Abstrait

Objectif:Étudier le mécanisme moléculaire par lequelFormule Bushen Kaixuan Tongluo à base de Cistancheexerce un effet protecteur rénal chez les souris atteintes d'insuffisance rénale diabétique (DKD) en régulant la voie de signalisation de l'adénosine monophosphate cyclique (AMPc).

Méthodes :Trente souris db/db mâles exemptes d'agents pathogènes spécifiques (SPF) ont été nourries de manière adaptative pendant 3 semaines. Les souris présentant des taux de glucose sanguin aléatoires dans la veine de la queue supérieurs ou égaux à 11,1 mmol·L⁻¹ et un rapport microalbumine/créatinine urinaire supérieur ou égal à 30 mg·g⁻¹ ont été considérées comme modélisées avec succès. Les souris modélisées ont été réparties au hasard en cinq groupes (n=6 par groupe) : groupe modèle, groupes de formule Bushen Kaixuan Tongluo à doses faibles, moyennes et élevées (7, 14 et 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) et un groupe irbésartan (20 mg·kg⁻¹·d⁻¹). Six souris db/m ont été utilisées comme groupe vierge.

Le traitement a duré 12 semaines par administration intragastrique. Les conditions générales, le poids corporel et les indicateurs de la fonction rénale ont été surveillés. Après l'intervention, la glycémie à jeun (FBG) a été mesurée. Un analyseur biochimique automatique a été utilisé pour évaluer la créatinine sérique (SCr), l'azote uréique du sang (BUN), la microalbumine urinaire (uALB), le rapport albumine-créatinine (ACR), l'aspartate aminotransférase (AST), l'alanine aminotransférase (ALT), le cholestérol total (TC), les triglycérides (TG), la leptine (LEP), les protéines sériques glycosylées (GSP) et l'insuline (INS).

L'histopathologie du tissu rénal a été évaluée par coloration HE, PAS et trichrome de Masson. L'immunohistochimie (IHC) a détecté des expressions de la protéine kinase A (PKA) et de la protéine de liaison aux éléments de réponse AMPc (CREB). Le Western blot a analysé les niveaux de PKA, de PKA phosphorylée (p-PKA), de CREB, de CREB phosphorylée (p-CREB) et de Bcl-2. La PCR en temps réel a été utilisée pour évaluer les expressions d'ARNm de PKA, CREB et Bcl-2.

Résultats:Comparé au groupe vierge, le groupe modèle a montré une léthargie, une activité réduite et une augmentation significative du poids corporel (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Par rapport au groupe modèle, les groupes traités avec la formule ont montré une amélioration de leur état général et une tendance à la baisse du poids corporel. BUN, uALB, ACR, TC, GSP et INS ont été significativement réduits (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

L'analyse histopathologique a révélé que le groupe modèle présentait des caractéristiques DKD classiques telles que l'épaississement de la membrane basale glomérulaire, l'expansion de la matrice mésangiale et le dépôt de collagène dans le tubulo-interstitium. Ces changements pathologiques ont été atténués dans tous les groupes de traitement.

Les résultats de l'IHC ont montré une diminution significative des expressions de p-PKA et de p-CREB dans le groupe modèle (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Le Western blot a montré que les niveaux de p-PKA/PKA, p-CREB/CREB et Bcl-2 étaient significativement réduits dans le groupe modèle (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

La PCR en temps réel a confirmé la régulation négative des ARNm de PKA, CREB et Bcl-2 dans le groupe modèle (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Conclusions :LeFormule Bushen Kaixuan Tongluo à base de Cistancheaméliore la fonction hépatique et rénale, corrige les troubles du métabolisme lipidique et glucose chez la souris db/db. Son effet protecteur rénal est associé à une régulation positive de laVoie de signalisation AMPc/PKA/CREB, qui réduit la fibrose rénale et le stress oxydatif, protégeant ainsi la fonction rénale.

 

 

 

 

Formule Bushen Kaixuan Tongluo à base de Cistanche pouraméliorer la fonction hépatique et rénale

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Mots-clés

Maladie rénale diabétique (DKD);
Formule Bushen Kaixuan Tongluo ;
Cistanche;
Voie de signalisation AMPc ;
Médecine Traditionnelle Chinoise (MTC)

 

Remède à base de cistanche

 

Arrière-plan

La maladie rénale diabétique (DKD), l'une des complications microvasculaires les plus graves du diabète, est l'une des principales causes d'insuffisance rénale terminale (IRT) dans le monde. Sa prévalence croissante pose un défi important aux systèmes de santé publique. Les caractéristiques de la DKD comprennent une expansion progressive de la matrice mésangiale glomérulaire, une fibrose tubulo-interstitielle et une protéinurie persistante. La pathogenèse implique des interactions complexes entre les troubles du métabolisme du glucose et des lipides, le stress oxydatif et l'activation anormale de diverses voies de signalisation.

Les traitements de première intention actuels comprennent principalement les inhibiteurs du système rénine-angiotensine (RAS), qui aident à réduire l'hypertension glomérulaire et à retarder la protéinurie précoce. Cependant, ils sont moins efficaces chez les patients présentant une fibrose tubulo-interstitielle établie, 30 à 40 % évoluant vers une IRT.

Par conséquent, explorer de nouveaux mécanismes de DKD et trouver des cibles thérapeutiques efficaces et sûres présente un intérêt clinique et scientifique urgent. La médecine traditionnelle offre une régulation multi-cibles avec moins d’effets secondaires, ce qui la rend plus adaptée à une utilisation à long terme dans les maladies rénales chroniques. LeFormule Bushen Kaixuan Tongluo à base de Cistancheest un mélange de plantes validé empiriquement pour la DKD, démontré lors d'essais cliniques antérieurs pour améliorer les symptômes et retarder la progression de la maladie.

Cependant, son mécanisme moléculaire, en particulier son interaction avec les principales voies de signalisation, reste mal compris. Les preuves suggèrent queAMPc/PKA/CREBCette voie peut atténuer la fibrose rénale, mais les études connexes sont limitées. Cette étude se concentre sur cette voie pour élucider comment celaFormule à base de cistancheaméliore le DKD.

 

Matériels et méthodes

1. Animaux

30 souris mâles db/db (âgées de 7 semaines, grade SPF, poids corporel : 37,58 ± 0,62 g)

6 souris db/m du même âge (poids corporel : 24,38 ± 0,35 g)

Fournisseur : Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Licence : SCXK (Su) 2020-0009 et SYXK (Jing) 2020-0033

Approbation éthique : BUCM2024041506-2090

2. Composition à base de plantes

La formule Bushen Kaixuan Tongluo comprend (en grammes) :
Cistanche(remplace l'astragale cru) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosa laevigata 20, Euryale ferox (frit) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Toutes les herbes ont été authentifiées par un pharmacien agréé et préparées par décoction aqueuse, réduites sous vide et séchées par pulvérisation pour former une poudre. La concentration finale était de 1,43 g·mL⁻¹ d'herbes brutes.

3. Réactifs et instruments

(Voir le texte original pour les listes détaillées.)

 

Conception expérimentale

Évaluation du modèle

Après 3 semaines d'alimentation adaptative, les souris avec une glycémie aléatoire supérieure ou égale à 11,1 mmol·L⁻¹ et un ACR supérieur ou égal à 30 mg·g⁻¹ ont été considérées comme des modèles DKD réussis.

Regroupement et dosage

Groupe vierge (db/m) : eau

Groupe modèle : eau

Faible dose : 7 g·kg⁻¹·j⁻¹

Dose moyenne : 14 g·kg⁻¹·j⁻¹

Dose élevée : 28 g·kg⁻¹·j⁻¹

Groupe Irbésartan : 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Durée : 12 semaines sous alimentation et boisson gratuites.

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Collecte et analyse d'échantillons

Urine:Recueilli sur 24 heures, centrifugé et conservé à –20 degrés

Sang:Recueilli par extraction orbitale, centrifugé et stocké à –80 degrés

Rognons:Divisé pour la pathologie (fixée au formol), les protéines (azote liquide) et l'expression des gènes (congelés)

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Méthodes de détection

Analyse biochimique :SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP et uALB

Histopathologie :Coloration HE, PAS, Masson

IHC :Expression des protéines p-PKA et p-CREB

Western Blot :p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -actine

PCR en temps réel :Expression de l'ARNm de PKA, CREB et Bcl-2

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Tableau 1. Séquences d'amorces

Gène	Amorce avant (5′ – 3′)	Amorce inverse (5′–3′)	Longueur (pb)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95