Exploration préliminaire de l'effet promoteur et du mécanisme des polysaccharides de Cistanche Deserticola sur la prolifération des lymphocytes
Dec 04, 2025
Méthodes
Le test MTT a été utilisé pour détecter la prolifération des lymphocytes spléniques chez la souris. Le cyclophosphamide (Cy) a été utilisé pour reproduire des modèles animaux d'animaux immunodéprimés, et les indices de rate et de thymus d'animaux normaux et immunodéprimés ont été mesurés. L'activité de l'interleukine-2 (IL-2) a été mesurée par le test de prolifération des thymocytes. Résultats : Le polysaccharide de Cistanche deserticola a favorisé de manière significative la prolifération des lymphocytes activés par les mitogènes (ConA et LPS) et des cellules normales non activées, et a favorisé la sécrétion de IL-2 dans les lymphocytes. L'administration intrapéritonéale a montré que le polysaccharide de Cistanche deserticola augmentait de manière significative l'indice splénique des souris normales et immunodéprimées, et avait également un effet antagoniste significatif sur la réduction de l'indice thymique provoquée par Cy. Conclusion : Le polysaccharide de Cistanche deserticola peut favoriser de manière significative la prolifération des lymphocytes spléniques chez la souris, ce qui peut être lié à sa promotion de la sécrétion de IL-2.
Cistanche vivant dans le désert
[Mots clés]Polysaccharide de cistanche deserticola; Indice de rate ; Indice thymique ; Prolifération lymphocytaire ; Interleukine-2
Les polysaccharides végétaux ont attiré une large attention en raison de leurs effets immunomodulateurs répandus et de leur toxicité relativement faible [1]. Cistanche deserticola ma, connue sous le nom de « Ginseng du désert », est la tige écailleuse, sèche et charnue de Cistanche deserticola, une plante de la famille des Orobaceae, qui possède des effets pharmacologiques étendus. Sa décoction aqueuse permet d'augmenter significativement le pourcentage phagocytaire et l'indice phagocytaire des macrophages. D'autres études ont montré que sa base matérielle est le polysaccharide total de Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et coll. [4] ont découvert qu'un seul composant du polysaccharide Cistanche deserticola a un effet prolifératif significatif sur les lymphocytes thymiques de souris in vitro. L'effet du polysaccharide Cistanche deserticola sur la prolifération lymphocytaire a été observé in vivo et in vitro.
Formule moléculaire de Cistanche deserticola
1Matériel et méthodes
1.1 Médicaments et réactifs
Le polysaccharide de Cistanche deserticola est fourni par le département végétal et chimique de l'Institut de médecine et de plantation de la Faculté de médecine. Il est extrait de la poudre d'extrait de Cistanche et la teneur en polysaccharides est de 87 %.
Poudre d'extrait de cistanche
Avant d'utiliser des expériences in vivo, dissoudre et diluer avec une solution saline physiologique jusqu'à la concentration requise et faire bouillir pour la stérilisation. Avant le recours aux expériences in vitro, le milieu de culture RPMI-1640 a été dissous et dilué, et une stérilisation à haute pression a été réalisée. Le lipopolysaccharide (LPS), la concanavaline (ConA), la dexaméthasone (DEX) et le MTT sont tous des produits de Sigma Corporation. Le cyclophosphamide, une coentreprise sino-américaine de Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., le sérum fœtal bovin, le milieu de culture RPMI1640 et la trypsine sont tous des produits Gibco. Les autres réactifs sont des réactifs analytiques domestiques.
1.2 Animaux
Les jeunes souris BALB c (niveau SPF) sont fournies par Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. Les animaux de qualité SPF sont élevés dans une pièce et sont nourris et bu librement.
1.3 Appareillage
Marqueur enzymatique Multikan Ascent, un produit de Thermo Electron Company, États-Unis. Leici PHS-3B pH-mètre de précision, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., incubateur de dioxyde de carbone NAPCOo 5410, NAPCO, États-Unis. BCN-1360 Établi ultra propre, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Microscope inversé, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.
1.4 Méthode
1.4.1 Effet sur la prolifération lymphocytaire [5]:
Préparation de routine de lymphocytes de rate de souris BALB/c, en utilisant RPMI-1640 pour ajuster la concentration cellulaire à 1 × 107 mL, inoculés sur une plaque de culture à 96 puits, avec 100 suspensions de cellules ajoutées à chaque puits μL-50. Il a été co-cultivé avec différentes concentrations de polysaccharide Cistanche deserticola (la concentration finale de polysaccharide Cistanche deserticola pour la prolifération des lymphocytes non activés était de 6,25, 12,5, 25, 50 et 100 mg/L dans l'ordre ; la concentration finale de polysaccharide Cistanche deserticola pour la prolifération des lymphocytes T activés par ConA était de 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 et 62,5 mg/L dans l'ordre ; et la concentration finale du polysaccharide Cistanche deserticola pour la prolifération des lymphocytes B activés par le LPS était de 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 et 25 mg/L dans l'ordre) et le milieu ConA ou LPS, RPMI-1640 a été utilisé comme contrôle. Le volume total de chaque trou est de 200 µL. Lors de l'ajout du mitogène ConA et du LPS (le contrôle est RPMI-1640 contenant les concentrations correspondantes de ConA ou de LPS), les concentrations finales des deux sont respectivement de 2,5 mg/L et 10 mg/L. Trois trous parallèles ont été réalisés pour différents traitements. Placez la plaque de culture dans un incubateur à 37 degrés et 5 % d'humidité saturée en CO2 pendant 68 heures, ajoutez du MTT et poursuivez la culture pendant 4 heures. Mesurez la valeur A540 nm avec un marqueur enzymatique en utilisant la méthode MTT pour détecter la prolifération. Lorsque vous comparez chaque groupe, convertissez la valeur A540nm en taux de prolifération lymphocytaire selon la formule suivante :taux de prolifération lymphocytaire=échantillon AA A contrôle × 100 %.
Effets de Cistanche-Améliorer l'immunité
1.4.2 Effet sur le poids des organes immunitaires chez la souris normale [6,7]:
De jeunes souris BALB c (mâles, âgés de 4 semaines, pesant entre 10 et 15 g) ont été réparties au hasard en un groupe témoin à blanc (solution saline) et en différents groupes de dosage (125 mg (kg · pc) et 250 mg (kg · pc)), avec 11 rats dans chaque groupe. Le médicament a été administré par voie intrapéritonéale une fois par jour pendant 7 jours consécutifs. Les souris ont été tuées après luxation cervicale. La rate et le thymus ont été prélevés, la graisse et les tissus des fascias ont été retirés et le liquide de surface a été séché avec du papier filtre. Après pesée, l'indice de la rate =100 × Poids de la rate (mg) Poids corporel (mg) ; L'hthymusindex=100 × Poids du thymus (mg) Poids corporel (mg). Calculez respectivement l’indice de la rate et l’indice du thymus pour chaque 100 mg de poids corporel.
1.4.3 Effet sur le poids des organes immunitaires chez les souris immunodéprimées [7,8]:
De jeunes rats BALB c (mâles, âgés de 6 semaines, poids corporel de 15 à 20 g) ont été répartis au hasard en 12 groupes en fonction de leur poids corporel. À l'exception du groupe témoin normal (injection intrapéritonéale d'un volume équivalent de sérum physiologique), les autres groupes ont reçu une injection quotidienne de Cy 50 mg (kg · pc) par voie intrapéritonéale, et la solution de médicament à tester a été administrée par voie intrapéritonéale [125 et 250 mg (kg · pc)], le groupe témoin normal et le groupe modèle ont reçu le même volume de sérum physiologique pendant 13 jours consécutifs, une fois par jour. Les changements de poids des animaux ont été observés au cours de l'expérience . 24 heures après la dernière administration, les indices de rate et de thymus ont été mesurés et calculés selon la même méthode qu'en 1.4.2.
1.4.4 Impact sur l'activité IL-2 :
① Induction de IL-2 [9] : Ajouter 50 µL dans chaque puits dans une plaque cellulaire de 96 puits. Différentes concentrations de polysaccharide Cistanche deserticola (concentrations finales dans l'ordre : 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/L, ajouter 50 mg/L dans le puits témoin µL de milieu de culture) et 50 µL de ConA. (concentration finale 5 mg/L), ajouter 1 de plus par puits × 106 cellules de rate. Incuber dans un incubateur à 37 degrés et 5 % d'humidité saturée en CO2 pendant 24 heures, centrifuger pendant 20 minutes à 2 500 tr/min, prendre le surnageant cellulaire et le stocker à - 20 degrés en veille. ② IL-2 détection d'activité [9,10] : la méthode de base est basée sur la littérature [9] et les ajustements appropriés sont effectués en fonction de la littérature [10]. Préparation conventionnelle de suspension de thymocytes de souris BALB c, plaque de culture cellulaire à 96 puits, 1 inoculation par puits × 106 thymocytes, tout en ajoutant 50 cellules par puits μ L de ConA (concentration finale 2,5 mg/L), puis ajouter le surnageant préparé IL-2 50 μ L (ajouter 50 au trou de contrôle blanc μ L de solution de culture), incuber ensemble pendant 54 heures, ajouter du MTT, continuer l'incubation pendant 4 heures, centrifuger pendant 10 à 15 minutes à 1000 tr/min, jeter le surnageant et ajouter du DMSO 100 par puits μL, agiter avec un micro-oscillateur pendant 8 min et mesurer la valeur A540 nm avec un marqueur enzymatique.
1.5 Analyse statistique
Les données ont été exprimées en moyenne et en écart type (x ± s). Le logiciel Microsoft Excel a été utilisé pour rassembler les données et un test t a été effectué. P.<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.
2. Résultats
2.1 Effet sur la prolifération lymphocytaire
Comme le montre le tableau 1, l'ajout du polysaccharide de Cistanche deserticola au milieu de culture de lymphocytes de rate de souris cultivés in vitro à une concentration supérieure à 25 mg/L peut stimuler de manière significative la prolifération des lymphocytes, indiquant que le polysaccharide de Cistanche deserticola lui-même a un effet mitotique. En même temps,il ressort des tableaux 2 et 3 que le CDPS a un effet promoteur significatif sur la prolifération des lymphocytes T induits par la ConA ou des lymphocytes B induits par le LPS..
Tab.1 L'influence du polysaccharide Cistanche deserticola sur la prolifération des lymphocytes non activés (x ±s, n =3)
Non : par rapport au groupe témoin, ＊P<0.05.
Tab.2 L'influence du polysaccharide Cistanche deserticola sur la prolifération des lymphocytes T induite par ConA (x ±s, n =3)
Remarque : par rapport au groupe ConA, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
Tab.3 L'influence du polysaccharide Cistanche deserticola sur la prolifération des lymphocytes B induite par le LPS (x ±s, n =3)
Remarque : par rapport au groupe LPS, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
2.2 Effet sur le poids des organes immunitaires chez la souris normale
Comme le montre le tableau 4,Le polysaccharide Cistanche deserticola peut augmenter considérablement l'indice splénique des jeunes rats normaux BALB/cc mais n'affecte pas le thymus.
2.3 Effet sur le poids des organes immunitaires chez les souris immunodéprimées
D'après le tableau 5,on peut voir que les indices des organes de la rate et du thymus des souris du groupe immunosuppresseur Cy sont inférieurs à ceux du groupe témoin, et le polysaccharide Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) peut améliorer considérablement les indices de la rate et du thymus.
2.4 Effet sur l'activité de IL-2
Comme le montre le tableau 6,lorsque la dose de polysaccharide Cistanche deserticola atteint 7,82 mg/L, elle peut augmenter considérablement la libération de IL-2 par les cellules de la rate de souris.
Tab.4 L'effet du polysaccharide Cistanche deserticola sur le poids des organes immunitaires chez la souris normale (x ± s, n =11)
Remarque : par rapport au groupe témoin, ＊＊P<0.01.
Tab.5 L'effet du polysaccharide Cistanche deserticola sur le poids des organes immunitaires chez la souris immunodéprimée ( x ±s, n =12)
Remarque : par rapport au groupe témoin, ## P < 0,01 ; par rapport au groupe modèle, ＊＊P<0.01.
Tab.6 L'influence du polysaccharide Cistanche deserticola sur la production de IL-2 par les lymphocytes spléniques chez la souris ( x ±s, n =3)
Remarque : par rapport au groupe témoin, ＊＊P<0.01.
3. Discussion
La prolifération des lymphocytes spléniques induite par la ConA et le LPS chez la souris est une expérience in vitro visant à détecter la fonction des lymphocytes T et B et constitue un indicateur important de la capacité immunitaire spécifique. Des études ont montré que lorsque la concentration finale du polysaccharide Cistanche deserticola est supérieure à 25 mg/L, elle peut favoriser de manière significative la prolifération des lymphocytes, indiquant qu'elle a un certain effet mitotique. En présence de mitogène (ConA ou LPS), une dose plus faible de polysaccharide Cistanche deserticola peut améliorer si le corps présente une activité proliférative significative. On sait que la ConA et le LPS induisent principalement respectivement la prolifération des lymphocytes T ou des lymphocytes B. Des études ont montréAvantages pour la santé de la poudre de cistanche : Le polysaccharide Cistanche deserticola peut favoriser à la fois la prolifération des lymphocytes T et la prolifération des lymphocytes B, mais son effet prolifératif sur les lymphocytes B est significativement plus fort que celui sur les lymphocytes T.
Avantages pour la santé de la poudre de cistanche-Improve immunité
Cliquez ici pour voir les produits Cistanche Améliorer l'immunité
【Demandez plus】 E-mail : xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692
Le thymus et la rate sont les principaux organes immunitaires des animaux. Les cellules immunitaires de la rate sont principalement des lymphocytes B matures, tandis que le thymus est principalement constitué de lymphocytes T immatures. Les indices du thymus et de la rate peuvent refléter le développement des organes immunitaires et l’état fonctionnel des cellules immunitaires. L'injection intrapéritonéale de polysaccharide Cistanche deserticola peut augmenter considérablement l'indice splénique des souris normales et immunodéprimées et a un effet antagoniste significatif sur l'atrophie thymique induite par Cy chez la souris.
Le polysaccharide de Cistanche deserticola n'a aucun effet significatif sur l'indice thymique chez les animaux normaux, ce qui est cohérent avec les résultats d'expériences in vitro dans lesquelles le polysaccharide de Cistanche deserticola favorise la prolifération des lymphocytes B plutôt que des lymphocytes T.
Csupplément istanche près de chez moi-Améliorerimmunité
IL-2 est une cytokine produite par les lymphocytes T de la phase G1 du cycle cellulaire jusqu'à la phase S. Il s’agit d’un facteur de croissance majeur des lymphocytes T qui agit comme un facteur de croissance autocrine. De plus, IL-2 peut favoriser la prolifération des cellules B et la synthèse d'anticorps [11,12]. Le polysaccharide Cistanche deserticola favorise la libération de IL-2 par les lymphocytes, ce qui est évidemment lié au polysaccharide Cistanche deserticola favorisant la prolifération des lymphocytes spléniques.
La recherche médicale montre que Cistanche contient des polysaccharides, des échinacosides et de l'actéoside, qui peuvent activer les lymphocytes et améliorer la santé du corps ; les composants fonctionnels des glycosides phényléthanoïdes cistanche ont un effet significatif sur la récupération cellulaire après des dommages causés par les rayons gamma de 60 Co et peuvent également améliorer la fonction immunitaire contre les dommages causés par les radiations. La prise quotidienne de suppléments de Cistanche deserticola peut avoir pour effet d’améliorer l’immunité.
