Effort de baisse de l'acide urique et mécanisme de l'actéoside et de l'échinacoside extrait de Cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Abstrait:Viser à explorer les effets et les mécanismes de réduction de l'acide urique de l'actéoside (AS) et de l'échinacoside (ECH) extrait deCistanche tubulosa.
MéthodesLe modèle de rat d'hyperuricémie (HUA) a été établi en utilisant l'oxonate de potassium (1,5 g · kg -1 · d -1) combiné avec l'adénine (100 mg · kg -1 · · d -1). The HUA model rats were randomly divided into a model control group, an allopurinol group (30 mg·kg-1·d-1 ), AS low and high (50, 100 mg·kg-1·d-1 ) dose groups, and ECH low and high (50, 100 mg · kg -1 · d -1}) Groupes de dose. Un groupe témoin normal a été précédemment établi. Après quatre semaines d'administration, l'analyseur de biochimie sanguine a été utilisé pour détecter les niveaux de Sua Urea, Crea, Adenosine désaminase (ADA) et d'acide urique (UUA) dans l'urine. Un essai immuno-enzyme lié à l'enzyme a été utilisé pour détecter les niveaux de xanthine oxydase (XOD) dans le sérum. Le tissu rénal a été collecté et le coefficient rénal a été pesé et calculé. La coloration de l'hématoxyline (He) a été utilisée pour observer les changements pathologiques rénaux. L'immunohistochimie (IHC) et la PCR en temps réel ont été utilisées pour détecter les niveaux d'expression des protéines et de l'ARNm du transporteur d'urate 1 (URAT1), du transporteur de glucose 9 (GLUT9), du transporteur d'anion organique 1 (OAT1) et du transporteur d'anion organique 3 (OAT3) dans le tissu rénal. Les résultats en tant que et Ech pourraient améliorer la fonction rénale chez les rats du modèle HUA, réduire les niveaux d'acide urique sanguin, favoriser l'excrétion d'acide urique, réguler à la baisse les taux sériques d'ADA et XOD, et régulent à la hausse l'expression de la protéine et de l'ARNm de l'urat1 et de la GLUT9 dans les tissus rénaux, tout en régulant à la hausse la protéine et l'expression de l'ARNm de l'avoine de l'avoine 1 et de l'OAT dans les tissus rénaux.
Conclusions Les glycosides phényléthanoïdes AS et ECH de Cistanche tubulosa peuvent exercer des effets d'abaissement d'acide urique en améliorant la fonction rénale chez les rats du modèle HUA, en réduisant les niveaux d'ADA et XOD et en régulant l'expression de Urat1, Glut9, Oat1 et OAT3.
Mots clés: Cistanche tubulosa; actéoside; échinacoside; hyperuricémie; réduction de l'acide urique; mécanisme
Extrait Cistanche tubulosa avec 16% d'actéoside
L'hyperuricémie (HUA) est une maladie métabolique causée par le métabolisme des purines désordonné dans le corps humain, conduisant à des niveaux élevés d'acide urique de sang [1]. Il est généralement diagnostiqué lorsque les taux d'acide urique sanguins dépassent 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) chez les hommes et 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. 0 μmol.l⁻¹) chez les femmes [2]. Le développement de l'hyperuricémie est principalement lié à des facteurs tels que les régimes riches en purine, la consommation chronique d'alcool, la consommation de médicaments et l'hypothyroïdie. Il augmente non seulement le risque de maladies cardiovasculaires, de diabète et d'hypertension [3-4], mais a également un impact significatif sur la santé des patients.
Actuellement, les traitements cliniques pour l'hyperuricémie comprennent principalement des médicaments qui inhibent la production d'acide urique et favorisent l'excrétion d'acide urique. Cependant, ces traitements ont certaines limites pour les patients atteints de fonction hépatique ou rénale altérée [5-6]. Par conséquent, l'exploration de médicaments efficaces avec des effets secondaires faibles est d'une grande importance pour la prévention et le traitement de l'hyperuricémie.
Cistanche tubulosa (Schenk) R. Wight, couramment utilisé dans la médecine traditionnelle chinoise comme herbe en tonification rénale, est utilisé pour traiter des conditions telles que l'impuissance, l'infertilité, la carence en essence et le sang, la faiblesse dans le bas du dos et les genoux, la faiblesse musculaire et la constipation due à la sécheresse intestinale [7]. Des études ont montré queCistanche tubulosapossède des effets neuroprotecteurs [8], anti-inflammatoires [9], régulariment du métabolisme osseux [10] et amélioration de l'efficacité dans la chimiothérapie pour les patients cancéreux [11]. Parmi ses divers composants actifs, les glycosides phényléthanoïdes sont les plus abondants.
Actéoside (AS) et échinacoside (ECH), deux glycosides phényléthanoïdes avec une teneur élevée enCistanche tubulosa, présentent une forte activité biologique et détiennent un potentiel significatif de développement et d'application. Par conséquent, notre groupe de recherche a sélectionné AS et ECH pour une étude plus approfondie. Grâce à des prédictions de pharmacologie du réseau et des pré-expériments chez la souris, nous avons découvert que les extraits de glycosides phényléthanoïdes deCistanche tubulosaPeut avoir un certain effet hypo-acide urique. Cependant, les voies et les mécanismes de ces effets restent flous.
Ainsi, en utilisant les mécanismes de production d'acide urique et ses principales voies d'excrétion comme axée de la recherche, nous avons étudié les effets hypotes à l'acide urique des extraits de glycosides phényléthanoïdes As et Ech. Cette étude vise à élucider les voies et les mécanismes à travers lesquels AS et ECH exercent leurs effets hypotes à l'acide urique.
1 matériaux
1.1 Animaux expérimentaux
Soixante-dix rats mâles de Spf Sprague-Dawley (SD), pesant 150 à 180 g, ont été achetés auprès du centre animal expérimental de l'Université médicale du Xinjiang. Numéro de licence de production animale: SCXK (xin) 2023-0001. Cette expérience a été approuvée par le Comité d'éthique animale du Xinjiang Region autonome Uygur Medicine Research Institute, avec le numéro d'approbation de l'éthique animale: iacuc- (zhun) -2024-009.
1,2 médicaments et réactifs
Extraits de glycosides phényléthanoïdes (AS et ECH)depuisCistanche tubulosa (purity >98%, vérifiés par chromatographie liquide à haute performance) ont été extraits, purifiés et préparés par le laboratoire clé de la science de la formulation d'Uygur, Institut de recherche d'Uygur Medicine Research de la région autonome du Xinjiang. Numéros de lots: 20220617 (AS) et 20220526 (ECH).
Comprimés d'allopurinol, Numéro de lot: 62208726, fabriqué par Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Oxonate de potassiumetadénine, Numéros de lots: I2130050 et C2202255, achetés auprès de Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Kits de test Crea (créatinine), UA (acide urique), urée et ADA (adénosine désaminase), Numéros de lots: 141123010, 141223004, 141323008 et 043624005, achetés auprès de Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
Kit de test d'activité XOD (xanthine oxydase), Numéro de lot: Y10001219, acheté auprès de Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Anticorps (Urat1, Glut9, OAT1, OAT3), Numéros de lots: 3i5723 0, 92f0296 / 4, 0f33081 / 2i44618, acheté auprès d'Affinity Biosciences.
IgG de chèvre étiquetée HRP, numéro de lot: 245440113, acheté auprès de ZSGB-BIO.
Solution de coloration à l'hématoxyline, numéro de lot: 24135741h, acheté auprès de Pékin Lanjieke Technology Co., Ltd.
Kit de réactif chromogène tampon, numéro de lot: 240010512, acheté auprès de ZSGB-BIO.
DEPC (pyrocarbonate de diéthyle), numéro de catalogue: D 60029-500 ml, acheté auprès d'Amresco (USA).
Marqueur d'ADN M5 Hiclear DL2000, Numéro de catalogue: MF025, acheté auprès de Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Réactif Trizol ™, numéro de catalogue: 15596026, acheté auprès de Thermo Fisher Scientific (USA).
5x tout-en-un RT MastermixetEvagreen Express 2 × QPCR MasterMix-Low Rox, Numéros de catalogue: G492 et G891, tous deux achetés chez Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 méthodes
2.1 Établissement et regroupement du modèle
Soixante-dix rats mâles Sprague-Dawley (SD) ont été acclimatés et divisés en deux groupes: un groupe témoin normal (1 0 rats) et un groupe témoin de modèle (60 rats). Le groupe témoin normal a été administré à 0,5% CMC-Na via Gavage. Le groupe témoin du modèle a été administré d'oxonate de potassium (1,5 g · kg⁻¹) combiné avec de l'adénine (100 mg · kg⁻¹) à une dose de 10 ml · kg⁻¹, une fois par jour pendant 14 jours consécutifs. Le modèle a été considéré avec succès lorsque les niveaux d'urée, de créme et de SUA ont considérablement augmenté, comme mesuré par un analyseur biochimique.
Les rats du modèle d'hyperuricémie ont été divisés en groupes suivants basés sur les niveaux de SUA, d'urée et de CREA: groupe témoin du modèle, groupe allopurinol (3 0 mg · kg⁻¹), faible dose en tant que groupe (50 mg · kg⁻¹), groupe à haute dose (100 mg · kg⁻¹), groupe à faible durée (50 mg · kg⁻´), et à faible dose-dose (50 mg. Groupe ECH (100 mg · kg⁻¹), avec 10 rats dans chaque groupe. Pour maintenir une hyperuricémie stable, tous les groupes à l'exception du groupe témoin normal ont été administrés d'oxonate de potassium (500 mg · kg⁻¹) combinés avec de l'adénine (100 mg · kg⁻¹) par gavage le matin, suivi de l'administration des médicaments respectifs dans chaque groupe de traitement dans l'après-midi. Le groupe témoin normal a reçu une solution de 0,5% CMC-Na le matin et de l'eau potable l'après-midi à une dose de 10 ml · kg⁻¹, une fois par jour pendant 14 jours consécutifs. Par la suite, l'administration d'agents de modélisation a été arrêtée et les médicaments respectifs ont été administrés en continu quotidiennement pendant 14 jours supplémentaires.
2.2 Collection d'échantillons
Après la dose finale, les rats ont été à jeun pendant la nuit (l'eau n'a pas été limitée). L'urine de chaque groupe a été collectée pour des tests d'acide urique. Le poids corporel a été mesuré après le jeûne et des échantillons de sang ont été prélevés sous anesthésie. Le sérum a été séparé par centrifugation et stocké pour une utilisation future. Les tissus rénaux ont été collectés et pesés. Un rein a été fixé dans une solution de paraformaldéhyde à 4%, tandis que l'autre a été congelé dans de l'azote liquide pour une analyse plus approfondie.
2.3 Mesure de l'acide urique dans l'urine de rat
Des échantillons d'urine de chaque groupe ont été centrifuges (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, rayon de centrifugeur 14 cm), et le surnageant a été collecté. Les échantillons d'urine ont été dilués 1: 9 avec une solution saline et analysés pour la teneur en acide urique à l'aide d'un analyseur biochimique.
2,4 Mesure de l'ADA, de l'urée, de la crea et du sua dans le sérum de rat
Des échantillons de sang de chaque groupe ont été centrifugés (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, rayon de centrifugeuse 14 cm) et le sérum a été collecté. Les niveaux d'ADA, d'urée, de CREA et de SUA dans le sérum ont été mesurés à l'aide d'un analyseur biochimique.
2,5 Mesure de XOD dans le sérum de rat
Les changements dans les niveaux de XOD dans le sérum de rat ont été mesurés à l'aide d'un test enzymatique selon les instructions du fabricant. L'absorbance initiale (a₁) et l'absorbance finale (a₂) à 290 nm ont été enregistrées, et ΔA (ΔA=a₂ - a₁) a été calculée. ΔA a été substitué dans la formule:
XOD (nmol⁻¹ · Min⁻¹ · Ml⁻¹)=[ΔA × Volume total du système de réaction ÷ (Coefficient d'extinction molaire de l'acide urique × longueur de traject,
Pour calculer la quantité d'acide urique catalysé par minute par millilitre de sérum.
2.6 Mesure des coefficients rénaux
Les tissus rénaux ont été collectés, lavés avec une solution saline et l'excès d'eau a été éliminé. Le poids de l'organe a été mesuré avec précision et le coefficient rénal a été calculé comme suit:
Coefficient rénal=Poids rénal (Mg) / poids corporel (G).
2.7 Observation histopathologique du tissu rénal par la coloration
Les tissus rénaux fixés dans une solution de paraformaldéhyde à 4% ont été déshydratés avec des concentrations d'éthanol gradués, dégagés avec du xylène, incorporés dans de la paraffine et sectionnés en tranches 4-}. Les coupes ont été déparaffinées avec du xylène, hydratées avec de l'éthanol gradué, colorées à l'hématoxyline et à l'éosine (HE), et scellées avec de la gomme neutre. Les changements morphologiques du tissu rénal ont été observés au microscope léger et les images ont été capturées à un grossissement de 400 ×.
2.8 Détection de l'expression de la protéine Urat1, GLUT9, OAT1 et OAT3 dans le tissu rénal par IHC
Les tissus rénaux fixés dans une solution de paraformaldéhyde à 4% ont été déshydratés avec des concentrations d'éthanol gradués, éliminés avec du xylène, incrustés dans de la paraffine et sectionnés. La récupération de l'antigène et le blocage du sérum de chèvre ont été effectués. Des anticorps primaires (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) ont été ajoutés à une dilution de 1: 200 et incubés pendant une nuit à 4 degrés. Le lendemain, les sections ont été lavées avec du PBS, séchées à l'air et incubées avec des IgG anti-lapin de chèvre marquée à la biotine à 37 degrés pendant 30 minutes. Les coupes ont été lavées avec du PBS et incubées avec un réactif chromogène DAB pendant 10 minutes, suivi du rinçage du PBS, de la coloration de l'hématoxyline pendant 3 minutes, de la différenciation avec une solution d'éthanol d'acide hydrochlorique, du bleuet au lithium, de la déshydratation avec de l'éthanol gradient, du dégagement avec du xylène et de la scellance avec un gomme neutre.
Pour chaque rat, deux champs aléatoires 4 0 0 × champs de coupes rénaux ont été sélectionnés. La coloration positive (jaune brun) a été analysée et la densité optique intégrée (IOD) de chaque champ a été mesurée en utilisant l'image-PRO plus 6.0 pour l'analyse statistique.
