Étude sur la fonction neuroendocrinienne de la Cistanche Deserticola et de ses produits de cuisson à la vapeur de vin de riz chez un rat modèle Ⅱ induit par les glucocorticoïdes
Aug 16, 2024
3.2.4. Immunohistochimie
L'apoptose neuronale est contrôlée par de nombreux gènes apoptotiques et anti-apoptotiques, principalement le gène Bax favorisant l'apoptose et les gènes anti-apoptotiques de la famille des gènes Bcl-2. Bcl-2 est localisé dans les organites réactifs producteurs d'oxygène tels que les mitochondries, le réticulum endoplasmique et les membranes nucléaires. Bcl-2 a peu d'impact sur les radicaux libres de l'oxygène mais peutprévenir les dommages oxydatifs dans les cellules. Bax transporte du cytoplasme à la membrane mitochondriale, modifie la structure de la membrane mitochondriale et favorise la libération du cytochrome c et l'induction de l'apoptose.
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Il y avait une expression dans le cytoplasme surrénalien des protéines Bax et Bcl-2. La coloration a montré toutes les particules jaunes. Par rapport à celle du groupe BC, la densité optique moyenne de la protéine Bax dans le groupe MC a augmenté de manière significative (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).
La figure 5 (b) montre que par rapport à celle du groupe BC, la densité optique moyenne de la protéine Bcl-2 dans le groupe MC a diminué de manière significative (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).
La protéine caspase-3 est localisée principalement dans le cytoplasme sous sa forme originale dans les tissus normaux et a une faible expression. Les signaux positifs sont jaune pâle ou jaune brunâtre. Par rapport à celle du groupe BC, l'expression de la caspase-3 dans le groupe MC a augmenté de manière significative (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).
Dans les tissus normaux, l'expression du gène Fas était réduite et le signal positif pour l'hybridation in situ était jaune brunâtre. Comme le montre la figure 5 (d), par rapport à celle du groupe BC, la densité optique moyenne de la protéine Fas dans le groupe MC a augmenté (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).
La protéine FasL est située principalement dans la membrane cellulaire ou le cytoplasme et ses signaux positifs sont bruns. Par rapport à celle du groupe BC, la densité optique moyenne du gène FasL dans le groupe MC a augmenté de manière significative (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).
Les résultats ont démontré que CD et WCD pouvaientinduire l'apoptose dans les cellules inflammatoireset réduire les dommages surrénaliens en favorisant l'expression de la protéine FasL et en se liant à la protéine Fas, en activant la protéine caspase-3 et en déclenchant une cascade de caspases. L'effet du groupe WCD-HD était le meilleur.
3.3. Détermination de la fonction immunitaire
3.3.1. Indice des organes immunitaires
Comparés à ceux du groupe BC, le coefficient thymus et l'indice splénique du groupe MC ont diminué significativement (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.
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3.3.2. Détection des sous-ensembles de lymphocytes T dans le sang périphérique
Le pourcentage de cellules CD4+ dans le quadrant supérieur gauche et de cellules CD8+ dans le quadrant inférieur droit en Colombie-Britannique et dans chaque groupe de médicaments était supérieur à celui du groupe MC. Comparé à celui du groupe BC, le ratio de CD4+ThCD8+ a diminué significativement dans le groupe MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).
3.3.3. Détermination du niveau d'IL-10, d'IL-6, d'IL-2, de TNF-Α et d'IFN-C dans le sérum
La figure 8 montre que par rapport à celui du groupe BC, le niveau d'IL-6, de TNF- et d'IFN-c a augmenté de manière significative (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.
3.3.4. Résultats de l'expérience d'observation au microscope tissulaire Lymus
La figure 9 montre que dans le groupe BC, un grand nombre de lymphocytes étaient présents. Les lymphocytes et les réticulocytes étaient disposés de manière lâche au centre avec des thymocytes ronds ou ovales dispersés. Il n’y avait aucune nécrose, aucune infiltration de cellules inflammatoires et aucun changement anormal.
Le groupe MC présentait une grande quantité de tissu de nécrose lymphoïde, avec un arrangement désordonné de lymphocytes et de réticulocytes au centre. Les thymocytes ronds ou ovales ont disparu, une dégénérescence cellulaire massive ou une nécrose était évidente et il y avait une infiltration cellulaire inflammatoire avec des changements pathologiques anormaux.
Dans les groupes CD, les caractéristiques morphologiques des lymphocytes étaient revenues à la normale et la disposition des lymphocytes centraux et des réticulocytes était presque normale. Les thymocytes ronds ou ovales s'étaient rétablis, mais un petit nombre de lymphocytes dégénératifs ou nécrotiques et de cellules inflammatoires infiltrantes subsistaient.
Dans les groupes WCD et PC, les caractéristiques morphologiques des lymphocytes étaient mieux réparées. Les lymphocytes et réticulocytes au centre étaient bien alignés, les thymocytes ronds ou ovales étaient presque normaux, mais il restait un petit nombre de lymphocytes infiltrants et dégénératifs.
3.4. Expression des gènes de la protéine CaM
La valeur RQ (ARNm de CaM - ARNm d'actine) a été prise en compte pour examiner l'expression de l'ARNm de CaM. Le RQ du groupe BC était de 1. L'expression de l'ARNm de CaM dans l'hypothalamus du groupe MC a augmenté de manière significative (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.
4. Discussion
La Pharmacopée chinoise [2] indique que le CD et le WCD peuvent être utilisés en clinique comme principaux types de morceaux de décoction. Après avoir été cuit à la vapeur avec du vin de riz, leeffets rein-yang anti-âge et tonifiantsont été renforcées. Grâce à UPLC-QqQ-MS, nous avons détecté les changements quantitatifs dans la base du matériau chimique au cours du processus de cuisson à la vapeur du vin de riz. Les glycosides iridoïdes étaient instables et la teneur de ces glycosides diminuait, devenant même indétectable. La teneur en glycosides de phényléthanol a également changé, ce qui pourrait induire des modifications de la pharmacodynamique et de l'effet clinique.
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Le modèle classique de déficit rein-yang a été répliqué par injection sous-cutanée de corticostérone [19]. Un surdosage de corticostérone pourrait inhiber la sécrétion de CRH dans l'hypothalamus. Pendant ce temps, le secret de l’ACTH a également été inhibé. Le niveau d’hormone du cortex surrénalien a diminué et, par conséquent, la fonction de l’axe HPA a été réduite. L’hypofonctionnement de l’axe HPA est une caractéristique courante du déficit rein-yang [20]. Ensuite les rats présentent des phénomènes de « déplétion » et les symptômes sont en accord avec ceux d'une déficience rein-yang en clinique.
Dans le groupe MC, les taux de CRH, ACTH, T et CORT dans le sérum de rat ont diminué de manière significative (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.
La modulation de la proportion de membres de la famille Bcl-2 est l'un des principaux mécanismes par lesquels FasThFasL intervient dans la voie des récepteurs de mort, et la famille Bcl-2 régule la voie mitochondriale (21). Le facteur inhibiteur de l'apoptose Bcl-2 et les facteurs induisant l'apoptose, tels que Bax, appartiennent tous à la famille Bcl-2 [22]. L'apoptose cellulaire peut être déterminée par le rapport relatif des facteurs inhibiteurs de l'apoptose et des facteurs induisant l'apoptose (23). Les mitochondries ont la fonction de points de contrôle centraux pour de nombreuses formes d'apoptose (24). La présente étude a montré que les CD-MD et les WCD pouvaient déduire l'expression de Bax et augmenter Bcl-2 àaméliorer le déficit rein-yang. Fas est le principal récepteur de mort qui induit l'apoptose par ligand avec le ligand Fas (FasL) [25]. L'expression de Fas et FasL dans le groupe MC a augmenté, tandis que cette expression a augmenté de manière significative dans le groupe WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).
Le déficit de la fonction immunitaire est l’une des manifestations importantes du déficit rein-yang [28]. Dans cette étude, nous avons constaté que l'indice de la rate et du thymus du groupe WCD-MD s'est rétabli de manière significative (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).
L'axe HPA est le système de régulation le plus important car il régule la sécrétion de glucocorticoïdes et le système endocrinien pour maintenir la fonction sécrétoire du cortex surrénalien [32]. La surexpression de l'ARNm de CaM dans le tissu hypothalamus était liée à un déficit en yang du rein. CD et WCD pourraient bloquer les canaux calciques, inhiber l'expression de l'ARNm de CaM dans l'hypothalamus et diminuer l'afflux de calcium, diminuant ainsi l'activité du complexe Ca2+·CaM.
La formation d’un déficit rein-yang est un processus de développement d’une maladie chronique. Le rein n'est plus un concept purement anatomique, mais un terme général désignant l'immunité neuroendocrinienne et les systèmes génito-urinaires. Le réseau neuroendocrinien-immunitaire (NEI) est un système de régulation intégré important (33). Le CD et le WCD peuvent réguler la fonction de l'axe HPAT et améliorer la récupération du déficit rein-yang. Ce résultat constitue la base expérimentale pour la prévention clinique et le traitement de l’insuffisance rénale-yang.
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