Biomarqueurs de déchirure potentiels pour le diagnostic de la maladie de Parkinson - Une étude piloteⅡ

3. Résultats

3.1. Patients et paramètres cliniques

Entre mars 2019 et octobre 2019, 24 patients atteints de MPi, trois porteurs symptomatiques de la mutation E46K-SNCA et 27 sujets CT ont été inclus dans cette étude pilote dont les caractéristiques générales sont présentées dans le tableau 1. La durée moyenne de la maladie des patients parkinsoniens était de 9,36 ans, et ils avaient une incapacité motrice bilatérale légère (score UPDRS) et des scores de Hoehn et Yahr suggérant une incapacité motrice légère à modérée. Une caractéristique des patients IPD était que 40 pour cent d'entre eux avaient une blépharite légère à modérée.

3.2. Données nLC MS/MS Un total de 560 protéines lacrymales ont été identifiées dans les échantillons analysés ici, par des études protéomiques précédentes sur les larmes, et plusieurs altérations du protéome lacrymal spécifiques à un groupe étaient évidentes chez les patients parkinsoniens par rapport aux CT. Des protéines d'abondance différente avec les études protéomiques précédentes sur les larmes et plusieurs altérations du protéome des larmes spécifiques à un groupe étaient évidentes chez les patients atteints de MP par rapport aux CT. Des protéines avec des abondances différentes ont été détectées dans les deux groupes, bien que la plupart des protéines dérégulées dans le protéome lacrymal des patients parkinsoniens aient été surexprimées. Une analyse du réseau STRING PPI a été réalisée pour évaluer les interactions entre les protéines qui différaient significativement chez les patients parkinsoniens et CT (Figure 1). Les protéines surexprimées chez les patients atteints de MP ont été impliquées dans beaucoup plus d'interactions que prévu, ce qui indique que les augmentations de ces protéines ont un lien biologique (Figure 1A). Cependant, des relations plus faibles ont été observées entre les protéines qui ont été régulées à la baisse, représentant un cluster différencié (figure 1B). La plupart des protéines différentiellement exprimées pourraient être localisées dans les compartiments extracellulaires ou intracellulaires.

Pour mieux comprendre le rôle potentiel des protéines différentiellement exprimées dans un contexte biologique, des analyses d'annotations fonctionnelles ont été réalisées avec différents termes d'ontologie génique (GO). En conséquence, les protéines dérégulées se sont révélées être impliquées dans différents processus biologiques (Figure 2) : la réponse immunitaire (lipocaline 2—LCN 2, serpine B3—SPB3, peptide sécrété par les cellules dendritiques folliculaires—FDSCP, cadhérine—MFGM et gélatinase des neutrophiles- lipocaline associée - NGAL) ; apoptose (olfactomédine-4—OLFM4, caspase-14—CASPE et gamma-glutamyl cyclotransférase—GGCT); inflammation (Calprotectine-S100A8, S100A9); dégradation du collagène (myéloblastique - PRTN3 et métalloprotéinase 9 - MMP9) ; la synthèse protéique (ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A3-ROA3) ; la différenciation des kératinocytes (calmodulin-like protein 5 - CALML5) ; le transport des lipides (apolipoprotéine D-APOD, apolipoprotéine A2-APOA2 et low-density-lipoprotein-related protein 2-LRP2) ; et défense (myéloperoxydase—MPO, défensine alpha 3—DEFA 3, glutathion peroxydase 3—GPX3, chitinase-3-like protein 2—CH3L2 et lysozyme C—LYSC).

Si les patients parkinsoniens étaient considérés tous ensemble et séparément en tant que patients iPD et patients porteurs de la mutation E46K-SNCA, les protéines lacrymales régulées à la hausse étaient évidentes dans ces trois groupes, leur expression variant dans chacun (Figure 3). Il est à noter que seuls trois patients porteurs de la mutation E46K-SNCA ont été étudiés, et la dispersion des données à partir de là était plus importante. Les mêmes protéines étaient plus fortement exprimées dans les larmes des patients porteurs de la mutation E46K-SNCA que dans les larmes des patients atteints d'iPD. Toutes ces comparaisons ont été faites sur les valeurs relatives à celles des échantillons de déchirures CT.

Le tableau 2 montre les protéines qui ont été régulées à la hausse (pli > 1,5) et à la baisse (pli <0.5) dans le groupe IPD avec blépharite par rapport aux patients IPD sans blépharite. Les patients porteurs de la mutation E46K-SNCA n'ont pas développé de blépharite.

Parmi les protéines lacrymales dérégulées chez les patients parkinsoniens, un groupe de six protéines s'est démarqué dont cinq surexprimées dans le groupe MP par rapport aux CT (prélamine A/C-LMNA, cathepsine D-CATD, céramidase acide-ASAH1, endoplasmique transitionnelle reticulum ATPase-TERA et dynéine cytoplasmique 1-DYHC1), alors que l'une d'entre elles était régulée à la baisse (tripeptidyl-peptidase 1-TPP1 : tableau 3). Ces protéines étaient associées à des processus neurodégénératifs, principalement des altérations de l'autophagie lysosomale, de l'apoptose, du transport axonal rétrograde et des processus de démyélinisation. Il était intéressant de noter la relation de ces protéines avec des altérations de la fonction lysosomale. Sur les six protéines, trois présentaient une bonne capacité à classer correctement les patients parkinsoniens et les CT, comme en témoignent les valeurs AUC des courbes ROC, et elles étaient liées à des altérations de la fonction lysosomale : CATD, ASAH1 et DYHC1.

L'analyse de régression logistique univariée a identifié quatre variables statistiquement significatives à=0.05 : l'âge des patients et le facteur de variation des protéines CATD, ASAH1 et DYHC1 (tableau 4).

De plus, les protéines LMNA et DYHC1 se sont avérées avoir une signification statistique à=0.1. Un modèle de régression logistique multivariée a été établi en considérant l'âge et les protéines avec n'importe quel niveau de signification. Alors que le modèle général n'a montré de signification que dans le cas de la protéine CATD (tableau 5), le modèle a probablement été affecté par le petit nombre d'échantillons disponibles, et l'augmentation du nombre d'échantillons étudiés pourrait bien identifier d'autres variables significatives.

4. Discussion

La présente étude a été réalisée pour analyser les protéines par chromatographie nano-liquide–spectrométrie de masse (nLC–MS/MS) et sélectionner celles liées aux maladies neurodégénératives qui avaient un pouvoir discriminant plus élevé entre les groupes PD et TC étudiés. Plusieurs recherches de biomarqueurs candidats dans les larmes de patients parkinsoniens ont été effectuées ces dernières années ; cependant, la conclusion était que d'autres études de validation étaient nécessaires pour trouver le meilleur biomarqueur diagnostique ou pronostique candidat pour cette pathologie. Le diagnostic de la MP repose actuellement sur la présence de symptômes moteurs et non moteurs, notamment des troubles du sommeil ou des déficits olfactifs. Les symptômes moteurs apparaissent principalement lorsque la perte de neurones dopaminergiques atteint environ 50 à 60 %.

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Par conséquent, parvenir à un diagnostic précoce ouvrira la voie pour modifier l'évolution de la maladie et, espérons-le, retarder l'invalidité grave causée par cette pathologie. Cette question est devenue un aspect clé de la recherche sur la MP, même si le manque de biomarqueurs valides représente un obstacle majeur qui empêche l'identification des patients en stade préclinique ou prodromique, ainsi que le suivi de l'évolution de la maladie et des effets des traitements.

Pour cette raison, la présente étude a entrepris de rechercher un biomarqueur fiable de la MP dans un fluide non invasif, tel que les larmes. L'œil possède de nombreux éléments neuronaux et vasculaires que l'on retrouve également dans le cerveau, ce qui le rend idéal pour la découverte de nouveaux biomarqueurs qui pourraient être utilisés pour diagnostiquer la MP ou d'autres maladies neurodégénératives, ainsi que pour la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques. Ici, les larmes de patients PD et CT ont été obtenues à travers des capillaires en verre sans anesthésie préalable et sans toucher la surface oculaire. Des études pilotes précédentes sur les déchirures de patients ont été réalisées avec un groupe de déchirures de patients [19], et notre analyse est la première analyse de déchirure individuelle qui permettra l'identification de marqueurs individuels spécifiques. En utilisant des capillaires pour obtenir les échantillons de déchirure, nous évitons de toucher l'épithélium conjonctival, distinguant ainsi les protéines trouvées dans la déchirure des protéines conjonctivales, comme cela se produit avec l'utilisation des bandes de Schirmer. Dans notre étude, nous avons trouvé des protéines significativement dérégulées chez les patients parkinsoniens.

Ces protéines sont principalement impliquées dans les processus inflammatoires et neurodégénératifs, l'apoptose et les réponses immunitaires. L'inflammation est omniprésente dans les maladies neurodégénératives, y compris la MP, et des études récentes ont identifié que les épitopes de cellules T dérivés de la syn sont préférentiellement reconnus chez les patients atteints de MP, ainsi que les cellules T dans les régions cibles de la MP, suggérant peut-être une composante auto-immune de la MP [20 ]. On pensait que les neurones étaient protégés contre les attaques auto-immunes, mais les neurones dopaminergiques sont vulnérables car ils ont des protéines à la surface de leurs cellules qui aident le système immunitaire à reconnaître les substances étrangères [21]. Les cellules T peuvent potentiellement confondre les neurones endommagés par la maladie avec des substances étrangères et, par conséquent, Sulzer et al. ont proposé un modèle dans lequel les cellules T spécifiques de -syn provoquent la mort neuronale dans les maladies neurodégénératives associées à un mauvais repliement spécifique de cette protéine. Dans notre étude, des groupes de protéines dérégulées liées à la réponse immunitaire, telles que LCN2, SPB3 et FDSCP, entre autres, ont été observés dans des échantillons de larmes. Cependant, certaines immunoglobulines impliquées dans la réponse immunitaire, comme l'IgA2, n'ont pas présenté de différences statistiquement significatives entre le groupe PD et le groupe CT.

D'autres études sont nécessaires pour déterminer si cette relation entre la réponse immunitaire et les protéines présentes dans les larmes est directement liée à la MP. La neuroinflammation peut être définie comme un événement inflammatoire non spécifique dans le cerveau, et l'ensemble du SNC a une composante neuroinflammatoire, qui est évidente dans des maladies telles que la sclérose en plaques (SEP), les anévrismes cérébraux et les accidents vasculaires cérébraux, l'épilepsie, la MA et la MP, et dans lequel l'activité des enzymes dégradant la matrice extracellulaire (ECM) ou des métalloprotéases (MMP) a été impliquée. Les MMP participent à de nombreux processus physiologiques et pathologiques dans le cerveau et le sang. La barrière hémato-encéphalique (BHE) est formée par les capillaires endothéliaux qui séparent l'apport sanguin au cerveau, et sa fonction réside dans trois structures essentielles à son intégrité : les cellules endothéliales des capillaires cérébraux, les jonctions serrées (TJ ) entre ces cellules et la membrane basale. L'endothélium est une barrière aux petits composés hydrophiles car les TJ scellent les espaces entre les cellules endothéliales adjacentes, empêchant le passage incontrôlé des solutés entre ces cellules et convertissant l'endothélium cérébral en une barrière relativement imperméable [22,23].

Cependant, la membrane basale relie ces cellules endothéliales aux péricytes et aux astrocytes pour former l'unité neurovasculaire qui facilite la communication entre les cellules. Cette membrane est fondamentale pour le bon fonctionnement de la BHE et, à ce titre, pour l'homéostasie du cerveau et sa santé générale. Il a été proposé que les MMP perturbent spécifiquement les TJ et qu'elles digèrent la membrane basale de l'endothélium, contribuant ainsi à certaines maladies du cerveau [24]. Bien qu'il soit techniquement difficile de démontrer l'activité des MMP in vivo, une activité plus forte des MMP était associée à une plus grande perméabilité à la BHE suite à un accident vasculaire cérébral et lors de la reperfusion in vivo [25]. Une augmentation de l'ARNm et de l'activité des MMP-2 et MMP-9 a été décrite après reperfusion chez des rats hypertendus présentant une occlusion de l'artère cérébrale médiale (OACM) [26]. De plus, une fuite de BBB a également été détectée dans le cortex piriforme de ces rats, en conjonction avec la perturbation des TJ, indiquant que ces MMP altèrent l'intégrité de la BBB en dégradant les protéines TJ [26]. En tant que tel, et malgré les défis techniques, il existe certaines preuves que les MMP digèrent les protéines TJ et ECM in vivo.

L'expression et l'activité de MMP-1, -2 et -9 ont été déterminées dans le tissu cérébral post-mortem de patients atteints de MP, et bien qu'aucun changement n'ait été observé dans MMP-1 et MMP -9 par rapport aux témoins appariés selon l'âge, une réduction de 50 % de l'activité MMP-2 était évidente dans le SN des patients atteints de MP [27]. Il a été proposé que l'activité plus faible de MMP 2 pourrait aider les neurones dopaminergiques et leurs neurites à survivre dans le SN [27]. De plus, MMP-3 a également été étudié à propos de PD, qui pourrait potentiellement être impliqué dans le clivage de -syn. MMP-3 clive -syn purifié in vitro et l'agrégation de -syn augmente en présence d'agrégats de MMP-3 qui seraient particulièrement dommageables pour les cellules dopaminergiques dans la MP. De manière significative, MMP-1, -2 et -9, et MT1-MMP clivent également -syn purifié, bien que moins efficacement que MMP-3 [28]. La MMP-3 semble être impliquée dans la neurodégénérescence dopaminergique, la neuroinflammation et l'intégrité de la BHE dans la MP ; cependant, d'autres études seront nécessaires pour clarifier le rôle de toutes ces MMP dans la MP et si leur inhibition spécifique pourrait représenter une stratégie thérapeutique valable. Ici, les niveaux de MMP-9 étaient plus élevés dans la déchirure des patients parkinsoniens, à la fois les patients iPD (2,8- fois) et ceux porteurs de la mutation E46K-SNCA (3- fois).

Ces derniers patients parkinsoniens n'ont pas développé de blépharite, ce qui suggère que l'augmentation des concentrations de MMP-9 n'est pas aussi fortement associée à la blépharite qu'à la pathologie de la MP. Cependant, en analysant les groupes d'iPD séparément, nous constatons qu'il y a une surexpression de MMP-9 plus forte chez les patients IPD atteints de blépharite, 3,08 fois plus que chez les patients IPD sans blépharite. Nous avons précédemment étudié la contribution de cette MMP à la déchirure chez des patients présentant des pathologies de la surface oculaire [29,30]. Cependant, d'autres études seront nécessaires pour déterminer si l'augmentation de MMP-9 est directement liée à la MP ou à des pathologies de la surface oculaire qui pourraient altérer l'analyse des larmes.

Les preuves s'accumulent sur le rôle important du métabolisme énergétique dans les maladies neurodégénératives, y compris la MP. Les fractions lipidiques anormales et la peroxydation lipidique ont été évaluées chez les patients parkinsoniens [31] et, par conséquent, les fractions lipidiques ont été proposées comme biomarqueurs protecteurs possibles de la MP. Des études épidémiologiques récentes sur une cohorte prospective ou avec des plans cas-témoins ont tenté d'évaluer les associations entre les fractions lipidiques et le risque de MP [32–35]. Certaines de ces études portaient sur des échantillons de petite taille, tandis que d'autres n'examinaient que des fractions lipidiques spécifiques, principalement le cholestérol, ou contrôlaient un nombre limité de facteurs de confusion potentiels. Bien qu'une association constante ait été observée entre des taux de cholestérol plus élevés et un risque plus faible de MP, la cause sous-jacente est inconnue et il convient d'évaluer si des résultats similaires sont observés pour d'autres fractions lipidiques. Dans les échantillons de larmes testés ici, des membres de la famille des apolipoprotéines (APO) semblent dérégulés, une famille de protéines impliquées dans de nombreuses maladies neurodégénératives. La protéine APOE participe à plusieurs troubles cérébraux, notamment la maladie d'Alzheimer, la SEP, les lésions cérébrales traumatiques et la maladie de Creutzfeldt-Jakob [36-38], ce qui soulève la possibilité que l'ApoE puisse également jouer un rôle important dans le développement de la MP. De plus, des taux de cholestérol plus élevés ont été détectés dans le cerveau d'un modèle de souris transgénique de la MP, et puisque les APO sont impliquées dans le maintien de l'homéostasie du cholestérol, une association possible entre les APO et la MP pourrait exister [39].

Cependant, peu d'études se sont concentrées sur le rôle des APO dans la MP. Dans le SNC, les APO sont produites par les cellules gliales et sont absorbées par les neurones pour être utilisées dans la croissance des axones et pour l'activité synaptique. De plus, l'ApoE aurait un rôle neuroprotecteur, empêchant l'apoptose des neurones et des cellules ganglionnaires rétiniennes (RGC) [40]. L'expression des APO dans le cerveau humain est influencée par le type d'APO et l'âge de l'individu. Parmi les différents APO, ApoE, ApoD et ApoJ sont les plus fortement exprimés dans le cerveau. Cependant, leurs niveaux d'expression pourraient changer à différents stades de la vie et, par exemple, il y a 50 % plus d'ApoE dans le cerveau néonatal que dans celui d'un adulte, alors qu'il y a environ 10 fois plus d'ApoD et d'ApoJ dans le cerveau adulte que dans celui de l'embryon. L'ApoD est exprimée principalement dans le cerveau, les nerfs périphériques, le placenta, les poumons, les ovaires et la rate [41]. Dans nos échantillons de larmes, ApoD semble être surexprimé chez les patients atteints de MP. Les cellules gliales proches du SN des patients parkinsoniens ont plus d'ApoD, ce que l'on pense être lié au stress oxydatif, car l'ApoD protège les cellules du stress oxydatif et son expression accrue inhibe la peroxydation lipidique [42].

En effet, l'expression d'ApoD dans le tronc cérébral semble protéger contre la neurodégénérescence, et dans les cerveaux endommagés, les neurones n'expriment pas ApoD [41]. Ainsi, l'ApoD dans la déchirure justifie des études supplémentaires chez les patients parkinsoniens et ceux atteints d'autres maladies neurodégénératives pour évaluer s'il a un véritable effet neuroprotecteur chez ces patients. Parmi les autres protéines trouvées dérégulées dans la présente étude, un petit groupe a été sélectionné en raison de leur implication dans les processus neurodégénératifs, en particulier dans l'autophagie lysosomale ou le transport neuronal. Il a été proposé que la voie ubiquitine-protéasome (UPP) joue un rôle clé dans la dégradation de -syn [43] ; cependant, il y a de plus en plus de preuves que le lysosome peut également intervenir dans la dégradation de -syn [44,45]. Quelle que soit la voie d'autophagie exacte par laquelle -syn pénètre dans le lysosome, on suppose qu'elle est rapidement dégradée par la "synucléinase" dans des conditions normales. Dans les neurones dopaminergiques, il existe un équilibre dynamique entre les différentes formes conformationnelles et états oligomériques de la protéine -syn, qui est modulé par des facteurs pouvant accélérer ou inhiber l'agrégation et la formation de fibrilles [46]. L'identification et la caractérisation des espèces toxiques -syn sont encore incomplètes, et de nombreuses études se sont concentrées sur différents états d'agrégation des protéines.

Ces études ont tenté de déterminer si les espèces toxiques correspondent aux protéines fibrillaires insolubles retrouvées principalement dans les LB ou, à l'inverse, aux oligomères protéiques pré-fibrillaires ou protofibrilles. Il existe de plus en plus de preuves in vivo et in vitro que les espèces oligomères sont les isoformes les plus pertinentes sur le plan pathologique [47,48], et il a même été proposé que les LB pourraient être protecteurs, représentant une forme d'agrésome. Dans des circonstances physiologiques, -syn est actif au niveau des synapses et il est impliqué dans des processus tels que la formation, le trafic et le couplage des vésicules synaptiques (SV). Il est également associé au recyclage des SV et au stockage de la dopamine.

La phosphorylation et la déphosphorylation de -syn entraînent l'activation et la désactivation de cette protéine, qui est également contrôlée par l'autophagie lysosomale et la dégradation du protéasome entraînée par l'ubiquitinylation [49]. Dans des conditions pathologiques provoquées par différents stimuli, -syn subit un repliement incorrect, une mutation ou une phosphorylation qui conduit à son agrégation, affectant la formation et le couplage des vésicules lysosomales sans produire d'autophagie lysosomale, et conduisant à son dépôt dans les neurones dopaminergiques, la formation de LB et l'apoptose [49]. Les résultats présentés ici montrent que, parmi les protéines dérégulées dans le liquide lacrymal des patients parkinsoniens, patients iPD et porteurs de la mutation E46K-SNCA, il existe deux protéines liées à l'autophagie lysosomale : CATD et ASAH1. La CATD est une aspartyl protéase lysosomale importante et, fait intéressant, le déficit en CATD et son inactivation enzymatique chez l'homme entraînent l'apparition précoce d'une neurodégénérescence progressive et éventuellement mortelle, qui est classée comme l'un des nombreux syndromes de lipofuscinoses céroïdes neuronales (NCL) [50,51 ]. In vitro, CATD produit une protéolyse partielle de -syn recombinante [52], et la capacité de CATD à réguler -syn a été évaluée dans des cellules dopaminergiques de type sauvage et mutantes en culture.

De plus, les cerveaux de plusieurs mammifères déficients en CATD avec NCL ont été étudiés pour évaluer le traitement endogène -syn et, par conséquent, il a été conclu que l'activité enzymatique de CATD joue un rôle important dans le métabolisme de -syn. La protéine ASAH1 est une enzyme lysosomale qui convertit le céramide lysosomal en sphingosine. L'inhibition d'ASAH1 augmente les niveaux de céramides, réduisant également la quantité de -syn oxydée et celle de la protéine ubiquitinylée dans les neurones dopaminergiques dérivés de patients atteints de MP. Une diminution des niveaux de céramide due à une activité ASAH1 accrue peut contribuer à l'accumulation de -syn intracellulaire car elle altère l'autophagie lysosomale, inhibant peut-être la libération de -syn dans l'espace extracellulaire.

DYHC1 et LMNA sont deux autres protéines pertinentes dérégulées dans les larmes des patients atteints de MP. DYHC1 est une protéine impliquée dans le mouvement des organites dans la cellule et le transport rétrograde dans les axones. Parmi d'autres maladies neurodégénératives, il est impliqué dans la MA et la MP. Les altérations de DYHC1 entraînent un mauvais transport vers sa localisation synaptique normale et une mauvaise clairance des protéines, comme celle de la protéase lysosomale cathepsine D [53]. Cette séquence d'événements proposée générerait une spirale autocatalytique dans laquelle les processus qui conduisent à l'inhibition du transport axonal et à la production de -syn phosphorylé deviennent mutuellement stimulants, fournissant une explication rationnelle de la perte synaptique précoce dans le striatum des patients parkinsoniens. Enfin, la surexpression de la protéine LMNA dans la déchirure de la MP a été impliquée dans la démyélinisation, mais cela n'a pas été lié à la MP à ce jour [54].

Cependant, c'est une voie qui mérite d'être considérée dans de futures études. Cette étude présente certaines limites, telles que le faible nombre de patients inclus, elle doit donc être considérée comme une étude pilote, et cela doit être pris en compte lors de l'interprétation des résultats. De plus, il serait nécessaire de valider les protéines candidates, non seulement dans une cohorte plus large mais aussi de vérifier si elles apparaissent dans d'autres fluides corporels (c'est-à-dire le sang ou le liquide céphalo-rachidien). Il est également important de garder à l'esprit que les mécanismes possibles proposés dans cet article ne sont que des hypothèses qui devraient être vérifiées dans des études ultérieures. De plus, il convient de noter que, puisque les recherches dans la base de données ont pris en compte les séquences protéiques canoniques, aucune information sur les protéoformes n'a été obtenue. Bien que cela puisse représenter une limitation de la spécificité des résultats, nous pensons que les informations obtenues au niveau de la séquence canonique sont toujours d'une grande valeur et fournissent des informations précieuses sur les caractéristiques moléculaires de la maladie.

Cependant, la possibilité que certaines protéoformes puissent être responsables des résultats annotés doit être gardée à l'esprit lors de l'interprétation des données.

5. Conclusions

Dans cette étude pilote, l'analyse protéomique a révélé que certaines protéines étaient régulées positivement dans les larmes des patients parkinsoniens, principalement celles impliquées dans la fonction lysosomale. L'importance de cette étude dans l'identification des protéines de la déchirure impliquées dans la neurodégénérescence doit être soulignée comme leur relation avec les patients parkinsoniens présentant un phénotype de maladie agressif. Comme il s'agissait d'une étude pilote, seul un nombre limité de patients a été étudié. Une limite de l'étude est la différence d'âge entre le groupe témoin et le groupe PD. L'analyse avec des prélèvements lacrymaux chez des sujets sains sans pathologies oculaires est compliquée car, à un certain âge, il est difficile de trouver des volontaires sans altérations du film lacrymal. De futurs essais avec des cohortes de patients plus importantes nous permettront d'identifier des biomarqueurs spécifiques de la MP qui aideraient idéalement à prédire l'apparition de cette maladie.

Néanmoins, nous apportons ici la preuve que le protéome de patients individuels peut être analysé en utilisant seulement une quantité limitée de larmes. Avec une bonne formation, la meilleure façon d'extraire les larmes pour les études protéomiques est d'utiliser un capillaire en verre, évitant ainsi la contamination cellulaire qui peut se produire lorsque les bandelettes de Schirmer sont utilisées. Dans de futures études, nous espérons valider les résultats présentés ici et identifier les endophénotypes de la MP à travers le profil protéomique des larmes, ce qui pourrait servir à réaliser le diagnostic précoce de la MP.

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