Effets antioxydants et anticoagulants des glycosides phénylpropanoïdes

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Bartosz Skalski, et al

Résumé

Les plantes holoparasites des Orobanchaceae, y compris Cistanche, Orobanche et Phelipanche spp, sont connues pour leur richesse enphénylpropanoïdeglycosides(PPG). De nombreux composés de PPG se sont avérés posséder un large éventail d'activités, telles que des propriétés antimicrobiennes, anti-inflammatoires, antioxydantes et améliorant la mémoire. Pour mieux explorer le potentiel de bioactivité des orobanches européens (O. Caryophyllaceae - OC, P. Arenaria - PA, P. ramosa - PR) et de dix constituants phénylpropanoïdes isolés, nous avons étudié leur action antiradicalaire, effet protecteur contre l'oxydation dans le système plasma in vitro , et influence sur les paramètres de coagulation. Les extraits testés ont montré une activité de piégeage de 50 à 70 % de la puissance de Trolox. L'extrait OC, riche en actéoside, avait un potentiel antiradicalaire supérieur de plus de 20% à celui de l'extrait PR, qui était le seul contenant des PPG dépourvus de groupement catéchol à cycle B dans l'unité acyle. De plus, il a été constaté que seuls huit PPG testés(phénylpropanoïdeglycosides)potentiel antioxydant démontré dans le plasma humain traité avec H2O2/Fe ; cependant, les trois PPG testés(phénylpropanoïdeglycosides)possédait un potentiel anticoagulant en plus des propriétés antioxydantes. Il apparaît que la structure des PPG, en particulier la présence de fragments acyle et catéchol, est principalement liée à leurs propriétés antioxydantes. Le potentiel anticoagulant de ces composés est également lié à leur structure chimique. Certains PPG présentent le potentiel de traiter les maladies cardiovasculaires associées àoxydantstresser.

Mots clés:Orobanche, glycosides phénylpropanoïdes, stress oxydatif, hémostase plasmatique

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1. Introduction

Oxydatifstresserest largement connue pour son impact négatif sur la santé des organismes vivants, y compris le vieillissement accéléré et certains cancers. L'occurrence deoxydantstresserest associée à un équilibre perturbé entre les mécanismes oxydatifs et antioxydants (dont la défense enzymatique (catalase, glutathion peroxydase) et non enzymatique (glutathion)) dans les cellules de l'organisme [1]. La surproduction d'espèces réactives de l'oxygène (ROS), y compris les radicaux oxydants et les espèces à coquille fermée, est l'un des principaux mécanismes à l'origine de la formation du stress oxydatif. Cependant, l'effet biologique causé par les ROS dépend largement de la concentration, du temps d'exposition et de l'emplacement. Dans des conditions normales (faible concentration), les radicaux oxygène/azote peuvent jouer le rôle de messagers secondaires, mais à un niveau supérieur, ils peuvent commencer à réagir avec des structures biologiques, comme les membranes cellulaires [2]. Parmi toutes les espèces de ROS, un radical hydroxyle (HO.) est à l'origine deOxydatifstresseest connu pour jouer un rôle important dans une gamme de maladies, y compris les maladies cardiovasculaires. Des troubles du système sanguin ont été corrélés et/ou précédés de modifications de divers paramètres de l'hémostase et des biomarqueurs plasmatiques [1,3].

D'autre part, de nombreuses substances naturelles, telles que les polyphénols et les acides gras polyinsaturés, ont été identifiées comme de puissants antioxydants capables d'empêcher la formation et/ou de diminuer les espèces réactives de l'oxygène. Des composés possédant de telles propriétés se retrouvent dans de nombreux produits alimentaires et préparations pharmaceutiques d'origine végétale. Une alimentation enrichie en fruits et légumes frais et des thérapies antioxydantes à base d'antioxydants naturels sont donc largement recommandées car elles peuvent réduire le niveau deoxydantstresseret prévenir divers processus physiopathologiques [4,5]. Les polyphénols végétaux sont un groupe diversifié de métabolites secondaires, parmi lesquels les acides phénoliques occupent une place importante, car ils sont largement distribués et présentent une variété d'effets biologiques, tels qu'antimicrobiens, antioxydants et anti-inflammatoires.Phénylpropanoïdeglycosides(PPG) sont des dérivés esters de l'acide hydroxycinnamique et ils constituent la principale/seule classe de métabolites secondaires présents dans les plantes Orobanchaceae holoparasites, y compris Cistanche, Orobanche et Phelipanche spp. Plusieurs espèces de cette famille sont de sérieux ravageurs des cultures dont les agriculteurs veulent se débarrasser dans les champs (exemple de Phelipanche ramosa), peu sont utilisées en pharmacologie, alors que la plupart ont peu d'importance pour l'homme. Herba Cistanche est largement utilisé en médecine traditionnelle asiatique dans le traitement de l'insuffisance rénale et comme agent améliorant l'immunité et la mémoire, anti-âge et anti-fatigue [6]. Les analyses phytochimiques de divers groupes de recherche ont démontré quephénylpropanoïdeglycosides, tels que l'actéoside, l'échinacoside et le côté podium, sont l'un des principaux ingrédients actifs d'Herba Cistanche [7]. Une étude récente de plusieurs espèces d'orobanche trouvées en Pologne par Jedrejek et al. [8] a montré que ce matériel végétal a une composition qualitative similaire (dominance des PPG)(phénylpropanoïdeglycosides), de plus, il égale voire dépasse le Cistanche spp. en termes de teneur en substances actives [8]

La présente étude visait à évaluer le potentiel antiradicalaire et antioxydant, ainsi que l'influence sur les paramètres d'hémostase des trois extraits d'orobanche (Orobanche caryophyllacea – OC, Phelipanche Arenaria – PA, et P. ramosa – PR) riches en divers phénylpropanoïdes, comme ainsi que leurs constituants PPG uniques. La capacité antiradicalaire a été mesurée à l'aide d'acide 2,2′-azinobis-3-éthylbenzthiazoline-6-acide sulfonique/équivalent Trolox (ABTS/TE) et de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH ) essais. Laoxydantstresserdans le système de test plasmatique a été induite à l'aide d'un radical hydroxyle (H2O2/Fe), puis la peroxydation lipidique (test des espèces réactives à l'acide thiobarbiturique (TBARS)) et le niveau des groupes protéiques carbonyle et thiol ont été mesurés. Parmi les paramètres déterminés de l'hémostase figuraient : le temps de thromboplastine partielle activée (APTT), le temps de prothrombine (PT) et le temps de thrombine (TT).

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2. Matériels et méthodes

2.1. Produits chimiques

radical 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH), acide 2,2′-azinobis-3-éthylbenzthiazoline-6-sulfonique (ABTS), persulfate de potassium, 6- acide hydroxy-2,5,7,8-tétraméthylchromane-2-carboxylique (Trolox), diméthylsulfoxyde (DMSO), acide thiobarbiturique (TBA), acide formique (qualité LC-MS) et H2O2 ont été achetés chez Sigma-Aldrich (St. Louis, MO., USA). Le méthanol (grade gradient HPLC) et l'acétonitrile (grade LC-MS) ont été acquis auprès de Merck (Darmstadt, Allemagne). Dix composés phénylpropanoïdes testés dans ce travail, dont le 2′-O-acétylactéoside (97 %), le 2′-O-acétylpoliumoside (98 %), le 3-O-méthylpoliumoside (96 %), l'actéoside (99 %), arena inside (97 %), le crenatoside (98 %), le téniposide (99 %), le poliumoside (99 %), le tubuloside A (96 %) et le wiede mannioside D (96 %) ont été précédemment isolés par nous à partir de plantes ci-dessous. matériel [8]. La pureté des composés a été évaluée à l'aide d'une analyse UHPLC-PDA-MS. L'eau ultra pure a été préparée en interne à l'aide d'un système de purification d'eau Milli-Q (Millipore Co.). Les autres réactifs étaient de qualité analytique et fournis par des fournisseurs commerciaux nationaux.

2.2. Matériel végétal

Les plantes à fleurs de trois espèces d'orobanche, dont Orobanche Caryophyllaceae Sm., Phelipanche Arenaria Pomel et P. ramosa (L.) Pomel ont été identifiées par le prof. Renata Piwowarczyk (Université Jan Kochanowski, Kielce, Pologne) et collecté à partir d'une source naturelle en Pologne. Spécimens représentatifs (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), prairie xérothermique, parasite Galium boreale, mai 2014; P. Arenaria – Zwierzyniec (50.3652◦N, 22.5801◦E), prairie psammophile et jachère, parasite Artemisia campestris, juin 2014 ; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), champ, parasite Solanum Lycopersicum, septembre 2014) sont déposés à l'Herbier de l'Université Jan Kochanowski de Kielce (KTC). Le matériel végétal a été lyophilisé et finement broyé avant extraction.

2.3. Préparation d'extraits d'orobanche

Le matériel végétal en poudre (O. Caryophyllaceae (OC) - 2 g, P. Arenaria (PA) - 3 g et P. ramosa (PR) - 3 g) a été extrait avec 80 pour cent de MeOH à 40 ◦C et 1500 psi (pression de solvant ) à l'aide d'un extracteur de solvant accéléré ASE 200 (Dionex, Sunnyvale, CA, USA). Les extraits ont été évaporés et lyophilisés (lyophilisateur Gamma 2–16 LSC, Christ, Allemagne). L'efficacité d'extraction pour l'OC, le PA et le PR était de 55 %, 37 % et 43 % en poids de la matière végétale, respectivement. En raison de la teneur élevée en glucides (données non présentées), les extraits bruts ont été purifiés davantage par extraction en phase solide (SPE) sur micro-colonne Oasis HLB (500 mg; Waters, Milford, MA, USA). Les sucres ont été éliminés avec 1 % de MeOH, puis les composés d'intérêt ont été élués avec 80 % de MeOH. Après élimination du solvant, les extraits OC, PA et PR ont été lyophilisés (lyophilisateur Gamma 2–16 LSC) et les rendements de purification SPE étaient de 53 % (OC), 67 % (PA) et 51 % (PR) .

2.4. Caractéristiques phytochimiques des extraits d'orobanche

Des analyses qualitatives et quantitatives d'extraits d'orobanche ont été effectuées à l'aide d'un système ACQUITY UPLC (Waters) connecté à un détecteur à barrette de photodiodes (PDA) et à un spectromètre de masse quadripolaire en tandem (TQD-MS/MS). Les extraits OC, PA et PR lyophilisés ont été dissous dans 50 % de méthanol à une concentration de 0,50 mg/mL, puis chromatographiés sur la colonne BEH C18 (1{ {21}}0 × 2,1 mm, 1,7 µm, Waters). Les conditions chromatographiques étaient les suivantes : température du four – 25 ◦C, gradient linéaire 10→25 % de la phase mobile B (0,1 % d'acide formique dans l'acétonitrile) dans la phase mobile A (0,1 % d'acide formique dans H2O) sur 12 min, débit – 0,4 mL/min, volume d'injection – 2 μL, plage UV – 190–490 nm (résolution 3,6 nm). L'analyse MS a été réalisée en mode ions négatifs avec ionisation par électrospray (ESI), en utilisant les paramètres suivants : plage de balayage 100–1200 m/z ; tension capillaire 2,8 kV ; tension du cône 35 V ; température source 150 ◦C; température de désolvatation 450 ◦C; débit de gaz de désolvatation 900 L/h, et débit de gaz conique 100 L/h. L'acquisition et le traitement des données ont été effectués à l'aide du logiciel Waters MassLynx 4.1.

Les pics de glycoside de phénylpropanoïde (PPG) ont été identifiés par comparaison des données LC-MS obtenues avec celles de composés précédemment isolés [8]. Quantification des PPG(phénylpropanoïdeglycosides)dans des extraits d'orobanche était basée sur la méthode UPLC-UV avec détection à 330 nm, et un étalonnage standard externe utilisant l'actéoside (Sigma-Aldrich, supérieur ou égal à 99 %, HPLC) comme standard de groupe. Une courbe d'étalonnage linéaire a été préparée à six concentrations dans la plage de 1 à 200 ug/mL et a montré une bonne linéarité (R2 supérieur ou égal à 0,999). Les résultats quantitatifs représentent la valeur moyenne ± SD de trois injections et ont été exprimés en milligrammes d'équivalents d'actéoside (eq) par gramme d'extrait (mg d'actéoside eq/g).

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2.5. Activité antiradicalaire in vitro

2.5.1. Test de piégeage des radicaux ABTS

Le test antiradicalaire ABTS a été réalisé selon la méthode décrite par Kontek et al. [9], avec de légères modifications comme suit : 20 % de MeOH ont été utilisés pour préparer les réactifs (ABTS 7 mM et persulfate de potassium 4,9 mM) ; les solutions d'extraits d'OC, PA et PR, à quatre niveaux de concentration dans la plage de 100 à 400 ug/mL, et les solutions de Trolox, à six niveaux de concentration dans la plage de 10 à 250 ug/mL, ont été préparées avec 50 % MeOH. La proportion de l'échantillon à l'ABTS plus la solution de travail était de 1:25 (v/v). L'absorbance à 734 nm a été mesurée après 30 min d'incubation dans l'obscurité à l'aide d'un spectrophotomètre UV-vis (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA).

L'inhibition de l'absorbance (pourcentage) a été calculée comme suit : [(Abscontrol–Absample)/Abscontrol] ×100.

Les équivalents Trolox (TE) des extraits d'orobanches ont été calculés à l'aide de la formule TE {{0}} échantillon/standard, où m est la pente des courbes en ligne droite (inhibition de l'absorbance par rapport à la concentration). La valeur TE de l'échantillon décrit son activité normalisée contre Trolox (TEstandard =1.0). Les valeurs d'IC50 des extraits OC, PA, PR et du Trolox ont été atteintes expérimentalement, puis ont été calculées à partir de leurs courbes linéaires (absorbance inhibition vs concentration) et sont exprimées en ug/mL.

Le test a été réalisé en triple exemplaire et les résultats sont présentés sous forme de moyennes ± écarts-types (SD).

2.5.2. Essai de piégeage des radicaux DPPH

Le test antiradicalaire DPPH a été réalisé selon la méthode décrite par Jedrejek et al. [8] et Brand-Williams et al. [10], avec de légères modifications comme suit : les solutions d'extraits OC, PA et PR, à quatre niveaux de concentration dans la plage de 50 à 250 ug/mL, et les solutions de Trolox, à six niveaux de concentration dans la plage de 10 − 250 ug/mL, ont été préparés avec 50 % de MeOH. La proportion d'échantillon à DPPH était de 1:19 (v/v). L'absorbance à 517 nm a été mesurée après 30 min d'incubation dans l'obscurité à l'aide d'un spectrophotomètre UV-vis (Evolution 260 Bio).

L'inhibition de l'absorbance (pourcentage) a été calculée comme suit : [(Abscontrol–Absample)/Abscontrol] ×100.

Les valeurs Trolox Equivalent (TE) et IC50 des échantillons de test ont été calculées de la même manière que dans le test ABTS (Section 2.5.1). Le test a été réalisé en triple exemplaire et les résultats sont présentés sous forme de moyennes ± SD.

2.6. Solutions mères de composés végétaux testés et d'extraits pour des expériences avec du plasma humain

Les solutions mères des composés testés et des extraits de plantes ont été préparées dans 50 % de DMSO. La concentration finale de DMSO dans les échantillons testés était inférieure à 0,05 % et ses effets ont été déterminés dans toutes les expériences.

2.7. Isolement du plasma humain

Du sang humain, ou plasma, a été obtenu de six donneurs réguliers (hommes et femmes non fumeurs) à une banque de sang (Lodz, Pologne) et à un centre médical (Lodz, Pologne). Le sang a été prélevé sous forme de solution de CPD (citrate/phosphate/dextrose ; 9 :1 ; v/v sang/CPD) ou de solution de CPDA (citrate/phosphate/dextrose/adénine ; 8,5 :1 ; v/v ; sang/CPDA). Les donneurs n'avaient pris aucun médicament ou substance addictive (y compris le tabac, l'alcool et la supplémentation en antioxydants) pendant au moins deux semaines avant un don. Notre analyse des échantillons de sang a été effectuée conformément aux directives de la Déclaration d'Helsinki pour la recherche humaine et approuvée par le Comité d'éthique de la recherche en expérimentation humaine de l'Université de Lodz. Le plasma a été préparé par centrifugation de sang humain frais à 4500 x g pendant 25 min à température ambiante. La concentration en protéines a été calculée en mesurant l'absorbance des échantillons testés à 280 nm, selon la procédure de Whitaker et Granum [11].

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2.8. Marqueurs du stress oxydatif dans le plasma humain

2.8.1. Mesure de la peroxydation lipidique

La peroxydation des lipides plasmatiques a été quantifiée en mesurant la concentration de substances réactives à l'acide thiobarbiturique (TBARS). La concentration de TBARS a été calculée à l'aide du coefficient d'extinction molaire (ε =156,000 M− 1cm− 1). La méthode est décrite plus en détail ailleurs [12,13].

2.8.2. Mesure du groupe carbonyle

Le niveau de groupes carbonyle a été calculé à l'aide du coefficient d'extinction molaire (ε=22,000 M− 1 cm− 1) et a été exprimé en nmol de groupes carbonyle/mg de protéine plasmatique, selon Bartosz [13 ] et Levine et al. [14].

2.8.3. Détermination du groupe thiol

La teneur en groupes thiol dans les protéines plasmatiques a été mesurée par spectrophotométrie à l'aide d'un lecteur de microplaques SPECTROstar Nano (BMG LABTECH, Allemagne) par absorbance à 412 nm avec de l'acide nitrobenzoïque 5,5′-dithiol-bis-(2-). La méthode est décrite plus en détail ailleurs [15–17].

2.9. Paramètres de l'hémostase

2.9.1. La mesure du temps de prothrombine (TP)

Le PT a été déterminé par coagulomètre à l'aide d'un analyseur de coagulation optique (modèle K-3002, Kselmed, Grudziadz, Pologne) selon Malinowska et al. [18].

2.9.2. La mesure du temps de thrombine (TT)

Le TT a été déterminé coagulométriquement à l'aide d'un analyseur de coagulation optique (modèle K-3002, Kselmed, Grudziadz, Pologne), selon la méthode décrite par Malinowska et al. [18].

2.9.3. La mesure du temps de thromboplastine partielle activée (APTT)

L'APTT a été déterminé coagulométriquement à l'aide d'un analyseur de coagulation optique K-3002 (Kselmed, Grudziadz, Pologne) selon Malinowska et al. [18].

2.10. L'analyse des données

Le test Q-Dixon a été réalisé pour éliminer les données incertaines. Les données ont été testées pour la distribution normale avec le test de Shapiro-Wilk et l'égalité de variance avec le test de Levene. Des différences statistiquement significatives ont été identifiées à l'aide de l'ANOVA, suivie du test de comparaisons multiples de Tukey ou du test de Kruskal-Wallis. Les comparaisons ont été considérées comme significatives à p < 0.05.="" les="" valeurs="" sont="" présentées="" sous="" forme="" de="" moyennes="" ±="">

3. Résultats et discussion

Dix précédemment isolés par nousphénylpropanoïdeglycosides[8], y compris le 2′-O-acétylactéoside, le 2′-O-acétylpoliumoside, le 3-O-méthylpoliumoside, l'actéoside, l'intérieur de l'arène, le crénatoside, le phéliposide, le côté podium, le tubuloside A et le wiedemannioside D, ainsi que trois des extraits d'orobanche (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) et P. ramosa (PR)) sont actuellement étudiés pour l'atténuationoxydantstresseret des propriétés anticoagulantes dans un système de plasma humain. Les structures chimiques des phénylpropanoïdes testés sont présentées à la Fig. 1 et, comme on peut le voir, elles sont toutes construites selon un schéma similaire, avec les mêmes sous-unités/similaires : hydroxytyrosol, monosaccharides (glucose, rhamnose et/ou xylose) et l'acide hydroxycinnamique. La plupart des composés PPG examinés sont remplacés par de l'acide caféique, mais celui-ci peut être remplacé par de l'acide coumarique ou férulique.

Outre les composés PPG individuels, trois extraits d'orobanche - OC, PA et PR, qui sont des mélanges de plusieurs PPG(phénylpropanoïdeglycosides)et qui servaient auparavant de matériau de départ pour l'isolement du composé, ont également été inclus dans l'étude biologique. Une autre raison de la sélection de trois espèces différentes était la grande différence de profil phytochimique entre elles, comme on peut le voir sur la Fig. 2. Une comparaison plus détaillée des extraits OC, PA et PR, y compris les données quantitatives, est présentée dans le tableau 1. L'actéoside était le principal constituant de l'extrait d'O. Caryophyllaceae (690 mg/g), le téniposide et l'arène à l'intérieur dominaient chez P. Arenaria (ensemble 550 mg/g), tandis que le poliumoside et son dérivé acétylé étaient les métabolites les plus importants dans Extrait de P. ramosa (ensemble 640 mg/g). Les extraits examinés différaient également dans la teneur globale en phénylpropanoïdes, la quantité la plus élevée a été trouvée en OC (810 mg/g), un peu plus faible en PR (795 mg/g) et plus faible en PA (685 mg/g). De plus, il convient de noter que la présence de PPG avec des fragments autres que caféoyle, tels que le coumaroyle ou le féruloyle, n'a été détectée que dans l'extrait de P. ramosa, où ces composés constituaient environ un sixième du total des PPG (environ 120 mg/ g) (tableau 1).

Des études antérieures sur l'activité antiradicalaire dephénylpropanoïdeglycosidespar Heilmann et al. [19] et Jedrejek et al. [8], dont environ 30 PPG différents(phénylpropanoïdeglycosides)tels que l'actéoside, l'isoactéoside et le crénatoside, ont révélé sa forte relation avec la structure des groupements acyle (acide phénolique et tyrosol). En général, la modification ou la substitution de la fraction catéchol de l'unité acyle a entraîné une diminution significative de l'activité de piégeage contre les espèces réactives de l'oxygène (ROS) et le radical DPPH. Dans la présente étude, le potentiel antiradicalaire in vitro de trois extraits d'orobanche (OC, PA et PR) a été examiné avec des tests ABTS et DPPH, et les résultats ont été comparés entre eux ainsi qu'avec l'activité des composants phénylpropanoïdes individuels mesurés dans notre précédente étude [8]. Les résultats ont été exprimés en équivalents Trolox (TE) et en valeurs IC50 (tableau 2). En général, les trois extraits étaient de bons piégeurs des radicaux ABTS et DPPH, mais des différences ont également été observées parmi les échantillons testés (le TE estimé était de l'ordre de 0.5–0.7 ; 1,0 était l'équivalent de Trolox). L'activité de piégeage antiradicalaire des échantillons était dans l'ordre suivant : Trolox > OC > PA > PR. L'extrait d'Orobanche Caryophyllaceae (IC50=155–275 µg/mL) avait plus de 20 % d'activité en plus que l'extrait de Phelipanche ramosa (IC50=200–320 µg/mL).

L'activité de piégeage des radicaux la plus élevée rapportée de l'extrait d'OC peut s'expliquer par les PPG les plus élevés(phénylpropanoïdeglycosides)contenu dans cet échantillon, ainsi qu'à l'apport d'actéoside, son ingrédient dominant, qui selon les recherches précédentes [8,19] est l'un des piégeurs de radicaux libres les plus puissants parmi les métabolites de ce groupe (TEDPPH=0 .87 ; [4]). Cependant, compte tenu de la relation mutuelle entre l'activité antiradicalaire et la teneur en phénylpropanoïdes dans les extraits OC, PA et PR, aucune corrélation simple n'a été trouvée entre ces deux facteurs (r < 0.5),="" indiquant="" un="" apport="" significatif="" de="" profil="" qualitatif.="" ceci="" est="" principalement="" lié="" à="" l'extrait="" de="" p.="" ramosa,="" qui="" malgré="" le="" niveau="" élevé="" de="">(phénylpropanoïdeglycosides)({{0}}.8 g/g) a été caractérisée par l'activité biologique la plus faible parmi les échantillons testés (TE ~ 0.5). L'extrait de PR, comme mentionné ci-dessus, était le seul échantillon à posséder les phénylpropanoïdes avec des acides coumariques ou féruliques, des substances dépourvues de groupement catéchol à cycle B, qui auraient un potentiel antioxydant réduit. Quatre composés PPG contenant de l'acide caféique modifié, dont le 3-O-méthylpoliumoside, le ramose A et le wiedemannioside D, que nous avons testés auparavant avaient un TEDPPH d'environ 0,3 [8]. Ainsi, les résultats actuels sont conformes et confirment les découvertes des précédentes expériences antiradicalaires in vitro sur les phénylpropanoïdes.

Comme Chen et al. [20] décrit, il est associé à une plus grande capacité de donneur d'hydrogène ou de stabilisation du radical par divers groupes fonctionnels d'un mélange de composés. Plusieurs éléments structuraux ont été identifiés comme renforçant l'activité antioxydante directe des polyphénols, en particulier ceux associés au nombre et à la position des groupes hydroxyle. On pense que l'activité de piégeage des radicaux libres augmente avec le nombre croissant de groupes -OH. Cependant, la position de ces groupements, dans une molécule, a un impact encore plus important sur l'activité exercée. Les composés puissants relativement stables sont ceux qui possèdent une fraction 3,4-dihydroxy dans leurs structures, ainsi que ceux qui possèdent plus de deux groupes hydroxyle [21]. La structure chimique de la substance antioxydante permet de comprendre le mécanisme de la réaction antioxydante. Lopez-Munguia et al. [22] sur la base des calculs de la théorie fonctionnelle de la densité (DFT) a déterminé que les PPG(phénylpropanoïdeglycosides)Le mécanisme antioxydant procède par un transfert séquentiel d'électron unique par perte de protons (SPLET). Cependant, Li et al. [23] tentent d'explorer les mécanismes des antioxydants phénoliques phénylpropanoïdes, ont conclu que les PPG (actéoside, forsythoside B et poliumoside) peuvent être impliqués dans de multiples voies pour exercer l'action antioxydante, renforçant le rôle des résidus de sucre.

Des études ont montré que les antioxydants d'origine végétale sont des modulateurs efficaces de l'hémostase dans les maladies cardiovasculaires [24-26]. Diverses plantes utilisées en médecine traditionnelle contiennent des niveaux importants de PPG [27,28]. De plus, les PPG(phénylpropanoïdeglycosides)sont connus pour avoir une gamme d'activités biologiques, y compris des propriétés anti-inflammatoires, anti-néphritiques et anti-hépatoxiques [29-33].

Dans leur récente étude, Jedrejek et al. [8] ont décrit l'isolement des PPG(phénylpropanoïdeglycosides)de trois orobanches polonais et évalué leur activité antioxydante par le test DPPH. Sur cette base, la présente étude évalue si les dix PPG sélectionnés isolés de ces plantes pourraient réduireoxydantstresserdans le plasma humain traité avec un oxydant biologique fort, à savoir le donneur de radicaux hydroxyle H2O2/Fe, et moduler les propriétés de coagulation du plasma in vitro. Les propriétés antioxydantes de dix PPG isolés ont été déterminées selon des paramètres sélectionnés deoxydantstresser: niveau de TBARS en tant que marqueur de la peroxydation lipidique, ainsi que les niveaux de groupe carbonyle et de groupe thiol, en tant que marqueurs de dommages oxydatifs aux protéines.

Les niveaux de peroxydation lipidique plasmatique et de carbonylation des protéines dans le plasma induits par H2O2/Fe ont été significativement réduits en présence de huit composés testés, à savoir. actéoside, crénatoside, 2′-O-acétylactéoside, phéliposide, arena inside, tubuloside A, poliumoside et 3- O-méthylpolimuoside, à toutes les concentrations testées (1, 5 et 50 µg/mL) ; cependant, aucun effet n'a été observé pour deux des composés testés, à savoir. 2′-O-acétylpoliumoside et wiedemannioside D, ou l'un des extraits testés à n'importe quelle concentration (1, 5 et 50 µg/mL). De plus, aucun des composés testés ou des extraits testés ne protégeait le plasma contre l'oxydation du groupe thiol induite par H2O2/Fe dans les protéines (Fig. 3–5). Cependant, les extraits testés peuvent être à l'origine de composés aux propriétés biologiques diverses.

Pour la première fois, les résultats de la présente étude indiquent que huit des PPG testés(phénylpropanoïdeglycosides)démontrer un potentiel antioxydant dans le plasma humain en présence d'espèces réactives exogènes de l'oxygène en inhibant la peroxydation des lipides et la carbonylation des protéines dans le plasma traité avec H2O2/Fe. De plus, le 2′-O-acétylpoliumoside et le wiedemannioside D n'ont pas présenté un tel effet. En général, nos résultats sont cohérents avec les expériences in vitro précédentes sur les PPG. Heilman et al. [19] et Jedrejek et al. [8] rapportent une corrélation entre la structure chimique des PPG et leurs activités. Propriétés antioxydantes des PPG(phénylpropanoïdeglycosides)semblent être principalement liés à la structure de leurs fractions acyle, c'est-à-dire l'unité acide phénolique et phénylpropanoïde, y compris la présence et/ou la modification de la fraction catéchol. Par exemple, le wiedemannioside D s'est avéré perdre son potentiel antioxydant vis-à-vis du plasma traité avec H2O2/Fe suite au remplacement de sa fraction caféoyle par une fraction féruloyle.

Les modifications du processus de coagulation résultent souvent deoxydantstresser; ces changements peuvent moduler les fonctions du système cardiovasculaire et peuvent conduire au développement de maladies cardiovasculaires [1]. Sur les dix composés végétaux et trois extraits de plantes testés dans la présente étude, le tubuloside, le côté podium et le 3- O-méthylpoliumoside et tous les extraits testés ont démontré qu'ils prolongent considérablement le temps de thrombine à toutes les concentrations testées, à savoir. 1, 5 et 50 µg/mL (Fig. 6B). Cependant, aucun de ces extraits, ni aucun des composés testés, n'a modifié le PT ou l'APTT (Fig. 6A et C).

Fig. 6. Effets des composés testés (actéoside, crénatoside, 2′-O-acétylactéoside, phéliposide, arénarioside, tubuloside A, poliumoside, 3-O-méthylpoliumoside, 2′-O-cétylpolimuoside, wiedemannioside D) et plantes extraits (extrait de P. arenaria - PA, extrait de P. ramosa - PR et extrait d'O. caryophyllacea - OC) (1–50 µg/mL) sur des paramètres hémostatiques sélectionnés du plasma : PT (A), TTn (B) et APTT (C). Les données représentent les moyennes ± SEM de six expériences indépendantes.n* p < 0.05="" (vs.="" contrôle),="" ns="" –="" p=""> 0,05 (vs. contrôle).

Le tableau 3 compare les effets des PPG (5 µg/mL) sur les biomarqueurs deoxydantstresserdans le plasma traité avec H2O2/Fe et leur influence sur la coagulation. Huit des PPG testés(phénylpropanoïdeglycosides)potentiel antioxydant démontré uniquement dans le plasma humain traité ; cependant, trois PPG testés se sont révélés posséder à la fois des propriétés antioxydantes et un potentiel anticoagulant. Fait intéressant, les résultats du test DPPH ne coïncident pas avec ceux obtenus dans le modèle biologique utilisant du plasma humain traité avec H2O2/Fe : le potentiel antioxydant des extraits testés peut être bloqué par certains composés présents dans le plasma.

En conclusion, nos résultats actuels apportent un nouvel éclairage sur le potentiel antioxydant et les propriétés anticoagulantes des PPG.(phénylpropanoïdeglycosides). Il apparaît que la structure des PPG(phénylpropanoïdeglycosides), en particulier la présence de fractions acyle et catéchol, est principalement liée à leurs propriétés antioxydantes et anticoagulantes. Certains PPG pourraient bien avoir le potentiel pour le traitement des maladies cardiovasculaires associées àoxydantstresser. Cependant, d'autres expériences sont nécessaires pour déterminer les concentrations de ces composés nécessaires pour les modèles in vivo.

Déclaration de conflit d'intérêts

Les auteurs déclarent qu'ils n'ont pas d'intérêts financiers concurrents ou de relations personnelles connus qui auraient pu sembler influencer le travail rapporté dans cet article.

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