L'étude sur le mécanisme neuroprotecteur de Cistanche et de Fomitopsis Pinicola sur les neurones dopaminergiques du mésencéphale induits par le MPP plus

L'étude du mécanisme neuroprotecteur de Cistanche et Fomitopsis Pinicola sur les neurones dopaminergiques mésencéphaliques induits par MPP plus

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Points forts

Fomitopsis Pinicola se caractérise par des propriétés anti-oxydantes, anti-inflammatoires et immunostimulantes. Dans la présente étude, des cultures primaires de cellules dopaminergiques préparées à partir de mésencéphales embryonnaires de souris ont été utilisées pour déterminer laneuroprotecteureffets et mécanismes potentiels de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola sur la dégénérescence des neurones dopaminergiques induite par le MPP plus. Les résultats ont démontré que l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola protégeait les neurones dopaminergiques contre le MPP plus. L'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola a montré des activités antioxydantes et anti-inflammatoires. Le mécanisme de laneuroprotecteurL'effet de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola peut être lié à l'inhibition du stress oxydatif mitochondrial. Des études récentes ont montré que laneuroprotecteureffet deCistancheen fait un "candidat idéal" pour améliorer les maladies neurologiques.Cistancheest riche en échinacosides. L'extrait decistancheIl a été démontré qu'il induit la synthèse du facteur de croissance nerveuse dans des expériences in vivo et in vitro, favorise la sécrétion de facteurs apparentés dans le cerveau et améliore une série de fonctions cérébrales liées à la mémoire.

Cistancheaneuroprotecteureffets

Résumé

Objectif : Observer laneuroprotecteurmécanisme de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola sur l'apoptose induite par le MPP des cellules dopaminergiques mésencéphaliques in vitro.Méthodes : L'activité antioxydante des champignons a été déterminée par la méthode FRAP. L'activité anti-inflammatoire des champignons a été détectée par la méthode de libération de NO induite par le LPS. Dopaminergique mésencéphaliqueneuronesont été marqués par coloration TH pour observer la survie de THirneuronesRésultats : Dans le test d'activité antioxydante, la capacité antioxydante équivalente de Trolox (TEAC) de l'extrait aqueux de Fomitonsis Pinicola a été déterminée comme étant (165,80 ± 7,13) umol de Trolox/g d'extraits aqueux de traitement de Fomitopsis Pimicola (100,50,25 ,12,5 ug/ml) a diminué de manière significative la formation de NO. Le MPP* induit une condensation importante de la chromatine dans les noyaux dopaminergiques mésencéphaliquesneuronesavec la lyse nucléaire, le potentiel de la membrane mitochondriale a remarquablement diminué et la production de ROS a augmenté de manière significative. Par rapport au groupe témoin MPPt, les modifications morphologiques des noyaux cellulaires après l'apoptose ont été inversées par l'extrait aqueux de Fomtitonsis Pinicola. L'extrait aqueux du traitement Fomitopsis Pinicola (50, 25, 12,5 ug / ml) a considérablement augmenté le potentiel relatif de la membrane mitochondriale par rapport au contrôle MPP, respectivement. Comparé au contrôle MPPt, l'extrait aqueux du traitement Fomitonsis Pimicola （50, 25ug/ml） a diminué de manière significative la formation relative de ROS respectivement, Conclusions∶L'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola a montré uneneuroprotecteureffet sur les cellules dopaminergiques mésencéphaliques induit par MPpt, L'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola a montré des activités antioxydantes et anti-inflammatoires. Le mécanisme de laneuroprotecteurL'effet de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pimicola peut être lié à l'inhibition du stress oxydatif mitochondrial.Cistancheles glycosides peuvent améliorer le niveau d'apprentissage et de mémoire des patients atteints de la maladie d'Alzheimer, réduire la teneur en malondialdéhyde (MDA) dans les tissus cérébraux et augmenter la glutathion peroxydase (GSH). -Px), l'activité de la superoxyde dismutase (superoxyde dismutase, SOD), réduit l'activité de l'acétylcholine estérase (acétylcholine estérase, TChE), le taux d'apoptose des cellules cérébrales et réduit l'accumulation de calcium dans les tissus cérébraux.

Mots clés : Fomitopsis Pimicola, dopaminergiqueneuronesapoptose, antioxydant, potentiel membranaire mitochondrial, formation de ROS,Cistanche, Neuroprotecteur

Arrière plan

la maladie de Parkinsonest une maladie neurodégénérative de l'être humain, qui affecte gravement la santé de plus de 6,5 millions de personnes dans le monde. La prévalence des personnes âgées de plus de 65 ans est d'environ 1 2 % [1, 2]. Bien que l'étiologie et la pathogenèse exactes dela maladie de Parkinsonreste incertain, le stress oxydatif s'est avéré être un facteur clé dans la dégénérescence sélective des protéines dopaminergiques.neuronesdans le striatum nigrostrié [3, 4]. Des études ont montré qu'une production excessive d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) induisait un dysfonctionnement mitochondrial S, notamment une diminution du potentiel membranaire mitochondrial (△Ψm) et de l'activité des enzymes du complexe de la chaîne respiratoire Ⅰ, ainsi qu'un ADN mitochondrial anormal [5, 6]. De plus, la sensibilité et la sélectivité de la voie nigrostriée au stress oxydatif peuvent également conduire à des dommages à l'ADN des dopaminergiques.neuroneschez les patients avecla maladie de Parkinson [7].

Extrait de glycoside de phényléthanoïde dansCistanchedeserticola peut améliorer de manière significative la composition des caractéristiques comportementales induites par le modèle C57 de la souris 1-méthyl-4-phényl-1,2,3,6-tétrahydropyridine, MPTP), augmenter la substantia nigra tyrosine hydroxylase (tyrosine hydroxylase, TH) jusqu'à et teneur en DA dans le striatum des patients atteintsLa maladie de Parkinson.De plus, lecistancheL'extrait de glycoside de phényléthanol a un bon effet inhibiteur sur le déclin de la viabilité des cellules granulaires cérébelleuses chez les patients atteintsla maladie de Parkinsonet empêche le MPP plus l'apoptose cellulaire induite du granule cérébelleuxneuronesen inhibant l'activation de la caspase-3 et de la caspase-8. La mort, exerce son effet anti-apoptotique.

Fomitopsis Pinicola est un champignon médicinal qui appartient aux Polyporaceae et Pseudomonas. Il a un goût plat et légèrement amer et a des effets pharmacologiques tels que l'anti-oxydation, l'anti-bactérien, l'anti-tumoral et l'amélioration immunitaire [8, 9]. Nos études précédentes ont confirmé que les extraits aqueux de Fomitopsis Pinicola ont un effet protecteur sur l'apoptose induite par le MPP plus des cellules dopaminergiques du mésencéphale fœtal, ce qui peut augmenter considérablement le nombre de cellules dopaminergiques.neuroneset la longueur axonale, et Augmenter l'activité de l'enzyme complexe de la chaîne respiratoire mitochondriale I [10].

Dans cette étude, nous utiliserons la méthode du pouvoir antioxydant réducteur ferrique (FRAP) pour observer la capacité antioxydante des extraits aqueux de Fomitopsis Pinicola et observer l'effet anti-inflammatoire de la libération de NO induite par les lipopolysaccharides (LPS) dans la microglie BV2. Les effets de culture dopaminergique mésencéphaleneuronessur la morphologie nucléaire, le potentiel membranaire mitochondrial et la production de ROS ont été observés in vitro, afin de révéler le mécanisme de protection des endomycètes sur les dopaminergiques.neurones.

Matériel

Animal

Les 14-souris en gestation d'un jour, OF1/SPF, de l'Institut autrichien de génétique animale et vétérinaire de laboratoire, ont effectué des expériences sur des animaux de laboratoire conformément à la directive de la Commission européenne 86/609/EU.

Échantillon de test

Fomitopsis Pinicola a été produit en Autriche et a été identifié par le professeur Wolf-Dieter Rausch comme Footmitopsis Pinicola. Après la pulvérisation du Fomitopsis Pinicola, l'extrait aqueux a été obtenu par extraction à l'eau chaude et la teneur en polysaccharides bruts était de 8,95 %.

ligne cellulaire

Lignée cellulaire de microgliome de souris BV2, du Département de biochimie de l'Université vétérinaire de Vienne, dans un milieu DMEM (Sigma) contenant 10 % de sérum bovin fœtal, 2 % de B27 (Gibco), 2 % de glutamine, une culture à 37 degrés et 5 % de CO2.

milieu de culture cellulaire

Milieu BM (milieu de base) auquel le milieu DMEM a été complété avec 10 % de sérum bovin fœtal, 30 mM de glucose, 2 mM de glutamine, 1 % de streptomycine et 0,5 % d'amphotéricine.

principaux réactifs et instruments

MPP plus est un produit sigma, pureté supérieure ou égale à 98 % ; Les anticorps primaires et secondaires anti-tyrosine hydroxylase (TH) sont tous des produits de l'American Vectastain.TPTZ (2.4.6-terpyridine triazine), FeCl3·6H2O, FeSO4·7H2O sont des produits de la solution de séchage American sigma-Aldrich.DAPI. La solution de teinture JC-1 et la solution de teinture C-DCDHF-DA sont toutes des produits d'Invitrogen Molecular Probes. La concentration de la solution d'origine était de 1 mg/ml, Img/ml et 1 M, respectivement. Microscope à fluorescence, fabriqué par la société Nikon au Japon, modèle TS-100-F. Spectrophotomètre pour l'Allemagne Produits Pharmacia Biotech, modèles pour Novaspec ⅡI.

Cistanchepeut prévenirla maladie de Parkinson

méthode

Détermination de la capacité antioxydante des extraits par la méthode FRAP

Après la préparation de 30 ml de fluide de travail FRAP (tampon acétate 300 mmol/L, solution TPTZ 10 mmol/L, solutions FeCly 20 mmol/L mélangées uniformément à un rapport volumique de 10:1:1), 450 µL de FRAP travaillant liquide a été ajouté avec différentes concentrations de 60 ul d'extraits aqueux de Fomitopsis Pinicola et 45 ul d'eau à double évaporation. Le mélange à 37 degrés C évite la réaction lumineuse après 30 min, puis détermine ses valeurs d'absorbance à 593 nm. La capacité antioxydante totale de chaque extrait a été quantifiée en utilisant le Trolox comme standard. Trois essais parallèles ont été effectués pour chaque échantillon. Les résultats ont été exprimés en équivalent Trolox (TEAC) (mol TEAC/g) par gramme d'extrait.

AUCUN test de libération n'a été utilisé pour détecter l'effet anti-inflammatoire de l'extrait

Les cellules BV2 en phase logarithmique ont été inoculées dans des plaques 48-puits à la concentration de 1 x 10 degrés cellules/ml. Après incubation à 37 degrés et 5 % de CO2, le lipopolysaccharide (LPS) a été ajouté pour la stimulation, la concentration finale était de 1 ug/ml. Ensuite, différentes concentrations de l'extrait ont été ajoutées et les cellules ont été cultivées à 37 degrés sous 5 % de CO, pendant 48 h, après quoi la concentration de NO, a été mesurée. Avant le procès. Les réactifs de Griess A et B ont été sortis du réfrigérateur à 4 degrés C et laissés s'équilibrer à température ambiante pendant 30 min. Les étalons de nitrite ont été dilués en série (20, 10, 5, 2,1 et 0,5 uM) pour produire des courbes étalons. Ajouter 50 μL de l'étalon dilué et le surnageant de l'échantillon à tester (4 réplicats pour chaque concentration), ajouter à la plaque à puits 96-, puis ajouter 50

uL de la solution A, incuber à température ambiante pendant 10 min dans l'obscurité et ajouter 50 uL de la solution B. Après incubation pendant 10 min à température ambiante dans l'obscurité, l'absorbance a été mesurée à 550 nm avec un lecteur de microplaques dans les 30 min, et la libération de NO dans le surnageant a été calculée selon la courbe standard [11]. En même temps, 10 ul de MTT (5 mg/mL dans une solution PBS) ont été ajoutés à chaque puits de la plaque cellulaire et cultivés à 37 degrés pour 5 % de CO, pendant 4 h. Une fois le surnageant jeté, 100 ul de DMSO ont été ajoutés à chaque puits et l'absorbance a été mesurée à 570 nm après dissolution complète, pour observer le taux de survie des cellules.

Culture et identification des cellules dopaminergiques primaires du mésencéphale et traitement médicamenteux

Les souris gravides ont été sacrifiées et transférées dans une boîte de Pétri contenant du tampon DPBS, les embryons de souris ont été disséqués, le mésencéphale a été isolé, coupé en petits morceaux et collecté dans un tampon DPBS contenant 2 ml de 0 1 % de trypsine et 2 ml de {{ 3}}.02 % de DNase L Incuber pendant 7 min dans un bain-marie à 37 degrés, puis ajouter 2 ml d'inhibiteur de trypsine à une concentration de 0.125 mg/ml, centrifuger le tissu à 100 xg pendant 4 min et jeter le surnageant. Ensuite, un milieu DMEM contenant 0,02 % de DNase I a été ajouté et les cellules séparées ont été remises en suspension dans un milieu de culture cellulaire BM, ensemencées dans des plaques cellulaires traitées à la polylysine et cultivées à 37 degrés, 5 % de CO. Le 10e jour de culture, 10 μM MPP * a été ajouté aux cellules neuronales primaires cultivées pour le traitement, puis 50,25.12,5 ug / ml d'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola ont été ajoutés pour le traitement à 37 degrés, 5% de CO, ont été cultivés pendant 48 heures. Le 12e jour de culture, certaines cellules ont été utilisées pour l'identification des neurones dopaminergiques, et les cellules ont été fixées avec 4 % de paraformaldéhyde à 4 degrés pendant 30 min, puis perméables pendant 30 min à température ambiante avec 0,4 % de Triton X{{ 33}}. Après rinçage avec du tampon PBS pendant 3 fois, il a été bloqué avec une solution de blocage de sérum de cheval pendant 90 min, puis un anticorps primaire anti-TH a été ajouté pendant la nuit, puis un anticorps secondaire biotinylé a été ajouté à température ambiante pendant 90 min, et enfin, 3,3 La '-diaminobenzidine (DAB, 5 mg/ml) a été développée. Les cellules positives pour la couleur TH ont été observées au microscope comme des neurones dopaminergiques.

Observation de la morphologie nucléaire

Les cellules MPP plus et traitées avec le médicament ont été fixées avec 4 % de paraformaldéhyde pendant 3 0 min, puis rompues avec 0,4 % de Triton X-100 pendant 30 min, puis ajoutées à une solution de coloration DAPI à une concentration finale de 1 ug/ml pendant 5 min à température ambiante. La morphologie du noyau a été observée au microscope à fluorescence. La longueur d'onde d'excitation était de 340 nm et 4 champs ont été choisis au hasard pour chaque puits.

Détection du potentiel membranaire mitochondrial

Les cellules MPP plus et traitées avec le médicament ont été ajoutées à JC -1 dve à une concentration finale de 10 ug / ml et incubées à 37 degrés pendant 15 minutes. Les changements d'intensité de fluorescence ont été observés par microscopie à fluorescence à 488 nm et 568 nm de lumière d'excitation respectivement. Le changement de potentiel de membrane mitochondriale a été mesuré par le rapport de l'intensité de fluorescence à 568 nm à l'intensité de fluorescence à 488 nm.

Test de production ROS

MPP plus et les cellules traitées avec le médicament ont été ajoutées à C-DCDHF-DA dve à une concentration finale de 10 mM et après incubation à 37 degrés pendant 30 min, la solution de culture a été jetée et les cellules ont été lavées deux fois avec un milieu DMEM incolore . La microscopie à fluorescence a été utilisée pour observer le changement d'intensité de fluorescence. La longueur d'onde d'excitation était de 488 nm et 4 champs de vision ont été choisis au hasard pour chaque puits. Le temps d'exposition des cellules à la lumière d'excitation n'était pas supérieur à 5s.

Résultats

Pouvoir antioxydant du Fomitopsis Pinicola

Fomitopsis Pinicola a un effet anti-oxydant évident et son extrait aqueux a une capacité antioxydante de (165,80 ± 7,13) μmol d'extrait de TEACh.

Effet anti-inflammatoire de Fomitopsis Pinicola

Après que le LPS a induit des cellules BV2, la libération de NO a été significativement augmentée, ce qui était significativement différent de celui du groupe témoin normal. Après l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola, la libération de NO a été significativement réduite, parmi lesquelles 100, 50, 25, il y avait une différence significative entre le groupe dose de 12,5 ug/ml et le groupe LPS (Fig. 1). Après que les cellules BV2 aient été induites par le LPS, le taux de survie des cellules était significativement inférieur à celui du groupe témoin normal. Après l'action de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pimicola, le groupe dose 100ug/ml a eu une réduction significative de la viabilité cellulaire, et il y avait une différence significative par rapport au groupe LPS. Le groupe de dose de 50, 25, 12,5 ug/ml n'a eu aucun effet significatif sur la viabilité cellulaire (Figure 1, Figure 2).

Identification des neurones dopaminergiques du mésencéphale chez le rat fœtal

Après la coloration TH spécifique des neurones du mésencéphale de rat fœtal cultivés, les neurones dopaminergiques ont montré une couleur jaune brunâtre clair, et la coloration des corps cellulaires et des axones était clairement visible, ce qui a prouvé que les neurones dopaminergiques ont été cultivés avec succès (Figure 3) .

Figure 1 Effets des extraits aqueux de Fomitopsis Pinicola sur la libération de NO dans les cellules BV2

induite par le LPS

Remarque : par rapport au groupe de contrôle normal, **p < {{0}}.01 ;="" par="" rapport="" au="" groupe="" lps,="" ##p="">< 0,01,="" #p=""><>

Figure 2 influence de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola sur le taux de survie des cellules BV2

Remarque : par rapport au groupe témoin normal, **p < 0.01 ;="" par="" rapport="" au="" groupe="" lps,=""><>

Figure 3 Coloration des neurones DA du mésencéphale marqué TH

Effet de Fomitopsis Pinicola sur la morphologie nucléaire Le DAPI, 4',6-diamidino-2-phénylindole, est une plongée fluorescente qui pénètre la membrane cellulaire et se lie étrangement à l'ADN. Les résultats de cette expérience ont montré que les noyaux des neurones dopaminergiques du groupe témoin normal restaient presque intacts et que la chromatine était uniforme. Le groupe témoin MPP plus a montré une condensation significative de la chromatine, une lyse de la membrane nucléaire et une lyse nucléaire. Après l'action de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola, la morphologie du noyau était relativement intacte, et les caractéristiques de l'apoptose étaient réduites (Figure 4).

Effet de Fomitopsis Pinicola sur le potentiel de membrane mitochondriale

Après MPP plus induction, le potentiel de membrane mitochondriale des neurones dopaminergiques a diminué de manière significative, ce qui était significativement différent de celui du groupe témoin normal (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" mitochondrial="" membrane="" potential="" decreased="" after="" mpp+="" induction.="" there="" was="" a="" significant="" increase="" in="" mitochondrial="" membrane="" potential="" in="" the="" 50,="" 25,="" and="" 12.5ug/ml="" dose="" groups="" compared="" with="" the="" mpp+="" control="" group=""><0.01,><0.05)(figure>

Effet de Pseudomonas Sinensis sur la production de ROS

Après MPP plus induction, la production de ROS des neurones dopaminergiques a été significativement augmentée. qui était significativement différent de celui du groupe témoin normal (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" ros="" increased="" after="" mpp+induction.="" the="" reduction="" of="" ros="" production="" in="" the="" 50="" and="" 25="" ug/ml="" dose="" groups="" was="" significantly="" different="" from="" the="" mpp+control="" group=""><0.01)(figure 6,="" figure="">

Figure 4. Imagerie de coloration par fluorescence DAPI des neurones DA dans le mésencéphalique

Figure 5 L'effet de l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola sur les effets mitochondriaux induits par le MPP plus

le potentiel membranaire des neurones DA mésencéphaliques

Remarque : par rapport au groupe témoin normal, **P < {{0}}.01 ;="" par="" rapport="" au="" groupe="" mpp="" plus="" témoin,="" #="" #="" p="">< 0,01,="" #="">

0.05.

Figure 6. Coloration par fluorescence C-DCDHF-DA des neurones DA dans le mésencéphale

Figure 7 effets des extraits aqueux de Fomitopsis Pinicola sur la DA mésencéphalique induite par le MPP plus

production de neurones ROS

Remarque : par rapport au groupe témoin normal, **P < {{0}}.01 ;="" par="" rapport="" au="" groupe="" mpp="" plus="" témoin,="" #="" #="" p=""><>

Conclusion

La dégénérescence des neurones dopaminergiques (neurones DA) dans le mésencéphale est perdue et le corps de Lewy dans le cytoplasme des neurones résiduels est la principale caractéristique deLa maladie de Parkinson.Les symptômes cliniques comprennent principalement des tremblements statiques, une bradykinésie, une hypermyotonie, une instabilité posturale, et al. A l'heure actuelle, le traitement desla maladie de Parkinsonest encore dominée par la thérapie de remplacement de la dopamine. Bien qu'il puisse améliorer les symptômes des patients, il n'empêche pas le développement de la maladie. L'application à long terme entraînera de nombreux effets indésirables [12], l'étude de nouvelles approches thérapeutiques est donc impérative. Des études ont montré que le stress oxydatif et les niveaux de dopamine oxydée sont des causes importantes de dommages sélectifs des neurones dopaminergiques [13], et certains antioxydants naturels tels que la quercétine, la curcumine, les polyphénols du thé, etc. ont été confirmés comme étant de la dopamine causée par des agents neurotoxiques. Les dommages neuronaux ont des effets protecteurs évidents [14-16], il est donc prometteur de cribler des médicaments pour le traitement dela maladie de Parkinsonissus des médecines traditionnelles chinoises aux effets pharmacologiques antioxydants.

Dans cette étude, FRAP a été utilisé pour détecter la capacité antioxydante d'extraits aqueux de Fomitopsis Trolox Pinicola, en utilisant (6-hydroxy-2,5,7,8-tétraméthylchromane)2- acide carboxylique) s'est avéré avoir des effets antioxydants significatifs. L'effet anti-inflammatoire des extraits aqueux détectés est Pinicolawas Fomitopsis dby la méthode de libération de la microglie BV2 induite par le lipopolysaccharide, et il n'y avait aucun effet significatif sur la viabilité cellulaire à des concentrations inférieures à 100 ug / ml, ce qui indique que c'était dans les cellules gliales ont des anti- effets inflammatoires et n'ont pas d'effet significatif sur la survie des cellules.

Le stress oxydatif fait référence au déséquilibre entre la production et l'élimination des radicaux libres d'oxygène dans l'organisme. C'est un événement précoce dans le processus de dégénérescence neuronale-apoptose. Des études ont montré que le tissu cérébral est riche en phospholipides et en acides gras insaturés, tous deux sensibles au stress oxydatif. Chez les patients avecla maladie de Parkinson, Malondialdéhyde, l'indice de peroxydation lipidique, dans le striatum est considérablement augmenté, tandis que la concentration de polyinsaturés. les acides gras ont diminué de manière significative [17], la teneur en glutathion (GSH) a diminué et la fonction de l'enzyme I du complexe de la chaîne respiratoire mitochondriale a été altérée [18,19]. MPP plus est un métabolite de l'agent neurotoxique MPTP dans le corps, qui peut générer des radicaux libres dans le corps, inhiber la fonction mitochondriale, détruire les neurones DA dans la substantia nigra et développer des symptômes dela maladie de Parkinsondans les modèles animaux. Le NO est également impliqué dans le mécanisme d'endommagement du MPP plus. Un excès de NO diffuse dans les neurones DA, qui peuvent se nitroser avec le site sulfhydryle de l'enzyme et inhiber l'activité de l'enzyme I du complexe de la chaîne respiratoire mitochondriale [20,21].

Les résultats de cette étude ont montré qu'après que le MPP plus a induit des neurones DA cultivés primaires, le noyau a montré une apoptose évidente, le potentiel de la membrane mitochondriale a diminué et la production de ROS a augmenté de manière significative, indiquant que le MPP plus peut induire l'apoptose des neurones DA en inhibant le stress oxydatif mitochondrial. l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola a peut améliorer la morphologie des neurones dopaminergiques après MPP plus induction, augmenter le potentiel membranaire mitochondrial et réduire la production de ROS, indiquant que l'extrait aqueux de Fomitopsis Pinicola inhibe les dommages des neurones DA du mésencéphale endommagés par des agents neurotoxiques, qui peuvent être lié à son anti-oxydation et à l'inhibition de la production de NO, et protège les neurones en inhibant le stress oxydatif mitochondrial.

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