ABSTRAIT

Objectifs:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider est une espèce répandue dans le monde entier, qui est également fréquemment cultivée à des fins ornementales. Des études antérieures ont révélé que les fruits de M. pomifera sont riches en isoflavonoïdes prénylés, présentent des activités biologiques remarquables et présentent des avantages probables, en particulier lorsqu'ils sont appliqués par voie topique. Considérant que les composés phénoliques sont des sources essentielles dans le développement de produits cosmétiques anti-âge, cette étude a étudié le potentiel anti-âge de l'extrait méthanolique (MPM) à 80 % de M. pomifera en évaluant l'activité inhibitrice des enzymes antioxydantes et extracellulaires dégradant la matrice.

Le glycoside de cistanche peut également augmenter l'activité de la SOD dans les tissus cardiaques et hépatiques et réduire considérablement la teneur en lipofuscine et en MDA dans chaque tissu, piégeant efficacement divers radicaux réactifs de l'oxygène (OH-, H₂O₂, etc.) et protégeant contre les dommages à l'ADN causés par des radicaux OH. Les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche ont une forte capacité de piégeage des radicaux libres, une capacité de réduction supérieure à la vitamine C, améliorent l'activité de la SOD dans la suspension de sperme, réduisent la teneur en MDA et ont un certain effet protecteur sur la fonction de la membrane du sperme. Les polysaccharides Cistanche peuvent améliorer l'activité de la SOD et du GSH-Px dans les érythrocytes et les tissus pulmonaires de souris sénescentes expérimentalement causées par le D-galactose, ainsi que réduire la teneur en MDA et en collagène dans les poumons et le plasma et augmenter la teneur en élastine, ont un bon effet de piégeage sur le DPPH, prolonge le temps d'hypoxie chez les souris sénescentes, améliore l'activité de la SOD dans le sérum et retarde la dégénérescence physiologique du poumon chez les souris expérimentalement sénescentes Avec la dégénérescence morphologique cellulaire, des expériences ont montré que Cistanche a la bonne capacité antioxydante et a le potentiel d'être un médicament pour prévenir et traiter les maladies du vieillissement cutané. Dans le même temps, l'échinacoside dans Cistanche a une capacité significative à piéger les radicaux libres DPPH et a la capacité de piéger les espèces réactives de l'oxygène et d'empêcher la dégradation du collagène induite par les radicaux libres, et a également un bon effet réparateur sur les dommages causés par les anions des radicaux libres thymine.

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Matériels et méthodes:Pour cette étude, le potentiel inhibiteur de 80 % de MPM contre différentes enzymes associées au processus de vieillissement a été évalué. Étant donné le rôle sans équivoque du stress oxydatif dans le vieillissement, des tests antioxydants in vitro ont également été utilisés. De plus, l'osajin a été déterminé comme le principal isoflavonoïde bioactif de l'échantillon par analyse par chromatographie en couche mince à haute performance.

Résultats:Les résultats des dosages d'antioxydants mécanistiquement différents ont montré le potentiel antioxydant significatif de l'extrait. Le potentiel d'inhibition du MPM contre les enzymes hyaluronidase, collagénase et élastase, qui sont directement liées à l'accélération du processus de vieillissement, a été étudié et les résultats ont révélé que le MPM inhibait explicitement les enzymes ci-dessus. Le MPM avait une teneur unique en phénols et en flavonoïdes ; 113,92 ± 2,26 mg équivalent acide gallique/g et 66,41 ± 0.74 mg QE/g, respectivement. Lorsque les tests de capacité antioxydante totale ont été pris en compte, il est possible de suggérer que le MPM est un agent anti-âge prometteur.

Conclusion:En conséquence, cette étude révèle que les extraits de fruits de M. pomifera ont un potentiel anti-âge significatif et peuvent être utilisés à cette fin.

Mots clés:Maclura pomifera, anti-âge, antioxydants, HPTLC, osajin

INTRODUCTION

De même, tous les organes, y compris la peau humaine, subissent divers changements physiologiques avec l'âge.1 Deux classes de vieillissement existent : le vieillissement intrinsèque est contrôlé par la génétique et le vieillissement extrinsèque est le résultat naturel de modifications physiologiques dues aux effets néfastes de facteurs environnementaux tels que les ultraviolets (UV). ) les radiations, les toxines chimiques et le tabagisme.1,2 La dégradation de la structure vasculaire et glandulaire, la perte de tissu fibreux et la diminution de la régénération cellulaire sont des facteurs fondamentaux du vieillissement,3 qui entraînent une augmentation de la dégénérescence tissulaire, des rides et une diminution de la matrice extracellulaire (ECM ).4

En tant que plus grand organe, la peau a plusieurs rôles tels que la protection, la régulation de la température corporelle et la détection des sens.5 La peau se compose de l'épiderme, du derme et du tissu sous-cutané et constitue la première barrière entre le corps humain et l'extérieur. environnement.6,7 L'ECM est la plus grande unité du derme et soutient la croissance et l'élasticité en présentant un échafaudage structurel.8 Le collagène, l'élastine et la fibronectine, qui sont formés par les fibroblastes dermiques, constituent l'ECM et sont fusionnés avec des protéoglycanes.5 Le collagène est une protéine de base comprenant environ 25-35 pour cent de toute la teneur en protéines du corps et se trouve dans l'espace extracellulaire de divers types de tissus conjonctifs animaux.3 L'une des principales causes du vieillissement cutané et de la formation des rides est l'altération du collagène structure.1 L'élastine est une protéine qui confère une élasticité physiologique unique à la peau et est présente dans plusieurs tissus conjonctifs.6 L'hydratation de la peau et le maintien de la peau lisse, humide et lubrifiée sont des facteurs importants qui préviennent le vieillissement cutané, et un le glycosaminoglycane (GAG), l'acide hyaluronique, joue un rôle essentiel dans ces activités.8 Ces constituants essentiels sont dégradés par les enzymes hyaluronidase, collagénase et élastase, entraînant ainsi une accélération du vieillissement cutané. De plus, l'exposition aux micro-organismes, à la pollution, aux rayonnements ionisants, aux produits chimiques et aux toxines entraîne la formation d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) et ses conséquences nocives accélèrent le vieillissement cutané.9 Les ROS peuvent initier des voies moléculaires complexes et, par conséquent, la collagénase, l'élastase , et l'activité de l'hyaluronidase peut être augmentée, entraînant une dégradation détectable de l'ECM et des modifications de la texture de la peau.

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider appartient aux Moraceae ou à la famille des mûriers et est également connu sous le nom d'oranger des osages, cultivé presque dans le monde entier.12 M. pomifera a plusieurs activités biologiques telles que antibactérienne, antifongique, antivirale, cytotoxique, antitumorale, œstrogénique, et antipaludique13 en raison de ses isoflavones prénylées, à savoir l'osajine et la pomiférine, qui sont considérées comme les principaux métabolites des fruits.14 Dans la production cosmétique anti-âge, les composés phénoliques sont des sources naturelles importantes. Ainsi, il existe un intérêt croissant pour l'étude des plantes riches en composés phénoliques telles que M. pomifera pour de telles activités. Des études antérieures ont montré que les isoflavones de Maclura augmentent les niveaux d'expression du collagène, de l'élastine et de la fibrilline comparables ou supérieurs à des concentrations équivalentes de rétinol. Par conséquent, on peut supposer que les isoflavones de Maclura sont de puissants stimulants de la protéine ECM. Compte tenu de ces données, cette étude vise à étudier le potentiel anti-âge de l'extrait méthanolique à 80 % de M. pomifera (MPM) en explorant son potentiel de bioactivité antioxydante et en inhibant Enzymes dégradant l'ECM. De plus, une analyse quantitative du principal composant bioactif de l'extrait, l'osajin, a été mesurée par chromatographie sur couche mince à haute performance (HPTLC), et des dosages de la teneur phénolique totale et de la teneur totale en flavonoïdes ont été effectués pour une compréhension plus précise du profil phénolique. Les résultats montrent que M. pomifera pourrait être une source précieuse de produits anti-âge.

MATÉRIELS ET MÉTHODES

Produits chimiques

Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) a fourni toutes les enzymes, produits chimiques et références utilisés dans les tests. La qualité de tous les produits chimiques était de qualité analytique.

Matériel végétal

Les fruits de M. pomifera ont été collectés à Uşak, Türkiye, en mai 2020. Le Dr Hilal Bardakcı a effectué la procédure d'identification botanique des échantillons de plantes. Un bon échantillon de la plante a été déposé à l'Université Acıbadem, Herbier de la Faculté de Pharmacie (ACUPH 00002).

Préparation des extraits

Les fruits ont été séparés en petits morceaux et passés au mélangeur. Les fruits (6,45 kg) ont été macérés avec 3125 ml de méthanol à 80 % (MeOH) en utilisant un dispositif d'agitation pendant trois jours à température ambiante dans un endroit sombre. Le macérat a été filtré et cette procédure a été répétée deux fois. Les filtrats obtenus ont été rassemblés puis le méthanol a été évaporé à l'évaporateur rotatif. L'extrait méthanolique brut a été lyophilisé (le rendement était de 204,37 g, 3,16 pour cent) et stocké à -20 degré (MPM).

Procédure de quantification des principaux composés bioactifs par HPTLC

Tous les produits chimiques et réactifs utilisés étaient de qualité analytique. Le chloroforme (CHCl3) et l'acétate d'éthyle (EtOAc) ont été achetés chez Sigma-Aldrich. Un standard d'osajin disponible dans le commerce a été acheté auprès de Sigma-Aldrich (SMB {{10}}0092). Les analyses HPTLC ont été effectuées sur des plaques de gel de silice HPTLC 60 F254 en verre de 20 cm × 10 cm (Merck, Darmstadt, Allemagne). La teneur en Osajin dans le MPM a été déterminée par un système analytique CAMAG HPTLC. La phase mobile utilisée dans la présente étude a été précédemment décrite par Bozkurt et al.16 lors de l'isolement des principes actifs de M. pomifera. Un extrait de MeOH à 10 mg/mL a été utilisé comme solution de test d'analyse. Une solution mère standard (0,5 mg/mL) d'osajin a été préparée en utilisant 2 mL d'acétone. Une solution de travail avec une concentration de 50 µg/mL de composé standard a été préparée par dilution avec de l'acétone à partir de la solution mère. Chaque échantillon a été filtré à travers un filtre seringue de 0,45 µm. 10 μL de l'extrait avec au moins cinq concentrations différentes de la solution standard (3.3-4.7 μL) ont été appliqués sous forme de bandes de 8 mm de long sur des plaques HPTLC en verre de gel de silice 60 F254 avec CAMAG Automatic Échantillonneur CCM IV. Les développements ont été effectués dans la chambre de développement automatique CAMAG-2 (ADC- 2) et la phase mobile était CHCl3 : EtOAc [8:2 (v/v)]. La chambre a été saturée pendant 10 min et la plaque a été préconditionnée pendant 5 min avant le développement. L'humidité a été contrôlée par l'ADC-2 en utilisant du MgCl2 (33 % HR) pendant 10 min. L'évaluation densitométrique a été réalisée à l'aide d'un CAMAG TLC Scanner IV en mode fluorescence. La dimension de la fente a été maintenue à 5 × 0,2 mm, micro, et la vitesse de balayage a été fixée à 20 mm/s. Le contenu standard a été obtenu en comparant l'aire sous les courbes caractéristiques de fonctionnement du récepteur (AUC) avec la courbe d'étalonnage des standards à 280 nm. La présence d'étalons dans l'extrait a été assurée par la comparaison des facteurs de rétention (Rf) et des spectres UV superposés de chaque extrait et étalon. La quantité d'osajin a été déterminée par comparaison de l'intensité de la lumière réfléchie de manière diffuse à partir de l'extrait et des fractions avec le composé standard.

La teneur en osajin dans l'extrait végétal brut a été mesurée par HPTLC-densitométrie. La valeur Rf de la norme osajin s'est avérée être 0.556. La présence d'osajin dans les échantillons d'essai a été vérifiée en comparant leurs valeurs Rf et en chevauchant leurs spectres UV (Figure 1). La quantification a été obtenue en comparant les ASC des échantillons avec la courbe d'étalonnage obtenue à l'aide du composé standard osajin. La fonction d'étalonnage était y=2.268*10-8x. Le coefficient de corrélation (R) et le coefficient de variation de la fonction d'étalonnage étaient respectivement de 0,998 % et 1,06 %. L'analyse HPTLC a montré que le MPM contient 0,22 % (p/p) d'osajin. Les résultats de l'étude HPTLC sont présentés dans le tableau 1.

Analyse du profil phénolique

Dosage du contenu phénolique total

Le test a été effectué pour évaluer le contenu phénolique total des échantillons par la méthode de Folin-Ciocalteu, comme précédemment utilisé par Kurt-Celep et al. ), et 100 μL de FCR (réactif de Folin-Ciocalteu) dilué avec H2O (1:9). Après incubation pendant 30 min à 45 degrés, l'absorbance des mélanges a été lue par spectrophotométrie à 765 nm. Les résultats ont été exprimés en mg d'équivalents d'acide gallique (GAE) par g d'extrait.

Dosage de la teneur totale en flavonoïdes

La mesure de la teneur totale en flavonoïdes des fractions a été effectuée selon une méthode rapportée précédemment par Bardakci et al. Ensuite, 30 min d'incubation des mélanges ont été réalisées à température ambiante et dans l'obscurité. Après le processus d'incubation, l'absorbance a été calculée à 415 nm. Les résultats ont été exprimés en mg d'équivalents de quercétine (QE) dans 1 g d'échantillon.

Détermination de l'activité antioxydante in vitro

Test d'activité de piégeage des radicaux 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH)

Pour déterminer l'activité de piégeage des radicaux DPPH, une combinaison de solutions d'échantillons fraîchement diluées (diverses concentrations préparées à partir d'une solution mère de 1 mg/mL) et d'une solution méthanolique de DPPH (100 mM) a été effectuée. Après l'intervalle d'incubation à température ambiante pendant 45 min, l'absorbance a été lue à 517 nm. L'hydroxytoluène butylé (BHT) a été utilisé comme composé de référence pour acquérir une courbe d'étalonnage. Les valeurs IC50 des résultats ont été exprimées en µg/mL.19

Test du pouvoir antioxydant réducteur ferrique (FRAP)

Pour obtenir le réactif FRAP, 25 ml de tampon acétate 300 mM (pH 3,6), 2,5 ml de TPTZ [2,4,6-tris (2-pyridyl)-s-triazine] , et 2,5 mL de FeCl3.6H2O (20 mM) ont été mélangés. Après cela, 10 ml de l'échantillon ont été ajoutés à 260 ml de réactif FRAP et dilués à 300 ml avec de l'eau distillée dans une plaque à 96 puits. Après incubation pendant 30 min à 37 degrés, la mesure de l'absorbance a été effectuée à 593 nm. Le BHT a été utilisé comme composé de référence. Une solution de chlorure ferreux (0,252 mM) a été utilisée pour obtenir une courbe standard et les résultats ont été exprimés en FeSO4 mM dans 1 g d'extrait sec.20

Test de capacité antioxydante réductrice cuivrique (CUPRAC)

Le test CUPRAC a été estimé selon la méthode décrite précédemment par Barak et al.21 Des volumes égaux de 10 mM de CuSO4, de néocupraine et de tampon d'acétate d'ammonium (85 ml) ont été mélangés dans une plaque à puits 96-. Après cela, 51 ml d'eau distillée et 43 ml de solutions d'échantillon ont été ajoutés au mélange, respectivement. Après incubation pendant 20 min, l'absorbance a été lue à 450 nm. Les résultats ont été exprimés en mg équivalent d'acide ascorbique dans 1 g d'extrait sec.

Test de détermination de la capacité antioxydante totale (TOAC)

Le test de capacité antioxydante totale a été calculé selon la méthode au phosphomolybdène expliquée précédemment par Barak et al.22 Premièrement, pour obtenir une solution de TOAC ; Du phosphate de sodium monobasique 28 mM, du molybdate d'ammonium 4 mM et du H2SO4 600 mM ont été mélangés. Ensuite, 300 µL de solution TOAC ont été mélangés avec 30 µL de solutions d'échantillons dans une plaque 96 saine. Après la période d'incubation à 95 degrés pendant 90 min, l'absorbance a été lue à 695 nm. L'acide ascorbique a été utilisé pour obtenir une courbe standard et les résultats ont été calculés en mg d'équivalent Trolox dans 1 g d'extrait sec.

Activité inhibitrice sur les enzymes liées au vieillissement cutané

Activité anti-collagénase

Pour mesurer l'activité anti-collagénase du MPM, une solution tampon tricine 50 mM (pH : 7,5) a été préparée (400 mM NaCl et 10 mM CaCl2 ). Clostridium histolyticum (ChC - EC. 3.4.23.3) a été utilisé comme source de collagénase, qui a été dissoute dans la solution tampon de tricine 50 mM pour atteindre une concentration initiale de 0,8 U/mL. 2 mM de N-[3-(2-furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) dissous dans du tampon tricine ont été utilisés comme substrat. Les extraits ont été incubés avec l'enzyme collagénase dans une solution tampon pendant 15 min avant d'ajouter le substrat pour démarrer la réaction. Le mélange réactionnel final comprenait un volume total de 150 µL ; tampon tricine, FALGPA 0,8 mM, 0,1 unité de ChC et 25 μL de MPM. L'eau a été utilisée pour les résultats à blanc. Après l'ajout du substrat, la mesure de l'absorbance a été effectuée immédiatement. Des témoins positifs ont effectué de l'épigallocatéchine gallate (EGCG).23

Activité anti-élastase

L'évaluation de l'activité anti-élastase du MPM a été réalisée à l'aide d'une solution tampon 0.2 mM Tris-HCl (pH : 8.0). Une solution mère d'élastase (PE, EC 3.4.21.36) obtenue à partir de pancréas porcin a été préparée avec de l'eau distillée à une concentration de 3,33 mg/mL. Le N-succinyl-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN) à utiliser comme substrat a été dissous dans une solution tampon (1,6 mM). L'extrait de MPM a été incubé avec 1 µg/mL de PE pendant 15 min à 37 degrés avant l'ajout du substrat. À la fin de la pré-incubation de 15 min, du substrat AAAPVN 0 0,8 mM a été ajouté au mélange d'enzymes contenant 1 mg/mL d'extrait de plante, et l'incubation a été effectuée à nouveau pendant 15 min à 37 degrés. Lors de l'utilisation de 0.25 mg/mL d'EGCG comme contrôle positif, cet échantillon de test contient le même volume d'EGCG au lieu de MPM, et la configuration du test a été répétée. Après les périodes d'incubation, des mesures ont été prises à 4 moments différents pendant 5 à 30 minutes par le spectrophotomètre Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate à une excitation de 365 nm et une émission de 410 nm.24, 25

Activité anti-hyaluronidase

L'activité anti-hyaluronidase a été réalisée en modifiant la méthode décrite par Kolayli et al.26 et Lee et al.3 Premièrement, la hyaluronidase achetée dans le commerce (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) a été dissoute dans 0. 0Tampon phosphate 2 M (pH : 3,5) contenant du NaCl et de la sérumalbumine bovine. Ensuite, l'acide hyaluronique, un substrat approprié de l'enzyme, a été préparé dans un tampon acétate (0.1 M, pH : 3,5) et prêt à l'emploi. Le mélange de dosage consistant en 20 µL de MPM à une concentration de 1 mg/mL, 10 µL de hyaluronidase et 60 µL de tampon acétate 0,1 M a été pré-incubé pendant 20 min à 37 degrés. Après le temps d'incubation, 10 µL d'acide hyaluronique ont été ajoutés au mélange et incubés à nouveau à 37 degrés pendant 20 min. À la fin de la durée totale d'incubation, des mesures ont été effectuées à différents moments par le spectrophotomètre Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate à 600 nm. Le groupe blanc ne contenait pas d'enzymes dans la configuration expérimentale, tandis que le groupe témoin ne contenait pas l'extrait. Le pourcentage d'activité anti-hyaluronidase a été calculé à l'aide de l'équation suivante :

Activités anti-âge (pourcentage)= [(Abs de contrôle - Abs d'échantillon)/ Abs de contrôle] × 100

analyses statistiques

Les expériences d'activité anti-élastase, anti-collagénase et anti-hyaluronidase incluses dans cette étude ont été répétées trois fois indépendamment. La différence statistique a été analysée à l'aide du test t du logiciel GraphPad Prism 8 (p inférieur ou égal à 0.05).

RÉSULTATS ET DISCUSSION

Détermination du potentiel anti-âge

L'élastine, le collagène et l'acide hyaluronique sont des contenus connus de la MEC, qui jouent un rôle central dans l'apparence jeune de la peau. L'élastine est une protéine vitale pour maintenir les propriétés élastiques de la peau, par conséquent, la diminution de l'élastine dans la MEC entraîne une accélération du processus de vieillissement.27 La littérature antérieure indique le lien direct entre les rides et le vieillissement de la peau avec des quantités réduites d'élastine.28 L'acide hyaluronique est une molécule GAG ​​hydrophobe, qui est dépolymérisée via la hyaluronidase. L'acide hyaluronique est essentiel pour maintenir la douceur et l'hydratation de la peau ; par conséquent, il a été démontré qu'une dégradation excessive conduit à l'assèchement et au plissement de la peau.29 Au cours du processus de vieillissement avec le temps, une diminution des niveaux de collagène provoque un amincissement du derme, ce qui est considéré comme une indication distinctive lors d'un examen microscopique.3{{23 }} Il a été précisément indiqué que retarder la dégradation du collagène via les inhibiteurs de la collagénase retarde par conséquent le plissement et le vieillissement de la structure cutanée.5 Compte tenu de ces informations, les substances qui inhibent l'élastase, la collagénase et l'hyaluronidase ont un potentiel remarquable pour les produits anti-âge. Des études antérieures ont démontré que divers isoflavonoïdes présentent une bioactivité inhibitrice significative contre les enzymes susmentionnées. Addotey et al.31 ont montré que quatre isoflavonoïdes différents inhibaient la hyaluronidase jusqu'à 61,2 %. Kim et al.32 ont montré qu'un isoflavonoïde isolé de Glycyrrhiza uralensis Fisch., la licoricidine, a une activité inhibitrice significative de l'élastase. La valeur IC50 de la réglisse a été calculée à 61,2 ± 4,2 µM tandis que l'acide oléanolique a été calculé à 131,4 ± 11,4 comme composé de référence. Les résultats ont indiqué que les isoflavonoïdes pourraient inhiber les enzymes élastases. Conformément à l'étude susmentionnée, Kim et al.33 ont étudié neuf isoflavonoïdes prénylés différents, des structures extrêmement apparentées à l'osajin, isolés des racines de Flemingia philippinensis Merr. & Rolfe. Les chercheurs ont rapporté que cinq des isoflavones prénylées avaient une puissante activité d'inhibition contre l'élastase des neutrophiles, les valeurs IC50 se diversifiaient entre 1,9-12,0 µM, tandis que la valeur IC50 de l'acide oléanolique était de 28,4 µM. Dans une autre étude, Ergene Öz et al. 34 ont étudié l'activité inhibitrice in vitro de cinq isoflavonoïdes isolés des racines d'Ononis spinoza L. contre la hyaluronidase, la collagénase et l'élastase. L'activité inhibitrice de la hyaluronidase des isoflavones se situerait entre 22,08-45,58 %, tandis qu'à la même concentration, l'acide tannique présentait une inhibition de 88,32 %. Les résultats d'inhibition de la collagénase ont été calculés entre 20.41- 28.49 % et l'inhibition de l'élastase a été mesurée à 20.47-46.88 %. L'EGCG a été utilisé comme référence pour les deux tests et les activités d'inhibition à la même concentration ont été mesurées à 41,18 % et 84,64 %, respectivement. Une autre étude a porté sur les traitements topiques de la pomiférine directement isolée de M. pomifera. 15 La pomiférine est un isoflavonoïde prénylé que l'on trouve dans les fruits de M. pomifera et sa structure moléculaire ressemble énormément à celle de l'osajin. Les chercheurs ont rapporté que la pomiférine présentait une puissante activité de stimulation de la protéine ECM en augmentant le collagène et l'élastine, ce qui est supérieur ou équivalent au composé de référence, le rétinol. Toutes les études mentionnées ont révélé que les isoflavones sont des inhibiteurs modérés à puissants de ces enzymes et ont un potentiel significatif en tant que matériaux anti-âge naturels.

Dans cette étude, les activités inhibitrices in vitro de la hyaluronidase, de la collagénase et de l'élastase du MPM ont été étudiées pour la détermination du potentiel anti-âge. Un test comparatif a été effectué pour le test d'inhibition de la collagénase à deux moments, par exemple 20 et 40 min, à la fois pour le MPM et le composé de référence, l'EGCG. Les résultats ont démontré que l'activité d'inhibition de la collagénase augmentait avec le temps. 1 mg/mL de MPM a montré une inhibition de 84,55 ± 1,99 %, tandis que 25{{40}} µg/mL d'EGCG ont montré 84,66 ± 1,83 % après 20 min d'incubation. La bioactivité inhibitrice a été amplifiée au fil du temps, après 4 0 min. Le MPM et l'EGCG ont inhibé la collagénase de 94,68 ± 2,42 % et de 94,98 ± 2,81 %, respectivement. Conformément à la littérature, le MPM a montré une activité d'inhibition significative contre l'élastase. Les résultats ont été mesurés pour quatre points de temps (5, 10, 20 et 30 min) et ont démontré une augmentation au fil du temps (Figure 2). L'EGCG (250 µg/mL) a été utilisé comme référence et l'activité d'inhibition a augmenté à chaque instant (44,07 ± 0,00 %, 52,19 ± 0,00 %, 64,69 ± 0.{{41 }} pour cent , et 86.21 ± 0.00 pour cent , respectivement). Pendant ce temps, le MPM à une concentration de 1 mg/mL a montré une activité d'amélioration et d'inhibition plus élevée, qui est passée de 34,70 ± 0,57 % à 97,40 ± 1,04 % de 5 min à 30 min. De même, 1 mg/mL de MPM a inhibé significativement l'enzyme hyaluronidase après 40 min d'incubation. Une inhibition de 83,91 ± 2,36 % a été mesurée après 40 minutes, après ces 80 minutes d'incubation, le taux d'inhibition s'est amplifié à 97,19 ± 0,45 %. Lorsque des tests d'inhibition enzymatique complets ont été pris en compte, les résultats ont clairement démontré que le MPM peut être un agent anti-âge naturel précieux et peut être utilisé dans le contenu de divers produits anti-âge ; ainsi, M. pomifera peut acquérir une importance économique supplémentaire.

Détermination du potentiel antioxydant

De nombreux facteurs exogènes et endogènes conduisent au vieillissement cutané par divers mécanismes. La majorité de ces facteurs sont directement ou indirectement affectés par la formation de ROS dans l'ECM de la peau.35 Puisque la peau recouvre la partie externe de notre corps, elle rencontre des quantités importantes d'irradiation UV dans la vie quotidienne. Ainsi, la majorité des problèmes cutanés tels que les coups de soleil, l'hyperpigmentation et la carcinogenèse cutanée ont pour origine ou sont liés aux effets directs des rayons UV. De même, le photovieillissement est une conséquence supplémentaire de ses propriétés dangereuses.36 De plus, la lumière UV génère la formation de ROS et, par conséquent, un stress oxydatif dans les tissus cutanés, qui est l'un des mécanismes les plus importants qui conduisent au photovieillissement.37 Il a été émis l'hypothèse qu'une La formation de ROS provoque un vieillissement prématuré de la peau, des agents ayant une capacité antioxydante importante peuvent être un outil précieux contre les effets périlleux des rayons UV. En conséquence, des études cliniques montrent que l'utilisation topique d'antioxydants a un effet protecteur sur la peau.38

Après le lien entre l'utilisation topique d'antioxydants et le report du vieillissement cutané, qui est bien établi dans la littérature précédente, l'examen du potentiel antioxydant in vitro du MPM fournit des informations précieuses car son potentiel anti-âge lorsqu'il est appliqué par voie topique. La littérature antérieure a démontré que les extraits contenant un nombre élevé d'isoflavonoïdes pourraient être des antioxydants précieux. Dans une étude précédente, un extrait riche en isoflavonoïdes de l'extrait de F. macrophylla a réduit les dommages cutanés induits par les UVB en éliminant les ROS.39 Santos et Silva4{{10}} ont indiqué que les isoflavonoïdes prénylés ont un potentiel antioxydant important en raison de leur fragment flavonoïde et un effet additif de la chaîne latérale prényle. Le potentiel antioxydant des extraits et des isoflavonoïdes de M. pomifera a été évalué dans une étude précédente. Les résultats ont démontré que l'extrait hydroalcoolique et l'osajin pur ont montré une activité significative sur les dosages DPPH, FRAP et TOAC, même si les fractions de pomiférine et d'acétate d'éthyle ont montré une activité plus élevée.41 Pour cette étude, l'activité de piégeage des radicaux DPPH, les dosages FRAP, CUPRAC et TOAC ont été menée pour la détermination complète du potentiel antioxydant in vitro du MPM (tableau 2). Le MPM a montré une activité significative de piégeage des radicaux DPPH, où la valeur IC50 a été mesurée à 1998.86 ± {{20}}.02. Les dosages FRAP et TOAC ont également entraîné une activité notable de réduction des métaux, 0,191 ± 0,01 mM FeSO4 /DE et 114,43 ± 0,02 AAE/g DE, respectivement. Ces résultats étaient cohérents avec l'étude précédente publiée par Orhan et al.41 Le test CUPRAC a été effectué sur des extraits de fruits de M. pomifera pour la première fois à notre connaissance. De même, le MPM a montré une activité remarquable de réduction du cuivre dans le test CUPRAC, où les résultats ont été mesurés à 73,928 ± 0,01 AAE/g DE. Lorsque les tests de capacité antioxydante totale ont été pris en compte, il est possible de suggérer que le MPM est un agent anti-âge prometteur.

Profil phénolique et analyse HPTLC

Les isoflavonoïdes sont des substances phénoliques, connues comme constituants végétaux responsables de diverses activités biologiques remarquables telles que les propriétés antioxydantes, anticancéreuses et contre les problèmes gynécologiques.42 Des études antérieures ont démontré que les isoflavonoïdes prénylés sont les principaux composés phénoliques des fruits de M. pomifera.43 De nombreuses études ont identifié l'osajin et la pomiférine en tant qu'ingrédients principaux des fruits de M. pomifera, qui sont principalement responsables de ses activités biologiques.12 L'osajin et la pomiférine sont des isoflavonoïdes prénylés très similaires qui ne diffèrent que par un groupe hydroxyle.44 Des rapports antérieurs ont démontré des résultats contradictoires pour les teneurs en osajin et en pomiférine. des fruits de M. pomifera. Kartal et al.45 ont développé une méthode LC-MS pour la détermination de l'osajin et de la pomiférine chez M. pomifera, qui ont été collectés dans la province d'Ankara de Türkiye. Les résultats ont démontré que la teneur en pomiférine était légèrement supérieure à la teneur en osajin dans différentes parties des échantillons de fruits. Dans une autre étude, des échantillons de fruits de M. pomifera ont été prélevés dans différentes régions du Midwest et du sud des États-Unis et les teneurs en osajin et en pomiférine ont été mesurées via une nouvelle méthode d'analyse HPLC. Les résultats ont montré que les différences géographiques entraînent des modifications importantes des quantités d'isoflavonoïdes dans les échantillons.46 Tsao et al.47 ont déterminé la teneur en osajin et en pomiférine des fruits récoltés au Canada et ont constaté que la teneur en pomiférine était légèrement supérieure à la teneur en osajin. En revanche, Hwang et al.48 ont résumé plusieurs études qui ont trouvé des quantités d'osajin plus élevées que les quantités de pomiférine dans divers extraits. On peut affirmer que les teneurs en osajin et en pomiférine des fruits de M. pomifera sont exceptionnellement variables avec les différences géographiques et les techniques d'extraction en raison de leur structure chimique résolument analogue. Pour cette étude, la quantité de MPM a été mesurée par analyse HPTLC, pour la première fois à notre connaissance. Les résultats de l'analyse ont montré que l'osajin est l'ingrédient prédominant du MPM qui a été collecté dans la province d'Uşak, 0.22 % de l'échantillon était composé d'osajin (tableau 1). De plus, pour obtenir une évaluation plus approfondie du profil phénolique du MPM, des dosages de la teneur totale en phénols et en flavonoïdes totaux ont été effectués. Les résultats ont montré que le MPM avait une teneur notable en phénols et en flavonoïdes comme suit ; 113,92 ± 2,26 mg GAE/g et 66,41 ± 0.74 mg QE/g, respectivement. Les résultats de l'évaluation du profil phénolique ont montré que le MPM pourrait être un candidat de premier plan en tant que nouvel agent anti-âge naturel.

CONCLUSION

Même si les études portant sur la mise en œuvre topique des fruits de M. pomifera sont relativement nouvelles, l'attention de cette manière augmente avec des rapports encourageants. Par conséquent, cette étude visait à décrire une évaluation complète du potentiel anti-âge possible de l'extrait de fruit de M. pomifera. L'analyse HPTLC a été utilisée pour les fruits de M. pomifera pour la détermination de la teneur en isoflavonoïdes pour la première fois à notre connaissance, ainsi que des études in vitro pour déterminer le profil phénolique total. Les résultats ont montré que l'osajin est l'ingrédient principal des échantillons. De plus, le potentiel antioxydant in vitro de l'extrait a été évalué avec quatre tests différents et les résultats ont démontré un potentiel antioxydant significatif du MPM. De plus, l'activité inhibitrice contre les enzymes, qui sont liées au processus de vieillissement, a été mesurée et il a été constaté que le MPM avait une activité d'inhibition enzymatique notable. En conclusion, cette étude fournit des informations qui pourraient conduire à la production de nouveaux produits de soin de la peau.

Éthique

Approbation du comité d'éthique :L'approbation du comité d'éthique n'est pas requise pour l'étude.

Consentement éclairé :Pas nécessaire.

Examen par les pairs :Examen externe par des pairs.

Contributions d'auteur

Concept : THB, TBŞ., HB, Design : THB, İ.KC, EC, Collecte ou traitement de données : THB, İ.KC, HB, Analyse ou interprétation : THB, İ.KC, Recherche documentaire : THB, TBŞ., Ecriture : THB, EC

Conflit d'intérêt:Aucun conflit d'intérêt n'a été déclaré par les auteurs.

Divulgation financière :Cette étude a été soutenue par la Commission des projets scientifiques de l'Université Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar (no : 2020/02/07).

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