Recherche interventionnelle sur les glycosides d'alcool phényléthylique dans le cistanche sur le modèle animal du syndrome de la périménopause Ⅱ

Expérience 1 Préparation du glycoside phényléthanoïde Cistanche 1 Source de matières médicinales

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, numéro de lot : 20130501.

2 réactifs

95 % d'éthanol (qualité médicale) ; Résine d'adsorption macroporeuse AB-8, Institut de recherche en chimie fine de Tianjin Guangfu, numéro de lot : 20130618.

Substance de référence échinacoside, fournie par l'Institut chinois pour le contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques, numéro de lot : 111670-200503.3

COMBIEN DE TEMPS FAUT-IL POUR CISTANCHE FONCTIONNE?

Méthode de préparation

Il a été fait référence à la méthode de la littérature [19] et a été menée sous la direction du professeur Feng Suxiang du département d'analyse des médicaments du Henan College of Traditional Chinese Medicine.Moudre Cistancheen une poudre grossière, ajouter 10 fois la quantité d'éthanol à 70 % au reflux et extraire deux fois, 1,5 heure à chaque fois, combiner les deux extraits alcooliques, concentrer sous pression réduite jusqu'à ce qu'il n'y ait plus d'odeur d'alcool et disperser avec de l'eau distillée (la concentration est de 0,5 g de matière médicinale/ml) comme solution d'échantillon. Passez à travers la résine AB-8 (médicament en colonne : la résine est 1:10), chargez l'échantillon dans un flux et laissez-le reposer pendant 5 heures jusqu'à ce qu'il soit complètement adsorbé. Tout d’abord, lavez avec 10 fois le volume de la colonne d’eau distillée, jetez l’eau, puis utilisez 10 fois le volume de la colonne. Utilisez 10 % d'éthanol pour éliminer les impuretés, et enfin éluez avec 7 fois le volume de colonne d'éthanol à 60 %. Recueillir l'éluat et évaporer à sec pour obtenir une poudre. 4 Sélection de la longueur d'onde de mesure

Mesurez avec précision {{0}},5 mL de la solution de référence, ajoutez 1 mL de solution de nitrite de sodium à 5 %, agitez bien et laissez reposer 6 minutes ; ajouter 1 ml de solution de nitrate d'aluminium à 10 %, bien agiter et laisser reposer 6 minutes ; ajouter 10 ml de solution d'hydroxyde de sodium à 10 %, diluer à 25 ml avec de l'eau, bien agiter et laisser reposer 18 min pour servir de solution de référence. 0,5 ml deCistanche phényléthanol glycosideLa solution a été préparée de la même manière que la solution test. Utilisez l'échantillon parallèle sans ajouter de substance de référence, testez la solution comme blanc et préparez la solution blanc de la même manière. Sur le spectrophotomètre UV, effectuez une analyse complète de la longueur d'onde sur les trois solutions ci-dessus dans la plage de longueurs d'onde de 200-800 nm. La substance de référence et la solution d'essai ont des pics d'absorption maximaux à 507 nm, donc 507 nm est déterminé comme longueur d'onde d'absorption.

Après développement de la couleur de l'échantillon de glycoside de phényléthanol Cistanche + développement de la couleur de la substance de référence Echinacea mandarine (comparaison superposée), voir Figure 1.

Figure 1 Après développement de la couleur de l'échantillon de glycoside de phényléthanoïde Cistanche + après développement de la couleur de la substance de référence Echinacea mandarine Figure 5 Méthode de détection du contenu

Mesurez précisément 1 mL de la solution à tester, ajoutez 1 mL de solution de nitrite de sodium à 5 %, bien agiter et laisser reposer 6 min ; ajouter 1 ml de solution de nitrate d'aluminium à 10 %, bien agiter et laisser reposer 6 min ; ajouter 10 % d'hydroxyde de sodium. La solution est de 10 ml, diluer à 25 ml avec de l'eau, bien agiter et laisser reposer 18 minutes. Utilisez l'échantillon parallèle sans ajouter de solution échantillon comme blanc et préparez une solution blanc de la même manière. Mesuré à l'aide d'un spectrophotomètre UV à 507 nm. 6 Revue méthodologique

6.1 Préparation de la solution de référence et de la solution échantillon

Préparation de la solution de référence : pesez avec précision 3,06 mg de l'étalon de référence d'échinacoside séché jusqu'à poids constant, placez-le dans une fiole jaugée de 25 mL, ajoutez une solution à 70 % pour dissoudre et diluer jusqu'au trait, bien agiter et réserver. La concentration standard est de 0,1224 mg/ml.

Préparation de la solution échantillon : Peser précisément 5 mg deCistanche phényléthanoïde glycoside extraitdans une fiole jaugée de 10 ml, dissoudre avec de l'éthanol à 70 % et diluer au volume.

6.2 Préparation de la courbe étalon

Dessinez avec précision {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 mL de solution de référence, développer la couleur et diluer au volume selon la méthode décrite en 4.2, et mesurer la valeur d'absorbance à 507 nm. En utilisant la concentration par rapport à l'absorbance pour créer une courbe de régression, l'équation de régression est : Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994), et la plage linéaire est de 4.{{ 23}},4ug/ml.

6.3 Test de précision

Prenez la solution échantillon et mesurez-la six fois en parallèle selon l'élément « Méthode de détermination du contenu ». Calculez l’écart type relatif de l’absorbance. Les absorbances sont respectivement {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0,297. L'absorbance moyenne=0,298, RSD=0,330 % (n =6).

6.4 Essai de stabilité

Prélevez une quantité appropriée de la solution échantillon et, selon l'élément « Méthode de détermination du contenu », mesurez les valeurs d'absorbance à {{0}}, 15, 30, 50 , et 60 minutes après que la solution soit complètement colorée, et calculez l'écart type relatif. Les absorbances sont respectivement 0,304, 0,303, 0,300 et 0,296. , 0,295, 0,295, absorbance moyenne=0,299, RSD=1,362 % (n=5).

6.5 Test de répétabilité

Prélevez un échantillon, préparez 6 solutions échantillons selon l'élément « Préparation de la solution échantillon », mesurez la valeur d'absorbance selon l'élément « Méthode de détermination du contenu » et calculez le contenu. Les teneurs sont respectivement de 65,2 %, 65,6 %, 66,7 %, 67,2 % et 66,5 %. , 65,8 %, teneur moyenne 66,2 %, RSD=1,142 % (n=6).

6.6 Test de récupération des échantillons

Prélevez avec précision 0,5 mL de la solution échantillon avec un contenu connu, soit un total de 9 parties, et ajoutez respectivement 200, 250 et 300 ul de la solution standard. Mesurez et calculez le taux de récupération et l’écart type relatif du glycoside de phényléthanol Cistanche. Les taux de récupération sont respectivement de 101,45% et 99,26%. , 98,94 %, 101,83 %, 99,05 %, 99,47 %, 98,72 %, 99,17 %, 100,64 %, le taux de récupération moyen est de 99,84 %, RSD=1,164 % (n=9).

7 Détermination du contenu de l'échantillon

Tableau 1 Résultats de la détermination de la teneur en phényléthanoïde glycoside dans le Cistanche