Le cistanche total glycoside a-t-il des effets sur l'olfactif ?

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L'effet des glycosides totaux de cistanche sur les cellules engainantes olfactives du rat et leur sécrétion de facteurs neurotrophiques

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

La lésion de la moelle épinière (SCI) est une lésion grave de la partie centralesystème nerveux, représentant {{0}},2 % -0,5 % du total des traumatismes. Dans les fractures de la colonne vertébrale, 16 à 40 % sont compliquées par une lésion de la moelle épinière, laissant souvent une invalidité grave, entraînant des difficultés dans la vie quotidienne affectant la qualité de vie des patients et causant un lourd fardeau à la famille et à la société.Olfactifles cellules engainantes (OEC) sont un type spécial de colle nerveuse. Les plasmocytes peuvent migrer dans le cerveau avecolfactifaxones nerveux et peut sécréter de nombreux facteurs de croissance tels que NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y et S-100. En raison de ces caractéristiques deolfactifEngainant les cellules, les OEC sont considérées comme l'une des cellules de semence prometteuses pour la transplantation cellulaire afin de réparer les SCI. À l'heure actuelle, le traitement des lésions médullaires dans le domaine de la médecine de réadaptation repose principalement sur une réadaptation complète. Afin de trouver une méthode plus efficace, les recherches suivantes ont été menées sur l'effet decistanchetotalglycosidessur les OEC :

Glycoside total de Cistanche pour les cellules engainantes olfactives

1 Matériel et méthodes

1.1 Matériel expérimental

Rat Wistar (fourni par le Centre animalier de l'Université de Mongolie intérieure);cistanchetotalglycosides, milieu DMEM/F12, sérum de veau fœtal (FCS), poly-D-lysine, arabinoside (Ara-C), trypsine, solution D-Hanks, lapin anti-p75NGFR (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), incubateur de cellules (Thermo-HEPA Classe 100), microscope à contraste de phase inversé (Olympus CKX41, Japon), établi ultra-propre (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) La société, SW-CJ-2FD), enzyme analyseur d'étiquettes (Wellscan MKH), cytomètre en flux, etc.

1.2 Méthodes de recherche

1.2.1 Culture, purification et identification des OEC : Des rats Wistar ont été sacrifiés par décapitation et trempés dans du vin pendant 5 minutes. La partie antérieure du crâne a été ouverte pour exposer leolfactifampoule. Les deuxolfactifles bulbes ont été complètement retirés sous un microscope à dissection. Laver dans une solution D-Hanks ; Coupe leolfactifampoule avec des ciseaux microchirurgicaux, ajouter 2 ml de 0.25 % de pancréatine et incuber à 37 degrés pendant 20 minutes ; ajouter le milieu de culture D MEM/F12 contenant 10 % de sérum de veau dans un tube à centrifuger de 2 ml. La digestion s'est terminée au milieu ; la pipette bus a aspiré le tissu incomplètement digéré à 800 tr/min et centrifugé pendant 5 min, jeté le surnageant ; finalement utilisé le milieu conditionné (FCS à 20 % plus 20|i, mol/LForskoline plus 20|ig/mlBPE plus DMEM/F12) Transformez-le en suspension unicellulaire de 107 ml, ensemencez-le dans un flacon de culture cellulaire recouvert de polylysine, placez il dans un incubateur à 37 degrés, 5 pour cent de CO2, puis ajouter Ara- c La purification a été effectuée à 36h. Utilisez un anticorps secondaire IgG anti-lapin de lapin anti-p75E et marqué au FITC pour l'identification immunohistochimique des cellules et l'observation au microscope à fluorescence.

1.2.2 Utiliser le MTT et la cytométrie en flux pour déterminer l'effet decistanche glycosides totauxsurolfactifcellules engainantes : ensemencer les cellules cultivées et purifiéesolfactifengainant les cellules dans une plaque 96-puits à 1X106, et ajoutercistanche glycosides totaux(les concentrations d'action sont de 1 ug/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), mesurer la valeur de la DO et mesurer la cytométrie en flux cellulaire après 24h d'action. Configurez le groupe de contrôle etGlycosides totaux de Cistanchedifférents groupes de concentration : Groupe A (groupe témoin) : un milieu de culture contenant du sérum est utilisé comme témoin négatif ; Groupe B (cistanche glycosides totauxgroupe à faible concentration : llig/ml) ; Groupe C (groupe de concentration moyenne de glycosides totaux cistanche : L10jxg/MK) ; Groupe D (cistanche glycosides totauxgroupe à concentration élevée : 100|xg/ml) : 15 rats dans chaque groupe.

1.2.3 Détermination de la teneur en facteur neurotrophique dans le surnageant par ELISA : ensemencer les cultures et purifierolfactifengainant les cellules dans une plaque 6-puits à 1 x 106, ajoutercistanche glycosides totaux(la même concentration que ci-dessus) après 24 heures et agir pendant 24 heures, et recueillir le surnageant séparément, enregistré à -80 Long. La teneur en facteurs de croissance nerveuse dans le liquide a été déterminée par la méthode ELISA.

1.3 Analyse statistique

Les données de cette étude sont traitées comme des données de mesure, et les données obtenues sont exprimées en moyenne ± écart type, et le logiciel statistique SPSS 11.0 est utilisé pour l'analyse statistique. Les données obtenues sont analysées par analyse de variance, et P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Résultats

2.1 L'effet decistancheglycosides totaux surolfactifcellules engainantes

2.1.1 Résultats de la détermination de la méthode méthyl oxazolyl tétrazole (MT) : Groupe A : 0.617±0.149 ; Groupe B : 0.589±0.147 ; Groupe C : 0.761±0.138 ; Groupe D : 0.732±0.234. Comparaison entreGlycosides totaux de Cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, la différence n'était pas significative ;Glycosides totaux de CistancheGroupe de concentration 10 mg/ml, 100 mg/ml (C, D) par rapport au groupe témoin (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Le résultat de la détermination par cytométrie en flux est illustré à la figure 1. Par rapport au groupe témoin, lecistanche glycosides totauxétait plus élevé que le groupe témoin et le pourcentage de cellules apoptotiques était inférieur à celui du groupe témoin.

2.2 Résultats du dosage immuno-enzymatique (ELISA)

Les résultats des tests ont montré que la teneur en facteur neurotrophique dérivé de la lignée cellulaire gliale (GDNF) : avant dosage : 302,1 ± 16,6 pg/ml, groupe A : 340,5 ± 13,2 pg/ml ; groupe B : 333,2 ± 23,6 pg/ml ; Groupe C : 355,2 ± 17,6 pg/ml ; Groupe D ; 379,2±15,3pg/ml. Par rapport à la pré-administration, la teneur en GDNF a été significativement augmentée ; par rapport au groupe témoin (A), le contenu en GDNF duGlycosides totaux de CistancheLe groupe de concentration de 100 mg/ml (D) a été significativement augmenté.

3 Débat

La difficulté de régénération des axones est l'une des principales raisons pour lesquelles il est difficile de récupérer après une lésion de la moelle épinière. Les OEC ont un rôle dans la régénération des axones des neurones centraux que d'autres types de cellules sont difficiles à remplacer. Ces dernières années, les recherches deolfactifles cellules engainantes sont devenues un point chaud.Olfactifles cellules engainantes sont un type particulier de cellules gliales qui ont les caractéristiques des cellules de Schwann et des astrocytes. Ils proviennent de laolfactifmembrane basale et sont largement distribués à la surface de laolfactifmuqueuse,olfactifnerveux, etolfactifampoule. Il a la capacité de se diviser et de se régénérer pour la vie et peut accompagner leolfactifaxones nerveux à migrer dans le cerveau. Les axones duolfactifle nerf peut traverser la jonction entre le système nerveux périphérique et le système nerveux central tous les 30-60 jours, repousser dans leolfactifgaine et établir des connexions synaptiques4.Olfactifles cellules engainantes peuvent sécréter de nombreux facteurs de croissance tels que NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y et S-100. Des études ont montré que le facteur de croissance nerveuse (NGF) peut empêcher l'atrophie des neurones du noyau rouge de la colonne vertébrale et renforcer le tractus cortico-spinal Sprout et favoriser la régénération de la voie nerveuse de la moelle épinière du noyau rouge ; le facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) et la neurotrophine -3 (NT-3) peuvent empêcher l'apoptose des cellules de la moelle épinière du noyau rouge chez les rats adultes présentant une lésion axotomisée et sauver les neurones mourants et favoriser la régénération axonale P. En outre,olfactifles cellules engainantes expriment également d'autres facteurs sur leurs membranes cellulaires, tels que le facteur d'adhésion des cellules nerveuses (N-CAM), qui sont impliqués dans l'adhésion cellulaire et la croissance des axones. En raison de ces caractéristiques deolfactifEngainant les cellules, les OEC sont considérées comme l'une des cellules de semence prometteuses pour la transplantation cellulaire afin de réparer les SCI.

Les composants chimiques deCistanchecomprennent principalement des glycosides phényléthanoïdes, des iridoïdes, des composants volatils, des lignanes, des polysaccharides et des alcaloïdes. L'étude a révélé queCistancheet ses composants chimiques ont des effets neuroprotecteurs. Deng et al. ont étudié l'effet de tubulosa B sur l'apoptose des neurones SH-SY5Y induite par le facteur de nécrose tumorale (TNF). Les résultats ont montré qu'après 100ug/ Les neurones SH-SY5Y après 36 heures de traitement au TNF par L présentaient des caractéristiques d'apoptose typiques, tandis que le traitement à la tubuline B pendant 2 heures pouvait réduire significativement l'apoptose induite par le TNF. De plus, des études ont également montré que les glycosides phényléthanoïdes peuvent inhiber l'apoptose des cellules granulaires cérébelleuses de rat en inhibant la caspase -3 et la caspase -8, et contre le noir de souris C57 causé par la méthyl phényl tétrahydropyridine (MPTP). L'endommagement des neurones dopaminergiques de qualité a un effet protecteur. Non seulement cela, maisCistanchepeut également pallier divers dommages tels que l'ischémie-reperfusion du système nerveux. L'expérience de lésion d'ischémie cérébrale chez la souris montre que la plage d'infarctus de 24h et 48h après l'ischémie dans le groupe d'ischémie-reperfusion cérébrale est de 72,98 % et 60,45 % en moyenne. En revanche, lecistancheglycosides totaux les groupes à dose élevée, moyenne et faible (250.0mg·kg/j ; 125,0mg·kg/j ; 62,5mg·kg/j) peuvent respectivement fabriquer le cerveau des souris après ischémie cérébrale-reperfusion 24h La taille de l'infarctus a été réduite à 25,94 %, 25,81 % et 31,13 %, et la taille de l'infarctus cérébral a été réduite à 22,14 %, 20,06 % et 22,27 % après 48 heures. Il y avait une différence significative entre les deux, montrant un effet inhibiteur significatif sur l'apoptose neuronale.

Dans cette étude, différentes concentrations decistanche glycosides totauxont été appliqués aux OEC. La méthode MTT et la mesure par cytométrie en flux ont confirmé que 10mg/ml100mg/mlcistanche glycosides totauxpeut favoriser la proliférationolfactifengainant les cellules. Les résultats de la cytométrie en flux ont montré quecistanche glycosides totauxpeut favoriser la proliférationolfactifengainant les cellules Il favorise principalement la prolifération du cycle G1 desolfactifspermatozoïdes et réduit considérablement les cellules apoptotiques. Par conséquent,Glycosides totaux de Cistanchepeut non seulement favoriser la proliférationolfactifengainant les cellules mais aussi augmenter l'activité cellulaire et inhiber leur apoptose. Le dosage immuno-enzymatique prouve queGlycosides totaux de Cistanchepeut favoriser significativement la sécrétion de GDNF enolfactifengainant les cellules. Les résultats ci-dessus fournissent une base expérimentale pour l'application clinique deGlycosides totaux de Cistanche.

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