Quelle herbe augmente la densité osseuse ? Cistanche (CPhGs) stimule l'ostéogenèse via la voie SIRT2 – C/EBP –AREG

 

 

Ostéoporoseest une maladie orthopédique courante affectant la santé des personnes d'âge moyen et âgées, et son incidence a montré une tendance à la hausse ces dernières années [1]. En 2015, il y avait 2,69 millions de patients souffrant de fractures ostéoporotiques en Chine, et ce nombre devrait dépasser 4,8 millions d'ici 2035. Les coûts de traitement atteindront des dizaines de milliards de yuans, imposant un fardeau important aux familles et à la société [2]. Les recherches [3] indiquent que l'ostéoporose est liée à la différenciation des ostéoblastes. L’équilibre entre la formation osseuse et la résorption osseuse est fondamental pour maintenir la régénération du tissu osseux et la qualité osseuse. Une ostéogenèse réduite et une résorption osseuse accélérée sont des mécanismes pathologiques conduisant à l'ostéoporose. Les ostéoblastes sont responsables de la synthèse, de la sécrétion et de la minéralisation de la matrice osseuse, et donc de la formation, de la croissance, de la résorption et du métabolisme osseux [4]. Traiter l’ostéoporose nécessite de favoriser la différenciation et la prolifération des ostéoblastes et d’améliorer leur fonction. Il est donc particulièrement important d’élucider les mécanismes de différenciation des ostéoblastes. Actuellement, le traitement clinique fait principalement appel à des interventions pharmacologiques, telles que des médicaments antirésorbants (bisphosphonates, modulateurs sélectifs des récepteurs aux œstrogènes, calcitonine, suppléments de vitamine D) et des agents anabolisants (analogues de l'hormone parathyroïdienne). Cependant, un traitement à long terme peut entraîner des effets indésirables dose-dépendants. Les réactions gastro-intestinales courantes comprennent les nausées, les vomissements et la diarrhée. Notamment, bien que l'incidence globale de complications graves telles que l'ostéonécrose de la mâchoire et les lésions rénales aiguës soit faible, les cliniciens doivent surveiller de près leur risque dans des populations spécifiques (par exemple, les patients présentant des métastases osseuses tumorales) [5].

Cistanche (Cistanche deserticola/tubulosa) a les fonctions de médecine traditionnelle chinoise de tonifier le yang des reins et de nourrir l'essence et le sang. Des études pharmacologiques modernes [6] ont montré que Cistanche peut réguler le métabolisme osseux en favorisant l'activité des ostéoblastes et en inhibant l'activité des ostéoclastes. Il présente une faible toxicité et peu d’effets indésirables. Chez les rats ovariectomisés, l'extrait de Cistanche peut inverser la perte osseuse et prévenir l'ostéoporose. La recherche [7] a montré que les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche (CPhG), en tant que constituants actifs clés des glycosides totaux de Cistanche, possèdent des effets uniques sur la régulation du métabolisme osseux, l'amélioration de l'activité des ostéoblastes et la suppression de l'activité des ostéoclastes. Cependant, aucun rapport n'a été publié sur la question de savoir si les CPhG régulaient la différenciation ostéogénique via l'axe SIRT2 – C/EBP –AREG. Cette étude examine les effets et les mécanismes des CPhG sur la différenciation ostéogénique, dans le but de fournir un soutien théorique et une base appliquée pour l'utilisation des CPhG dans le traitement de l'ostéoporose.

1 Matériels et méthodes

1.1 Matériels et instruments

CPhG (échinacoside supérieur ou égal à 40 %, actéoside/verbascoside supérieur ou égal à 15 %, glycosides phényléthanoïdes totaux supérieur ou égal à 80 %, lot n°. 20240211) ont été achetés auprès deXinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. Une quantité appropriée de CPhG a été dissoute dans 10 ml de milieu de culture cellulaire. Après dissolution complète, la solution a été filtrée deux fois sur une membrane microporeuse de 0,22 µm. Des milieux d'induction ostéogéniques ou ostéoclastiques contenant des CPhG ont été préparés à des concentrations de 50, 100 et 200 μmol/L. Tous les milieux contenant des CPhG ont été fraîchement préparés avant utilisation.

Spécifications de l'extrait de cistanche du Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd

La calcéine-AM, la protéine kinase B (AKT), la protéine kinase B phosphorylée (p-AKT), la protéine CCAAT/enhancer-binding (C/EBP), la sirtuine 2 (SIRT2), l'ostéopontine (OPN), le facteur de transcription lié à Runt 2 (RUNX2) et les anticorps contre l'ostéocalcine (OCN) ont été achetés auprès de Beyotime Biotechnology (Shanghai, Chine). Un incubateur à CO2 et un instrument de PCR quantitative en temps réel ont été achetés auprès de Bio-Rad (USA). Un lecteur de microplaques iMark a été acheté chez Eppendorf (Allemagne). Le réactif de transfection Lipofectamine 3000 a été acheté auprès de Thermo Fisher Scientific (USA). Le kit de mutagenèse dirigée sur site QuikChange Lightning a été acheté auprès d'Agilent (États-Unis).

Cistanche Ratio et annonces à vendre

 

1.2 Animaux expérimentaux et regroupement

Soixante souris femelles C57BL/6 ont été achetées au Laboratory Animal Center de l'Université du Sichuan. Tous les protocoles animaux ont été approuvés par le comité d'éthique animale de la Southwest Medical University (20230718-022).

Pour clarifier les effets de l'intervention des CPhG sur l'ostéoporose, un modèle d'ovariectomie classique (OVX) a été établi. Des souris âgées de huit semaines ont été réparties au hasard en trois groupes : Sham (ablation de tissu adipeux de volume égal autour des ovaires uniquement), OVX (ovariectomie bilatérale) et OVX + CPhG (ovariectomie bilatérale + CPhG par gavage). Après une anesthésie intrapéritonéale au pentobarbital de sodium (50 mg/kg), une chirurgie fictive ou une ovariectomie bilatérale a été réalisée dans des conditions stériles. Les interventions ont commencé 24 heures après l'opération. Le groupe OVX + CPhGs a reçu des CPhGs par gavage (dissous dans une solution de carboxyméthylcellulose sodique à 0,5 %, 300 mg·kg−1·j−1) ; les groupes OVX et Sham ont reçu des volumes égaux de véhicule par gavage. Les interventions se sont poursuivies pendant 8 semaines. Le poids corporel a été surveillé chaque semaine. Deux mois après l'intervention chirurgicale, le taux de formation osseuse a été évalué à l'aide d'un double marquage à la calcéine et les fémurs ont été soumis à un examen micro-CT (paramètres : 50 kV, 200 μA, résolution de 10 μm) pour analyser quantitativement la fraction volumique osseuse (BV/TV), l'épaisseur trabéculaire (Tb.Th) et la séparation trabéculaire (Tb.Sp). Au 60e jour postopératoire (intervention totale de 8 semaines), toutes les souris ont été euthanasiées.

 

1.3 Expériences cellulaires et regroupement

La lignée cellulaire pré-ostéoblastique de souris MC3T3-E1 a été achetée auprès de Guangzhou CytoNiche Biotechnology Co., Ltd. Les cellules ont été cultivées dans du DMEM contenant 10 % de sérum de veau fœtal et 1 % de pénicilline-streptomycine.

Pour analyser les effets des CPhG sur la différenciation ostéogénique MC3T3-E1 et l'axe SIRT2 – C / EBP –AREG, certaines cellules MC3T3-E1 cultivées ont été divisées au hasard en un groupe témoin (NC) et un groupe CPhG. Le groupe NC a été cultivé dans un milieu d'induction ostéogénique standard, tandis que le groupe CPhGs a été cultivé dans un milieu ostéogénique contenant 50 μmol/L de CPhG.

Pour vérifier si SIRT2 influence l'expression de C/EBP dans les cellules MC3T3-E1, un autre lot de cellules MC3T3-E1 a été divisé au hasard en contrôle (MC3T3-E1 de type sauvage sans CPhG), SIRT2 KD (inactivation stable de SIRT2 MC3T3-E1 sans CPhG), contrôle + CPhG (MC3T3-E1 de type sauvage traité avec 50 μmol/L de CPhG), et SIRT2 KD + CPhG (SIRT2 knockdown MC3T3-E1 traité avec 50 μmol/L de CPhG). Pour les groupes SIRT2 KD et SIRT2 KD + CPhGs, l'inactivation de SIRT2 a été obtenue en transfectant un siARN mélangé à de la Lipofectamine 3000 ; Les niveaux d'ARNm de SIRT2 ont été mesurés par qRT-PCR. Pour les groupes Contrôle et Contrôle + CPhGs, NC-siRNA a été transfecté et les niveaux d'ARNm SIRT2 ont été mesurés.

Pour confirmer le rôle de la désacétylation de C/EBP dans la promotion de la différenciation ostéogénique, les cellules MC3T3-E1 restantes ont été attribuées aux groupes WT (témoin), mutant K102R, mutant K211R et traité par CPhGs (EX). Les cellules WT ont été maintenues dans un milieu d'induction ostéogénique standard. Pour les groupes K102R et K211R, des amorces mutantes du site d'acétylation ont été conçues sur la base de la séquence codante de C/EBP. En utilisant pcDNA3.1-FLAG-C/EBP de type sauvage comme modèle et le kit QuikChange Lightning, des mutants pcDNA3.1-FLAG-C/EBP (K102R et K211R) ont été construits. Le groupe EX a été cultivé dans un milieu ostéogénique contenant 50 µmol/L de CPhG.

 

Quelle herbe augmente la densité osseuse

1.4 Western Blot et immunoprécipitation pour l’expression des protéines

Les membranes PVDF ont été incubées avec des anticorps primaires pendant une nuit à 4 degrés, suivis d'un anticorps secondaire conjugué à la HRP (IgG de chèvre anti-lapin, 1: 5 000) à température ambiante pendant 1 h. Les bandes de protéines ont été visualisées à l'aide d'un système d'imagerie par chimiluminescence et la -tubuline (1: 1 000) a servi de contrôle interne pour la quantification relative. Le logiciel ImageJ a été utilisé pour l'analyse. Pour l'immunoprécipitation, le tampon de lyse Pierce IP a été utilisé. Les extraits ont été incubés avec les anticorps correspondants pendant une nuit à 4 degrés, puis avec des billes d'agarose protéine A/G pendant 4 heures à 4 degrés. Les complexes protéine A/G billes-anticorps-antigène ont été précipités et lavés, puis élués dans un tampon d'échantillon SDS à 95 degrés pendant 5 min. Les protéines cibles ont été détectées par Western blot.

 

1.5 PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR) pour l'expression de l'ARNm

L'ARN total a été extrait à l'aide du réactif TRIzol. La densité optique à 260 et 280 nm a été mesurée avec un spectrophotomètre ultramicro UV-visible. La concentration d'ARN a été calculée à partir de la DO à 260 nm et la pureté a été évaluée par le rapport OD260/OD280. L'ADNc a été synthétisé à l'aide du kit de synthèse d'ADNc HiFiScript (Vazyme, Nanjing, Chine). La qRT-PCR a été réalisée à l'aide du mélange Ultra SYBR sur un système PCR en temps réel. Séquences d'amorces :

OCN, avant 5'-TCTGACCTCACAGATGCCAAG-3', inverse 5'-AGGGTTAAGCTCACACTGCT-3' ;

OPN, avant 5'-CACATGAAGAGCGGTGAGTCT-3', inverse 5'-CCCTTTCCGTTGTTGTCCTG-3' ;

RUNX2, avant 5'-GGGACTGTGGTTACCGTCAT-3', inverse 5'-ATAACAGCGGAGGCATTTCG-3' ;

C/EBP, avant 5'-CTTCACCCCGTACCTGGGAG-3', inverse 5'-GGAGAGGAAGTCGTGGTGGC-3' ;

GAPDH, avant 5'-TGGCCTTCCGTGTTCCTAC-3', inverse 5'-GAGTTGCTGTTGAAGTCGCA-3'.
GAPDH a été utilisé comme contrôle interne et l'expression relative a été calculée à l'aide de la méthode 2-ΔΔCt.

 

1.6 Coloration au rouge alizarine S (ARS)

Après la culture cellulaire, les cellules ont été rincées avec du PBS et fixées avec du paraformaldéhyde à 4% pendant 30 min. Ils ont été colorés à température ambiante avec une solution d’ARS à 1 % (pH 4,2) pendant 20 min, puis lavés à plusieurs reprises avec de l’eau ultrapure jusqu’à ce que le fond soit clair. Après imagerie, les nodules minéralisés ont été dissous avec une solution à 10 % de chlorure de cétylpyridinium pour quantification et l'absorbance a été mesurée à 562 nm.

 

1.7 Analyse statistique

Les analyses statistiques ont été réalisées avec SPSS 25.0. Les données de mesure sont exprimées en moyenne ± écart type. Pour les données normalement distribuées, une ANOVA unidirectionnelle a été utilisée pour les comparaisons entre plusieurs groupes, suivie du test post-hoc de Tukey pour les comparaisons par paires. Pour les données non distribuées normalement, le test U de Mann – Whitney a été utilisé. Une valeur AP <0,05 était considérée comme statistiquement significative.

Note stratégique destinée aux acheteurs B2B à la recherche de solutions à base de plantes fiables pour l'ostéoporose

Mots clés : extrait de Cistanche, glycosides phényléthanoïdes de Cistanche (CPhG), échinacoside, acteoside/verbascoside, différenciation des ostéoblastes, fournisseur d'extraits de plantes contre l'ostéoporose, nutraceutiques pour la santé des os, usine GMP Cistanche, Xinjiang Cistanche.

Pourquoi Cistanche/CPhG : La justification translationnelle ci-dessus met en évidence la double action des CPhG, favorisant l'activité des ostéoblastes et supprimant l'activité des ostéoclastes, ce qui soutient leur utilisation dans des formulations pour la santé osseuse ciblant l'ostéogenèse, la masse osseuse et la microarchitecture.

Approvisionnement et qualité : pour les acheteurs qui ont besoin de spécifications CPhG cohérentes (par exemple, échinacoside supérieur ou égal à 40 %, acteoside supérieur ou égal à 15 %, glycosides phényléthanoïdes totaux supérieurs ou égaux à 80 %), recherchez des chaînes d'approvisionnement certifiées GMP, à grande échelle et traçables.

 

Présentation du fournisseur Cistanche leader du secteur

Si vous évaluez des fournisseurs d'extraits de plantes axés sur l'ostéoporose, Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd (WECISTANCHE) est un partenaire de premier plan à considérer.WECISTANCHEest la société de vente dédiée deXinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd, et le siège du groupe est situé à Hotan, dans le Xinjiang. Selon le profil de leur entreprise :

Échelle et origine : créée en 2003, dont le siège est dans le comté de Luopu, Hotan, Xinjiang (une origine principale du Cistanche), avec une base de Cistanche de 200 000 acres et la plus grande usine de transformation de Cistanche au monde.

Integrated supply chain: Seed breeding base (~20,000 acres), cultivation base (>85 000 acres), collecte et stockage de 15 000 tonnes de Cistanche frais et une usine GMP capable de traiter 20 000 tonnes de Cistanche frais et d'autres plantes.

Certifications et qualité : atelier national sur les BPF des aliments de santé, certifications biologiques China SC, HACCP, IOIA/NOP et 14 brevets d'invention liés au Cistanche (y compris la technologie de séparation par membrane).

 

Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd

Force de R&D :Dirigé par le professeur Pengfei Tu (Université de Pékin) et collaborations à long terme avec le centre de recherche moderne en MTC de l'Université de Pékin, l'Université Jiao Tong de Shanghai, l'Université médicale de Shenyang, l'Université médicale du Xinjiang, l'Université pharmaceutique de Kyoto et l'Université Kinki.

Champ d'application : extraits et formes finies adaptés aux décoctions de MTC, aux aliments fonctionnels, aux produits de santé, aux compléments alimentaires, aux produits pharmaceutiques et aux soins de la peau.

Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd

Responsabilité sociale :Contributions reconnues au contrôle de la désertification et à la réduction de la pauvreté au Xinjiang ; dons à grande échelle de produits Cistanche pendant le COVID-19.

Pour des documents techniques, des devis ou des marques privées/OEM sur les CPhG pour la santé osseuse, contactez WECISTANCHE :

Site web:https://www.xjcistanche.com/about-us

E-mail :wallence.suen@wecistanche.com
 

Adresse:No.1, étage 26, unité 1, bâtiment 6, n°133 rue Sheng'an, district de haute technologie, Chengdu, Sichuan, Chine (zone pilote de libre-échange)