Wen-Lan Li, Jing-Xin Ding, Jing Bai, Yang Hu, Hui Song, Xiang-Ming Sun, Yu-Bin Ji

Contact : Jeanne.jia@wecistanche.com

Résumé

La technologie LC est une méthode reconnue utilisée dans le monde entier pour évaluer la qualité des médecines traditionnelles chinoises (MTC). La qualité de la MTC a un impact direct sur son efficacité. Par conséquent, pour révéler en profondeur comment la MTC exerce son efficacité, il est tout d'abord nécessaire de comprendre la base matérielle de son efficacité, puis de contrôler la qualité des composés actifs. L'application de la méthode de la relation spectre-effet est cruciale pour déterminer la base du matériel pharmacologique. Le but de cet article était d'étudier les corrélations sous-jacentes entre les profils chimiques et l'activité oestrogénique deCistanche, pour révéler les composés actifs. Les profils chimiques deCistancheont été enregistrés par HPLC/Q-TOF-MS/MS, et l'activité œstrogénique a été déterminée par le test de croissance utérine et le test MTT. Ensuite, en combinant les résultats de l'analyse bivariée, de l'analyse en composantes principales et de la méthode d'analyse de corrélation grise, quinze composés actifs ont été identifiés. Ce sont 8-acide épiloganique, salidroside, syringalide A 3'- -l-rhamnopyranoside, cistanoside A,échinacoside, le cistanoside F, le cistanoside B, le cistanoside C, l'osmanthuside B, l'actéoside, l'isoactéoside, le tubuloside B, le 2'-acétylactéoside et deux composés inconnus. Cette étude jette les bases d'études in vivo deCistanche, et pour le développement de son application clinique.

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Mots clés:Cistanchedésertique; LC/Q-TOF-MS ; activité oestrogénique; analyse en composantes principales (ACP); Test de croissance de l'utérus.

Abréviations

MTC : Médecine Traditionnelle Chinoise

HPLC/Q-TOF-MS : Chromatographie liquide haute performance/spectrométrie de masse à temps de vol quadripolaire

BA : analyse bivariée

ACP : analyse en composantes principales

GCAM : méthode d'analyse de corrélation grise

MTT :Trypsine, 3-(4, 5-Diméthylthiazol-2-yl)-2, 5-bromure de diphényltétrazolium

DMSO : diméthylsulfoxyde

RPMI1640 Institut commémoratif de Roswell Park 1640

1. Introduction

Récemment, la MTC est devenue de plus en plus populaire dans les pays asiatiques et occidentaux en raison de ses effets thérapeutiques stables et de sa faible toxicité en clinique. En conséquence, il est nécessaire de développer de nouveaux types de MTC et de comprendre les compositions efficaces utilisées lors de leur application clinique [1-6].

Premièrement, la relation spectre-effet est étudiée pour discerner la corrélation entre l'empreinte chromatographique et l'efficacité pharmacodynamique. Ensuite, utiliser la relation pour rechercher des composants efficaces dans la MTC et formuler des normes de contrôle pour refléter leur qualité interne. La relation spectre-effet a été appliquée dans de nombreux domaines de la recherche sur la MTC, tels que la base matérielle de la MTC simple et composée, la compatibilité des composants, le mécanisme de traitement, la prévision des effets pharmacologiques et l'optimisation de la technologie [7-12]. La relation spectre-effet est utilisée pour proposer de nouvelles idées et méthodes pour explorer les substances actives, optimiser les formules, améliorer les processus de préparation, suivre et séparer les ingrédients cibles, et pour le développement de nouveaux médicaments TCM [13-17].

Cistanchea été largement utilisé pour le traitement de la dysfonction sexuelle, de la constipation, de la prostatite et de l'insuffisance rénale. Il possède un large spectre de bioactivités, notamment un effet œstrogénique, anti-âge, antioxydant et une action immunitaire [18-19]. Généralement, les glycosides phényléthanoïdes (tels que le cistanoside A, le tubuloside A), les lignanes et les glycosides iridoïdes ont été considérés comme des constituants pharmacologiques et des marqueurs chimiques pour le contrôle de la qualité de Cistanche et de ses produits [20-21]. Les spectres chimiques deCistanchede différentes zones ont été enregistrées par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) [22-23]. Dans cette étude, nous avons sélectionné le test de croissance utérine et le test de prolifération cellulaire MCF7 pour évaluer leurs activités œstrogéniques. L'analyse en composantes principales, l'analyse bivariée et les méthodes d'analyse de corrélation grise ont été utilisées pour corréler l'activité oestrogénique avec les composants individuels. Cette étude visait à identifier les composés bioactifs de Cistanche responsables d'effets œstrogéniques in vivo. L'étude jette les bases d'études approfondies deCistanche.

Toutes les procédures expérimentales ont été examinées et approuvées par le Comité d'éthique animale de l'Université de commerce de Harbin.

Cistanchedésertique(cd-20120227-005) a été acheté sur le marché de la drogue et identifié par le professeur Zhang Delian (Harbin University of Commerce). Le diéthylstilbestrol a été acheté auprès de HEFEI JIULIAN PHARMACEUTICAL CO., LTD. RPMI1640 et RPMI1640 sans rouge de phénol ont été achetés auprès de HyClone Company (USA). Le MTT et le DMSO ont tous été achetés auprès de Sigma-Aldrich Co. LLC (St Louis, États-Unis). La lignée cellulaire MCF7 du cancer du sein humain a été fournie par le Centre de recherche des sciences de la vie et des sciences de l'environnement (Université de commerce de Harbin). Les étalons utilisés étaient les suivants : l'actéoside (111530- 200505), l'échinacoside (111670-200503) et le salidroside (110736-200628) ont été obtenus auprès de l'Institut national pour le contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques (Beijing , Chine). L'acétonitrile, le méthanol et l'acide formique étaient de qualité MS, tandis que l'eau était ultra pure. D'autres réactifs étaient de qualité analytique et étaient disponibles dans le commerce.

ÉchinacosidedansCistanchetubulosa a de nombreux effets

2 Procédure expérimentale

2.1 Matériaux

Le système HPLC Agilent 1290, le système LC/MS quadripolaire Agilent série 6530 à temps de vol (Q-TOF) et les postes de travail HPLC chimiques-3D ont été utilisés pour les expériences de chimie analytique et le traitement des données. L'eau ultrapure Milli-Q a été utilisée pour la préparation des échantillons et des étalons. Les instruments supplémentaires comprenaient la balance analytique électronique AR1140 (Ohaus International Ltd), le lecteur de microplaques 680 (Bio-Rad Corporation) et la centrifugeuse à grande vitesse 64R (Beckman Coulter Allegra).

Des souris Kunming femelles immatures (environ 21 jours après la naissance, sevrées) pesant (12 ± 2) g ont été achetées au Changchun National Biological Industry Base Laboratory Animal Center (Changchun, Chine). Les souris ont été logées dans une pièce à température régulée (22 ± 2 degrés) avec un accès illimité à la nourriture et à l'eau. L'expérimentation animale a été initiée après cinq jours d'acclimatation. Les souris ont été mises à jeun pendant une nuit avec un libre accès à l'eau avant d'administrer les solutions de test. Cette étude a été réalisée dans le strict respect des recommandations du Guide for the Care and Use of Laboratory Animals des National Institutes of Health.

2.2 Préparation de la solution d'échantillon

Des échantillons de Cistanche ont été prélevés dans dix habitats divers, à savoir Neimeng, Xinjiang, Ningxia, Guizhou, Chaidamu, Xizang, Alashan, Qinghai, Sichuan et la province du Hubei.

La solution (1,0 g/mL) de l'échantillon de Cistanche a été préparée dans de l'eau distillée pour administration orale. La concentration de diéthylstilboestrol était de 20ug/mL et a été utilisée comme solution de contrôle positif. La solution (1,0 g/mL) de l'échantillon de Cistanche a été préparée dans 50 % d'acétonitrile. L'actéoside, l'échinacoside et le salidroside (2,0 mg chacun) ont été dissous dans 10 ml d'une solution d'acétonitrile à 50 %. L'échantillon et les solutions standard ont été filtrés à l'aide d'un filtre de 0,45-μm avant l'analyse.

2.3 Conditions CPL-SM

Un Waters Symmetry Shield RP18 (3,9 mm × 150 mm, 5 μm ; Waters Corporation, Milford, MA, États-Unis) a été utilisé pour analyser les échantillons. La phase mobile était constituée d'acétonitrile (A) et d'une solution aqueuse d'acide formique 0,2 % (v/v) (B) et a été pompée à un débit de 0,5 mL/min. Le volume d'injection de chaque échantillon était de 10 μL. Le programme d'élution par gradient était le suivant : la phase mobile A a été initiée à 5 % et augmentée linéairement jusqu'à 23 % à 35 min. La solution A a ensuite été portée à 25 % (35 à 65 min). La phase mobile A a ensuite été réduite à 5 % pendant les 5 dernières minutes de l'essai (65 à 70 minutes). La température de la colonne a été maintenue à 30 degrés. Les chromatogrammes ont été contrôlés à 254 nm. La pression du gaz d'atomisation était de 30 psi et la tension capillaire était de 3,5 kV. Le débit du gaz sec a été fixé à 8 L/min avec une température de 30 degrés. Les spectres de masse ont été enregistrés dans la plage de balayage de 100- 3,000 Da et étaient en mode de balayage d'ions négatifs.

2.4 Évaluation des empreintes digitales

Les empreintes digitales LC des échantillons prélevés à partir de 10 lots différents ont été établies et appariées automatiquement à l'aide du système d'évaluation de similarité pour les empreintes digitales chromatographiques de TCM (version 2012 ; Comité de la pharmacopée chinoise, Pékin, Chine). De plus, la carte du chromatogramme de référence a été générée en utilisant la méthode médiane. De plus, une analyse par grappes a été appliquée pour évaluer la qualité des échantillons provenant de dix habitats divers.

2.5 Analyse en composantes principales (ACP)

L'ACP est une méthode statistique multivariée. Il peut retenir suffisamment d'informations de l'acquisition de données. Dans la présente étude, les pics caractéristiques des chromatogrammes LC ont été criblés davantage par PCA et visaient à identifier les composés actifs en fonction de la relation spectre-effet.

2.6 Test de croissance utérine

Les souris ont été divisées en 12 groupes (10 par groupe). Les solutions d'échantillons préparées à partir de Cistanche ont été prélevées dans dix habitats différents et ont été administrées deux fois par jour (matin et soir) par gavage à une dose de 30 g/kg de poids corporel pendant quatre jours. Les groupes de contrôle blanc et positif comprenaient des volumes égaux d'eau distillée et de solution de diéthylstilboestrol et ont été administrés deux fois par jour pendant quatre jours. Le cinquième jour, les échantillons de sang contenant le médicament ont été prélevés sur les souris anesthésiées. Les échantillons ont été centrifugés (5,000 rpm, 10 min) et les surnageants (échantillons de sérum contenant du médicament) ont été séparés. Les échantillons de sérum contenant le médicament ont été inactivés par chauffage à 56 degrés dans un bain-marie pendant 30 min et ont été filtrés à travers un filtre de 0,22-μm avant le test MTT. Parallèlement, les utérus des souris ont été immédiatement excisés et pesés pour calculer les indices de poids utérins. L'expérimentation animale a été initiée après cinq jours d'acclimatation. Les souris ont jeûné pendant une nuit avec libre accès à l'eau avant l'administration des solutions à tester. La présente étude a été réalisée en stricte conformité avec les recommandations du Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health. Toutes les procédures expérimentales ont été examinées et approuvées par le Comité d'éthique animale de l'Université de commerce de Harbin. Toutes les procédures potentiellement stressantes ont été réalisées sous anesthésie au pentobarbital sodique.

2.7 Test MTT

Les cellules MCF7 ont été co-cultivées avec du RPMI 1640 sans rouge de phénol (contenant 5 % de CDT-FBS) pendant quatre jours. Les cellules ont été ensemencées dans des plaques 96-puits à une densité de 2,000 cellules/puits. Une culture adhérente a été réalisée et après 72 h de culture, les cellules ont été co-cultivées dans du milieu RPMI 1640 contenant des échantillons de sérum de souris traitées au Cistanche. Les expériences ont été menées en six répétitions. Par la suite, 20 μL de solution MTT (5 mg/mL dans du PBS) ont été ajoutés à chaque puits et les cellules ont été incubées pendant 4 h. Après élimination du milieu, 150 µL de DMSO ont été ajoutés pour produire le produit formazan, et les plaques ont été secouées dans l'obscurité pour se dissoudre complètement. L'absorbance a été mesurée à 570 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques. Le taux de prolifération a été calculé comme la valeur d'absorbance moyenne du groupe de sérum contenant le médicament divisée par la valeur d'absorbance moyenne du groupe de contrôle à blanc (cellules co-cultivées dans du RPMI 1640 sans sérum).

2.8 Analyse statistique

Le test t pour échantillons appariés (bilatéral) a été utilisé pour identifier les différences statistiquement significatives entre les valeurs des groupes témoins et expérimentaux. Les différences ont été considérées comme significatives à un niveau de confiance de 95 % (p <>

L'ACP a été utilisée pour évaluer les zones de pics caractéristiques dans les chromatogrammes des échantillons provenant de dix habitats divers. L'analyse bivariée et l'analyse de corrélation de Gray ont été utilisées pour évaluer la corrélation des zones de pic et de leur activité œstrogénique. La corrélation a été calculée par les statistiques du logiciel de statistiques SPSS (SPSS pour Windows 21.0, SPSS Inc., USA). Les différences ont été considérées comme significatives à un niveau de confiance de 95 % (bilatéral).

Approbation éthique : La recherche menée n'est pas liée à une utilisation humaine ou animale.

cistanche actéoside a de nombreuses fonctions

3. Résultats et discussion

3.1 Analyse typologique et évaluation de la similarité

L'écart type relatif du temps de rétention et de la surface des pics caractéristiques était de {{0}},58 et 0,34 % pour la précision, 0,52 et {{8} }.31 % pour la reproductibilité et {{10}}.19 et 0.13 % pour la stabilité, respectivement. Ces résultats ont indiqué que notre méthode LC d'établissement d'empreintes digitales était raisonnable et fiable. Les similitudes des chromatogrammes de dix échantillons étaient supérieures à 0,9. Les pics communs à tous les échantillons ne pouvaient pas représenter pleinement les constituants caractéristiques de Cistanche, car le pic aurait pu être perdu. Par conséquent, le numéro d'appariement de l'échantillon a été ajusté de 26 à 20 pour obtenir une carte de chromatogramme plus précise. Un total de 26 pics ont été obtenus, et la somme de leurs surfaces était supérieure à 0,8 par rapport à celles de la surface globale des pics dans l'échantillon. Par conséquent, nous avons conclu que ces pics chromatographiques pourraient refléter efficacement les principaux constituants chimiques de Cistanche. Les résultats de l'analyse par grappes sont présentés à la figure 1. Un total de dix habitats divers ont été divisés en trois catégories comme suit : (A) 2, Guizhou ; 3, Qinghai; 4, Chaidamu ; 10, Neimeng ; 7, Xinjiang et 6, Sichuan. (B) 1, Xizang; 8, Ningxia et 5, Alashan. (C) 9, Hubei. La tendance de l'analyse par grappes a montré que les habitats des herbes médicinales sont similaires lorsqu'ils se trouvent au bas du seuil. Mais avec l'augmentation du seuil, le climat et les conditions de croissance des habitats sont proches. Elle montre que l'analyse typologique permet non seulement de bien distinguer les divers habitats mais aussi de refléter les affinités entre eux.

3.2 Identification des constituants chimiques

Based on the synergy between components, TCM exerted pharmacological effects. Certain studies have been conducted to identify the chemical compositions of C. deserticola [24-26]. The correlation of inherent constituents with their activities indicated that they could be identified based on the combination of LC with the corresponding indices of pharmacological activity. Q-TOF-MS is suitable for multi-constituent identification of TCM since it can provide the exact molecular mass because of its high resolution. A total of 26 compounds were identified by analyzing the primary and secondary MS data. PCA was used to assess whether these compounds concerning their oestrogenic activity. A contribution of the activity is indicated by an eigenvalue higher than 1 (> 1) and a cumulative contribution rate of variables higher than 0.8 (>0.8). Plus la valeur absolue de la charge propre est élevée, plus l'influence des composés sur les indices oestrogéniques est élevée.

Les chromatogrammes de Cistanche et les échantillons standard ont été comparés pour identifier les composants individuels dans les mêmes conditions LC-MS. Comme le montre le tableau 1, un total de 26 constituants ont été identifiés sur la base du temps de rétention et des données MS [24-26]. Les principes actifs sont administrés par voie orale sous forme de mélanges plutôt que de monomères comme la médecine traditionnelle chinoise se présente sous forme de mélange pour jouer un rôle thérapeutique. Un seul composé après avoir été séparé individuellement ne s'est pas avéré jouer un rôle. Notre objectif est de révéler des composés qui ont une activité œstrogénique dans les composants connus de Cistanche [23-30], et n'ont donc pas sélectionné la RMN et d'autres moyens techniques pour valider leur identité. Le pic 1 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 373 (C16H22O10), qui était identique à la composition élémentaire de l'acide géniposidique. Cela a été soutenu par la perte d'une fraction glucose qui a donné un ion fragment avec un rapport m/z de 211. Le pic 2 a indiqué un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 461 (C20H30O12), qui était identique à la composition élémentaire de décaféoylactéoside, et a été soutenu par la perte d'une fraction rhamnosyle, formant une fragmentation avec un rapport m/z de 315. Le pic 4 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 375 (C16H24O10), qui était identique au composition élémentaire de l'acide 8-épiloganique. La perte d'une fraction glucose, formée d'une fragmentation avec un rapport m/z de 213, a encore soutenu l'inférence. Le pic 6 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 607 (C29H36O14), qui était identique à la composition élémentaire du syringalide A3'- - l-rhamnopyranoside.

La perte d'un fragment caff, formé un ion fragment avec un rapport m/z de 445, a encore soutenu l'inférence. Le pic 8 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 799 (C36H48O20), qui était identique à la composition élémentaire du cistanoside A. La perte d'une fraction caff, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 637, a en outre appuyé l'inférence. Le pic 11 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 487 (C21H28O13), qui était identique à la composition élémentaire du cistanoside F. Cela était soutenu par la perte d'un fragment rhamnosyle qui a donné un ion fragment avec un m/z rapport de 341, et la perte d'un autre fragment caff a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 179, a encore soutenu l'inférence. Le pic 12 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 813 (C37H50O20), qui était identique à la composition élémentaire du cistanoside B. La perte d'une fraction glucose, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 651, a en outre appuyé l'inférence. Le pic 13 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 827 (C37H48O21), qui était identique à la composition élémentaire du tubuloside A. La perte d'un fragment rhamnosyle, a formé une fragmentation avec un rapport m/z de 681, en outre appuyé l'inférence. Le pic 14 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 637 (C30H38O15), qui était identique à la composition élémentaire du cistanoside C. La perte d'un fragment rhamnosyle, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 491, a en outre appuyé l'inférence.

Le pic 15 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 591 (C29H36O13), qui était identique à la composition élémentaire de l'osmanthuside B. La perte d'un fragment rhamnosyle, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 445, a en outre appuyé l'inférence. Le pic 16 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 623 (C29H36O15), qui était identique à la composition élémentaire de l'actéoside. La perte d'une fraction caff, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 461,a en outre appuyé l'inférence. Le pic 18 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 623 (C29H36O15), qui était identique à la composition élémentaire de l'isoacteoside. La perte d'une fraction caff, pointe avant15 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 591 (C29H36O13), qui était identique à la composition élémentaire de l'osmanthuside B. La perte d'un fragment rhamnosyle, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 445, en outre appuyé l'inférence. Le pic 16 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 623 (C29H36O15), qui était identique à la composition élémentaire de l'actéoside. La perte d'un fragment caff, formé un ion fragment avec un rapport m/z de 461, a encore soutenu l'inférence. Le pic 17 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 623 (C29H36O15), qui était identique à la composition élémentaire du cis-actéoside. La perte d'une fraction caff, a formé un fragment ioda fragment ion avec un rapport m/z de 461, a en outre soutenu l'inférence. Le pic 21 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 653 (C30H38O16), qui était identique à la composition élémentaire du campnéoside Ⅰ.

La perte d'un fragment caff a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 491, et la perte d'un autre fragment rhamnosyle a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 345, soutenant davantage l'inférence. Le pic 22 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 665 (C31H38O16), qui était identique à la composition élémentaire du tubuloside B. La perte d'un fragment CH3 CO a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 623, et la perte d'un autre fragment caff a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 461, soutenant davantage l'inférence. Le pic 23 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 639 (C29H36O16), qui était identique à la composition élémentaire du campnéoside. La perte d'un groupement rhamnosyle, formé un ion fragment avec un rapport m/z de 493, étayait davantage l'inférence. Le pic 24 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 665 (C31H38O16), qui était identique à la composition élémentaire du 2'-acétylactéoside. La perte d'un fragment Ac a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 623, et la perte d'un autre fragment caff a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 461, ce qui appuie davantage l'inférence. Le pic 25 indiquait un ion déprotoné prédominant avec un rapport m/z de 445 (C20H30O11), qui était identique à la composition élémentaire du cistanoside G. La perte d'un fragment rhamnosyle, a formé un ion fragment avec un rapport m/z de 299, a en outre appuyé l'inférence. Les structures des composés sont répertoriées dans la figure 2.

3.3 ACP

As shown in Table 2, the eigenvalues of the first eight principal components were higher than 1(> 1), and the cumulative contribution rate of the first six principal components was 93.417%. Therefore, the first six principal components were evaluated further. Table 2 indicates their eigenvalues and factor loadings. The first principal component exhibited a higher load based on the eigenvalues of the eight peaks (>0.9). Ces pics étaient les suivants : 9, 12, 14 et 15. Par conséquent, l'échinacoside, le cistanoside B, l'osmanthuside B et l'actéoside, correspondant à un total de 4 pics, ont été sélectionnés comme variables représentatives de l'activité œstrogénique (Figure 3).

.

3.4 Détermination de l'activité oestrogénique

Le rapport du poids humide utérin au poids corporel de chaque souris a été calculé (Figure 4). Les animaux exposés à Cistanche à partir de neuf habitats ont présenté des activités œstrogéniques significatives en augmentant leur poids utérin par rapport aux souris du groupe témoin à blanc. La figure 4 montre en outre le taux de prolifération des cellules MCF7 traitées avec le sérum de souris traitées avec Cistanche. Les cellules traitées avec les sérums de souris ayant reçu du Cistanche provenant de dix habitats ont présenté une croissance significativement plus élevée par rapport aux cellules dépourvues de traitement.

3.5 Analyse bivariée

Dans la présente étude, nous avons observé que le poids de l'utérus des souris Kunming femelles immatures augmentait et que la prolifération des cellules cancéreuses du sein humain MCF7 était favorisée. Ces résultats ont confirmé l'activité œstrogénique de Cistanche. La figure 5 indique les indices utérins et les taux de prolifération des cellules MCF7 de ces constituants. Le coefficient de corrélation de Pearson a été utilisé pour calculer les aires relatives des pics, qui correspondaient à l'activité oestrogénique des échantillons. Les coefficients de corrélation supérieurs à 0.3 étaient considérés comme significatifs (p < 0.05),="" tandis="" que="" les="" coefficients="" de="" corrélation="" supérieurs="" à="" 0.5="" étaient="" considérés="" comme="" hautement="" significatifs="" (p="">< 0,01).="" sur="" la="" base="" des="" résultats,="" il="" a="" été="" démontré="" que="" cistanche="" possède="" une="" activité="">

Un total de neuf composés significativement corrélés avec l'augmentation du poids utérin (p <{{0}}.05), tandis="" que="" dix="" composés="" significativement="" corrélés="" avec="" la="" prolifération="" cellulaire="" mcf7="" (p="">< 0,05).="" les="" composés="" significativement="" corrélés="" avec="" le="" poids="" utérin="" et="" la="" prolifération="" cellulaire="" étaient="" 8-acide="" épiloganique,="" salidroside,="" syringalide="" a3'-="" -="" l-rhamnopyranoside,="" cistanoside="" a,="" cistanoside="" b,="" cistanoside="" c,="" osmanthuside="" b,="" actéoside,="" isoacteoside,="" tubuloside="" b,="" 2'-acétylactéoside,="" et="" deux="" composés="" inconnus="" (figure="" 5).="" ces="" treize="" composés="" exerçaient="" des="" activités="">

3.6 Méthode d'analyse de corrélation de Gray

La figure 6 montre la corrélation relative des pics caractéristiques de 26 composés avec les indices utérins, et la figure 7 montre la corrélation relative des pics caractéristiques des 26 composés avec leurs taux de prolifération cellulaire. Au total, trois composés présentaient la corrélation la plus élevée avec les indices utérins, à savoir l'acide 8- épiloganique, le cistanoside F et l'actéoside (figure 6, par ordre décroissant) ; tandis que les six composés qui présentaient la corrélation la plus élevée avec la prolifération des cellules MCF7 étaient l'échinacoside, le cistanoside F, le cistanoside B, l'osmanthuside B, l'isoacteoside et le tubuloside B (figure 7, par ordre décroissant). Les corrélations relatives de l'échinacoside, de l'osmanthuside B, de l'actéoside et de l'isoactéoside étaient supérieures à 0.5.

3.7 Optimisation des conditions LC-MS

Pour obtenir une meilleure carte de chromatogramme, le méthanol et l'acétonitrile ont été comparés. Au final, la combinaison d'acide formique aqueux (0.2 pour cent, v/v) - acétonitrile était la meilleure phase mobile pour la séparation. Dans la plage de balayage à pleine longueur d'onde 200-400 nm, 254 nm a été sélectionné comme optimal. De plus, les paramètres MS ont également été améliorés. Le mode de balayage des ions négatifs a été sélectionné car il améliorait les valeurs de réponse de la plupart des ingrédients de Cistanche.

4. Conclusion

La technologie LC-Q-TOF-MS a été utilisée pour identifier les constituants actifs œstrogéniques de Cistanche. La présente étude a montré que 8-acide épiloganique, salidroside, syringalideA3'- -l-rhamnopyranoside, cistanoside A, échinacoside, cistanoside F, cistanoside B, cistanoside C, osmanthuside B, actéoside, isoacteoside, tubuloside B, Le 2'-acétylactéoside et deux composés inconnus étaient les principaux constituants actifs de Cistanche. Cependant, ces résultats nécessitent des études supplémentaires pour explorer les effets in vivo et le mécanisme d'action des constituants.

cistanchel'actéoside a de nombreuses fonctions, telles que la stimulation du système immunitaire

Remerciements :

Ce projet a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n° 81073015), la Fondation scientifique de la nature de la province du Heilongjiang (ZD2017014) et le plan de formation des jeunes talents innovants du Collège de la province du Heilongjiang (UNPYSCT-2017209) . Les auteurs déclarent qu'il n'y a pas de conflit d'intérêts concernant la publication de cet article.

Références

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