" le="" traitement="" au="" h2o2="" induisait="" des="" lésions="" cellulaires="" pc12="" importantes="" et="" une="" diminution="" de="" la="" viabilité="" cellulaire,="" tandis="" que="" le="" traitement="" au="" caleolarioside="" b,="" au="" paraboside="" b="" et="" au="" paraboside="" ii="" atténuait="" considérablement="" ces="" effets="" (figure="" 6).="" une="" étude="" précédente="" a="" rapporté="" que="" la="" voie="" nrf2/are="" est="" l'une="" des="" voies="" antioxydantes="" endogènes="" les="" plus="" importantes="" et="" peut="" réguler="" à="" la="" hausse="" l'expression="" de="" marqueurs="" en="" aval,="" tels="" que="" ho-1,="" pour="" protéger="" les="" cellules="" [7].="" les="" résultats="" des="" analyses="" qrt-pcr="" et="" western="" blot="" ont="" montré="" que="" le="" caleolarioside="" b,="" le="" paraboside="" b="" et="" le="" paraboside="" ii="" régulaient="" significativement="" à="" la="" hausse="" les="" niveaux="" de="" ho-1.="" cependant,="" les="" niveaux="" transcriptionnels="" de="" gclc="" ont="" augmenté="" de="" manière="" significative="" dans="" les="" cellules="" pc12="" prétraitées="" avec="" le="" caleolarioside="" b="" mais="" ont="" diminué="" chez="" celles="" prétraitées="" avec="" le="" paraboside="" b="" par="" rapport="" à="" celles="" du="" groupe="" modèle.="" de="" plus,="" le="" paraboside="" ii="" n'a="" pas="" modifié="" l'expression="" de="" ce="" marqueur,="" par="" rapport="" à="" celle="" du="" groupe="" modèle="" (figures="" 7="" et="" 8(a–c)).="" de="" plus,="" les="" effets="" protecteurs="" du="" caleolarioside="" b,="" du="" paraboside="" b="" et="" du="" paraboside="" ii="" contre="" les="" lésions="" cellulaires="" pc12="" induites="" par="" h2o2-="" ont="" été="" inversés="" par="" l'inhibiteur="" de="" ho-1="" znpp="" (figure="" 8(d)).="" en="" conclusion,="" les="" glycosides="" phényléthanoïdes="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" et="" paraboside="" ii="" ont="" efficacement="" protégé="" les="" cellules="" pc12="" des="" dommages="" oxydatifs="" induits="" par="" h2o2-.="" ainsi,="" ces="" composés,="" isolés="" de="" p.="" martini,="" pourraient="" représenter="" des="" candidats="" médicaments="" potentiels="" pour="" le="" traitement="" des="" maladies="">
Le bénéfice de Cistanche :traitement des maladies neurodégénératives
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