PARTⅠ : nouveaux effets protecteurs de l'extrait de Cistanche Tubulosa contre la rétinopathie dégénérative induite par la lumière bleue à faible luminance
Mar 04, 2022
Contact : Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Man-Ru Wu Cheng-Hui Lin Jau-Der Hob George Hsiao, Yu-Wen Cheng
École de pharmacie, Collège de pharmacie, Université de médecine de Taipei, Taipei, Département d'ophtalmologie, Université de médecine de Taipei, Taipei, Département de pharmacologie, École de médecine, Collège de médecine, Université de médecine de Taipei, Taipei, Institut universitaire des sciences médicales, Collège de Médecine, Université médicale de Taipei, Taipei, Ph.D. Programme de recherche et développement en biotechnologie, Collège de pharmacie, Université médicale de Taipei, Taipei, Taïwan
Résumé
Contexte/Objectifs :La phototoxicité induite par la lumière des diodes électroluminescentes bleues (BLL) joue un rôle important dans les maladies oculaires et provoque la dégénérescence rétinienne et l'apoptose des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines (RPE).Extrait de Cistanche tubulosa (CTE)est une médecine traditionnelle chinoise aux nombreuses propriétés protectrices bénéfiques ; cependant, peu d'études ont examiné les rôles protecteurs oculaires du CTE. Dans cette étude, nous avons étudié les mécanismes sous-jacents aux effets de la CTE sur l'apoptose induite par la BLL in vitro et in vivo. Méthodes : des cellules RPE ont été appliquées dans l'étude in vitro actuelle et la viabilité cellulaire a été déterminée par un 3-(4,5-diméthylthiazol- 2-yl)-2,{{6} }dosage au bromure de diphényltétrazolium. L'expression de la protéine liée à l'apoptose a été déterminée par analyse Western blot et coloration par immunofluorescence. Des rats bruns de Norvège ont été utilisés pour examiner l'exposition aux BLL disponibles dans le commerce in vivo. La coloration à l'hématoxyline et à l'éosine, la désoxynucléotidyl transférase terminale dUTP nick end labeling (TUNEL) et les tests Western blot ont été utilisés pour examiner la déformation morphologique rétinienne. Résultats : Le CTE a significativement inhibé les dommages induits par le peroxyde d'hydrogène, l'hydroperoxyde de tertbutyle, l'azide de sodium et la BLL. En outre, le CTE a réduit l'expression de marqueurs apoptotiques tels que la caspase clivée -3 et la coloration TUNEL après exposition à la BLL en inactivant les voies apoptotiques, comme le montre la coloration immunofluorescente. En outre, CTE a inhibé la phosphorylation induite par BLL de la kinase N-terminale c-Jun, des kinases supplémentaires liées au signal 1/2 et de p38 dans les cellules RPE. In vivo, l'administration orale de CTE a sauvé les diminutions de l'épaisseur rétinienne induites par l'exposition périodique à la BLL pendant 60- jours et a réduit le nombre de cellules positives au TUNEL dans le modèle de rat brun brun. Conclusion : le CTE est un agent prophylactique potentiel contre la phototoxicité induite par la BLL
Introduction
Des études sur la dégénérescence maculaire liée à l'âge (DMLA) ont rapporté que 8,7 % de la population mondiale souffre de cette maladie [1]. La DMLA est une maladie neurodégénérative qui provoque une déformation des photorécepteurs, une atrophie de l'épithélium pigmentaire rétinien (EPR), l'apoptose des cellules ganglionnaires et une perte de vision centrale chez les personnes âgées, et devient un fardeau social mondial. La DMLA est classée en forme sèche ou humide [2, 3]. Les améliorations technologiques ont fait que les gens passent plus de temps à utiliser des appareils numériques modernes et, par conséquent, les gens sont exposés aux émissions de lumière bleue (BL) pendant de longues périodes. Cependant, la question de la phototoxicité induite par BL dans la rétine n'est pas bien étudiée. La surexposition aux BL à courte longueur d'onde (450–495 nm) entraîne la génération d'espèces réactives de l'oxygène (ROS), telles que les radicaux superoxyde et hydroxyle, qui provoquent une augmentation de la consommation d'oxygène et induisent des dommages à l'ADN mitochondrial. L'accumulation de ROS entraîne un stress oxydatif et l'accumulation importante d'adduits de rétinoïdes, qui endommagent davantage la rétine [4]. La recherche a montré que le stress oxydatif est un facteur majeur dans la pathogenèse de la DMLA sèche [5]. De plus, l'irradiation BL diminue l'expression des enzymes antioxydantes rétiniennes, telles que la superoxyde dismutase et la catalase, en médiant les interactions protéiques Bax/Bcl-2 et en favorisant la production endogène de ROS. En tant que telles, les cellules RPE et les mitochondries du segment externe des photorécepteurs souffrent de lésions induites par l'irradiation BL [6, 7]. En plus de la génération de ROS, l'irradiation BL active les protéines kinases activées par les mitogènes (MAPK), qui jouent un rôle important dans la survie cellulaire et l'apoptose. Les protéines pro-apoptotique liées à l'apoptose dépendantes des mitochondries, telles que Bax et la caspase -3, sont activées par l'irradiation par la lumière de la diode électroluminescente BL (BLL) via les voies c-Jun N-terminal kinase (JNK) et p38 dans RPE et cellules ganglionnaires rétiniennes [8]. De plus, la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt et les voies antioxydantes dépendantes du facteur 2 (Nrf2) lié au facteur nucléaire érythroïde 2- sont des composants du système de défense des cellules RPE [{{34} }].
Extrait de Cistanche tubulosa (CTE)contient des dérivés de glycosides phényléthanoïdes et est utilisé comme médecine traditionnelle chinoise depuis des décennies. L'échinacoside, l'actéoside et l'isoactéoside sont trois composés actifs majeurs du CTE qui se caractérisent par leurs propriétés neuroprotectrices, améliorant la mémoire, immunorégulatrices et anti-fibrose hépatique [13, 14]. L'échinacoside est un capteur de ROS et protège contre l'apoptose induite par l'ion 1-méthyl-4-phénylpyridinium (MPP plus) dans des modèles animaux de la maladie de Parkinson [15, 16]. L'actéoside protège contre la neurotoxicité induite par l'amyloïde- -et réduit l'inflammation stimulée par les lipopolysaccharides, attribuable à la translocation de Nrf2 du cytoplasme au noyau et à la liaison aux éléments de réponse antioxydante. Les thérapies actuellement disponibles pour la DMLA humide, telles que le pegaptanib, le ranibizumab, le bevacizumab et l'aflibercept, sont utilisées pour inhiber l'angiogenèse excessive [17, 18]. Cependant, aucun traitement efficace n'existe pour la DMLA sèche, en raison des multiples complications pathologiques de cette maladie.
Dans cette étude, nous démontrons les effets protecteurs du CTE dans les cellules RPE et les rats Brown Norway (BN). En outre, nous avons appliqué une exposition à long terme à la BLL à faible luminance à des modèles in vitro et in vivo pour évaluer les effets protecteurs du CTE. Nous avons constaté que la CTE réduisait l'expression des protéines liées à l'apoptose après exposition à la BLL. De plus, la CTE a réduit le nombre de cellules positives à l'étiquetage terminal désoxynucléotidyl transférase dUTP (TUNEL) dans la rétine des rats BN après une exposition à long terme à une BLL à faible luminance. Cette étude fournit des informations supplémentaires sur les nouveaux effets anti-apoptotique de la CTE et des informations concernant une nouvelle stratégie pour le traitement de la dégénérescence rétinienne.
Extrait de Cistanche tubulosa (CTE) : glycoside de phényléthanoïde
Matériaux et méthodes
Produits chimiques et produits
Le CTE a été généreusement fourni par Sinphar Pharmaceutical Company (Yilan, Taiwan). Des kits de détection de mort cellulaire in situ (Cat. No. 11-684-817-910) ont été achetés auprès de Roche (Mannheim, Allemagne).
Culture cellulaire RPE
Les cellules RPE (ARPE{{0}} et ATCC® CRL-2302™) ont été achetées auprès de l'American Type Culture Collection (Manassas, VA) et cultivées dans le milieu Eagle modifié de Dulbecco (Gibco, Grand Island, NY) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal dans une atmosphère humidifiée de 5 % de CO2 à 37 degrés. Les cellules ARPE-19 au passage 19–30 ont été maintenues sur des boîtes de culture cellulaire de 10-cm (Orange Scientific, Braine-l'Alleud, Belgique). Après passage avec 0,05 pour cent de trypsine-acide éthylènediamine tétraacétique (Gibco), les cellules ont été replaquées à un rapport de 1:4. Avant le test, les cellules ARPE-19 ont été ensemencées sur des plaques à puits 48- (Orange Scientific) pour des analyses de viabilité cellulaire à une densité de 1,0 × 105 cellules/mL et sur des boîtes de 6- cm (Orange Scientific ) pour les analyses Western Blot à une densité de 2,0 × 105 cellules/mL pendant 24 h. Une fois que les cellules ARPE-19 ont atteint 80 % de confluence, les expériences suivantes ont été réalisées.
Traitement médicamenteux et test de viabilité cellulaire
Les cellules RPE au passage 19-30 ont été ensemencées sur des plaques à puits 48- et co-traitées pendant 24 h avec différentes concentrations de CTE, de peroxyde d'hydrogène (H2O2), d'hydroperoxyde de tert-butyle (t-BHP) et d'azoture de sodium ( NaN3). Les cellules ont ensuite été cultivées avec du 3-(4, 5-diméthylthiazol-2-yl)-2, 5-bromure de diphényltétrazolium (MTT) à une concentration finale de 1 mg /mL et incubé pendant 30 min. Du diméthylsulfoxyde (200 ul) a ensuite été ajouté à chaque puits pour dissoudre les cellules. L'absorbance a été mesurée à 570 nm à l'aide d'un lecteur d'essai immuno-enzymatique avec spectrophotomètre Sunrise™ (MRX-TC ; Dynex Technologies, Chantilly, VA). Les valeurs ont été corrigées pour l'absorbance de fond en soustrayant les blancs appropriés. Les données proviennent de cinq tests indépendants.
Protocole d'exposition BL in vitro
La source lumineuse et les plaques cellulaires ont été placées à 25 cm l'une de l'autre, comme décrit dans notre étude précédente [19]. La luminance a été mesurée avec un posemètre (LM-81LX ; Lutron Electronic Enterprise, Taipei, Taiwan). La BLL a culminé à 460 nm (60 lux) pendant la durée indiquée (0 à 48 h), selon la conception expérimentale.
Western blot
Après un co-traitement de 0–48- h avec une exposition au CTE et à la BLL, les cellules ont été lavées deux fois avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) glacée et remises en suspension dans un tampon de lyse de test de radioimmunoprécipitation (1 % de Nonidet P-40, 50 mM Tris-HCl pH 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM Na3VO4, 1 mM éthylène glycol-bis ( -aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-acide tétraacétique, 1 mM NaF , et cocktail inhibiteur de protéase/phosphatase). Le lysat cellulaire a été obtenu par centrifugation à 12, 000 × g pendant 35 min, et le surnageant a été collecté pour déterminer les concentrations de protéines via le réactif de Bradford (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Des quantités égales d'échantillons de protéines ont été séparées par électrophorèse sur gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide à 10–12%, puis transférées sur une membrane de difluorure de polyvinylidène. Une fois la membrane bloquée avec du lait écrémé à 5 % et incubée dans une solution saline tamponnée au Tris avec du Tween 20 (TBST) pendant 1 h, un immunotransfert a été effectué avec des anticorps primaires spécifiques de la caspase clivée-3, phospho-JNK, JNK , phospho-p38, p38, phospho-extracellular signal-related kinase (ERK), ERK, Bcl-2, Bax, Fas-associated protein with death domain (FADD), caspase-8 (GeneTex, Irvine , CA), Fas-ligand (Abcam, Cambridge, Royaume-Uni) et b-actine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Les transferts ont ensuite été incubés avec des anticorps secondaires conjugués à la peroxydase de raifort (1: 6000 dans du TBST; Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) pendant 1 h à température ambiante. En utilisant un kit de chimiluminescence amélioré (Millipore, Billerica, MA), l'intensité des bandes sur chaque transfert a été analysée avec le logiciel Image J après normalisation à la b-actine.
Immunofluorescence
Les cellules RPE ont été fixées avec du paraformaldéhyde à 4 % dans du PBS pendant 15 min. Triton X-100 dans du PBS (0.2 %) a ensuite été ajouté aux cellules pendant 15 min, suivi de 5 % de sérum bovin fœtal dans du PBS pendant 30 min ; les cellules ont ensuite été incubées avec un anticorps anti-caspase -3 clivée à un rapport de 1:250 pendant 24 h (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Un anticorps secondaire IgG anti-lapin de chèvre (Dylight 594) a été utilisé dans un rapport de 1:200 (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Les noyaux cellulaires ont été colorés avec du 4′-6-diamidino-2-phénylindole (DAPI ; AAT Bioquest, Sunnyvale, CA). Des changements de fluorescence ont été observés avec un système d'imagerie au microscope spectral confocal laser CS SP5 (Leica, Teban Gardens, Singapour).
Coloration TUNEL
Les fragments d'ADN, qui peuvent être détectés par un test TUNEL, sont une caractéristique importante de l'apoptose. Nous avons utilisé un kit de détection de mort cellulaire in situ (n° de catalogue 11-684-817-910 ; Roche) pour mesurer la mort cellulaire programmée par apoptose RPE conformément au protocole du fabricant. En bref, nous avons fixé des cellules RPE avec du paraformaldéhyde à 4 % et marqué les cassures de brins d'ADN dans une réaction enzymatique pour détecter les cellules positives au TUNEL, qui présentaient une tache fluorescente verte. Les cellules colorées ont ensuite été scannées et analysées avec un système d'imagerie tissulaire FAXS-plus (TissueGnostics, Vienne, Autriche). Dix mille événements ont été comptés dans la région RPE fermée et nous avons analysé les images pour le nombre de cellules TUNEL-positives avec le logiciel TissueQuest/HistoQuest (TissueGnostics).
Expérimentation animale
Des rats mâles BN (300 à 350 g de poids corporel) ont été achetés au National Laboratory Animal Center (Taipei, Taiwan) et conservés pendant 2 à 3 mois. Les rats ont été maintenus dans un cycle lumière/obscurité 12-h/12-h à 26 ± 1 degré, un taux d'humidité relative de 35 à 47 % et un accès ad libitum à l'eau et à la nourriture. Les rats non traités ont été maintenus dans l'obscurité pour servir de témoins. Les protocoles d'étude ont été approuvés par l'Institutional Animal Care Use Committee de l'Université médicale de Taipei (numéro d'approbation : LAC-2016-0442). Toutes les procédures expérimentales impliquant l'utilisation d'animaux étaient conformes aux déclarations de l'Association pour la recherche en vision et en ophtalmologie pour l'utilisation d'animaux dans la recherche expérimentale en ophtalmologie et en vision.
Modèle de rat induit par la BLL de dégénérescence rétinienne
Nous avons utilisé un modèle périodique de dégénérescence rétinienne induit par l'exposition à long terme à la BLL, tel que décrit dans notre étude précédente [19]. En bref, les rats BN ont été divisés en trois groupes : un groupe témoin, qui a été maintenu dans des conditions sombres ; un groupe exposé à la BLL, qui a été exposé à la BLL périodique dans l'obscurité sans dilatation pupillaire (460 nm, 150 lux) pendant 3 h par jour pendant 60 jours ; et un groupe traité au CTE plus exposé au BLL, qui a été prétraité au CTE (100 mg/kg de poids corporel) pendant 14 jours, puis co-traité avec une exposition périodique au BLL pendant 3 h par jour pendant 60 jours. Tous les rats ont été remis dans les colonies animales et le cycle lumière/obscurité normal (250 lux, 12 h/12 h) a été repris à la fin de la période expérimentale.
analyses statistiques
Les différences significatives ont été calculées à l'aide d'une analyse de variance unidirectionnelle suivie du test post hoc de Tukey et d'un test de comparaisons multiples. La signification statistique a été déterminée par les valeurs p de<>
Produits Cistanche tubulosa
Résultats
Le CTE protège les cellules RPE des dommages causés par le stress oxydatif
Pour évaluer la cytotoxicité du CTE via le test MTT, plusieurs concentrations de CTE ({{{{20}}}}–500 ug/mL) ont été appliquées aux cellules RPE. Le traitement CTE n'a eu aucun effet toxique évident sur la viabilité des cellules RPE à aucune des concentrations testées (Fig. 1A). Par conséquent, 50 et 100 ug/mL de CTE ont été utilisés dans les expériences ultérieures. Pour étudier les effets anti-apoptotiques du CTE, différents inducteurs oxydatifs (H2O2, t-BHP et NaN3) ont été co-administrés avec le CTE aux cellules RPE pendant 24 h. H2O2, NaN3 et t-BHP ont diminué la viabilité cellulaire et endommagé les cellules RPE de manière dose-dépendante (barres barrées, Fig. 1B, 1C et 1D); la viabilité cellulaire était significativement plus faible dans les cellules traitées avec 0,03 mM H2O2, 0,3 mM NaN3 et 0,3 mM t-BHP que dans le groupe témoin.
Cependant, le co-traitement avec 50 et 100 ug/mL de CTE a atténué les dommages cellulaires RPE induits par H2O2-, NaN3- et t-BHP et a inversé la diminution de la viabilité cellulaire (barres noires, Fig. .1B, 1C et 1D). Les données ci-dessus suggèrent que le CTE sauve les cellules RPE des dommages causés par le stress oxydatif.
Le CTE inhibe la mort cellulaire RPE induite par la BLL
Dans notre étude précédente, nous avons constaté que BLL est cytotoxique pour les cellules RPE, ce qui était attribuable à des changements dans l'expression de Bcl-2 et Bax. Dans la présente étude, nous avons examiné plus en détail les effets protecteurs du CTE sur les dommages cellulaires RPE induits par BLL. Nous avons placé deux plaques de LED électriques bleues dans un incubateur de culture cellulaire. La distance entre la source lumineuse et les plaques cellulaires était de 25 cm et l'intensité BLL était de 60 lux, telle que mesurée par un luxmètre (Fig. 2A). Un test MTT a démontré que l'exposition à la BLL pendant différentes périodes (6 à 48 h) provoquait la mort des cellules RPE de manière dépendante du temps (Fig. 2B). Les réductions de la viabilité cellulaire induites par la BLL après 24 et 48 h ont été significativement atténuées lorsque les cellules ont été co-traitées avec du CTE (100 ug / ml) (Fig. 2C). Ces données suggèrent que le CTE protège les cellules RPE de la phototoxicité induite par BLL.
Le CTE inhibe l'apoptose induite par la BLL dans les cellules RPE en régulant les voies Bcl-2/Bax et Fas/FasL
Sur la base des effets protecteurs potentiels du CTE dans les cellules RPE, nous avons étudié plus avant l'implication possible du CTE dans ce processus. Deux voies de signalisation apoptotiques ont été examinées, à savoir les voies Bax/Bcl{{0}} et Fas/Fas ligand (FasL), et les protéines apparentées (par exemple, la pro-caspase-8 et la pro-caspase -3 ; figures 3A et 3B). Il a été constaté que l'exposition à BILL (6 à 48 h) régulait à la hausse l'expression protéique de Bax / Bcl -2, FasL et FADD de manière dépendante du temps (Fig. 3A). De plus, BLL a régulé à la baisse l'expression protéique de la procaspase-3 et de la procaspase-8, entraînant davantage de formes de clivage de caspase-3 et de caspase-8 après l'exposition à la BLL, ce qui est cohérent avec notre étude précédente [19]. Pour évaluer davantage les effets protecteurs du CTE, différentes concentrations de CTE ont été appliquées aux cellules RPE exposées à la BLL (Fig. 3B). Après 48-h d'exposition à la BLL, le CTE (50 µg/mL) a diminué le rapport Bax/Bcl-2. De plus, le CTE (100 µg/mL) a diminué l'expression protéique de FasL et FADD, mais a augmenté de manière significative les niveaux de procaspase-8 et de procaspase-3 (Fig. 3C et 3D). Des études ont montré que l'activation de la caspase-3 est un marqueur de l'apoptose dans les cellules RPE [20]. Pour confirmer davantage les effets protecteurs du CTE, nous avons effectué une coloration immunofluorescente de la caspase clivée-3. Il a été constaté qu'une exposition à BILL pendant 48 h induisait le clivage et la translocation de la caspase -3 dans le noyau, entraînant l'apoptose des cellules RPE (flèches jaunes, Fig. 4A). Cependant, lorsque les cellules exposées à la BLL ont été co-traitées avec du CTE (100 µg/mL), l'expression induite par la BLL de la caspase clivée -3 a été inhibée. Pour mieux comprendre les effets anti-apoptotiques du CTE, nous avons utilisé la coloration TUNEL pour détecter des fragments d'ADN dans les cellules RPE. Après 48-h d'exposition à la BLL, les cellules positives au TUNEL sont passées de 1,78 ± 0,36 % à 23,82 ± 0,33 % ; cet effet a été atténué par le co-traitement avec le CTE (23,82 ± 0,33 % à 2,22 ± 0,11 % ; Fig. 4B, 4C et 4D). Ces résultats indiquent que le traitement CTE protège fortement les cellules RPE de l'apoptose induite par BLL en médiant les voies Bax/Bcl-2 et FasL/FADD.
Le CTE inhibe la phosphorylation induite par la BLL des protéines de réponse au stress dans les cellules RPE
Des études antérieures ont démontré que les voies MAPK, telles que ERK, JNK et p38 MAP, sont activées dans les cellules RPE et dans la rétine après exposition à la lumière ultraviolette ou BL [21, 22]. Par conséquent, pour étudier les effets régulateurs du CTE sur la voie de réponse au stress MAPK après l'exposition à la BLL, 100 µg/mL de CTE ont été appliqués aux cellules RPE sous différents temps d'exposition à la BLL (Fig. 5A). L'analyse par Western blot a indiqué que les ERK, JNK et p38 phosphorylés étaient activés lors de l'exposition à la BLL, mais significativement inhibés lors du co-traitement avec le CTE dans les cellules RPE (Fig. 5B). Les résultats ci-dessus indiquent que le CTE inhibe les dommages cellulaires RPE induits par BLL, qui pourraient être associés à l'inhibition de MAPK dans les cellules RPE.
Le CTE sauve les dommages rétiniens induits par la BLL après une exposition périodique à long terme dans un modèle de rat
Pour évaluer les effets protecteurs du CTE, nous avons exposé des rats BN à une exposition à long terme à la BLL pendant 60 jours et évalué les effets du CTE. Comme le montre le schéma présenté à la Fig. 6A, les rats BN ont été divisés en trois groupes : groupe témoin, groupe exposé à la BLL et groupe CTE plus BLL (Fig. 6A). Dans le groupe CTE plus BLL, les rats BN ont été continuellement supplémentés en CTE (100 mg/kg de poids corporel) par gavage oral une fois par jour pendant 14 jours avant l'exposition à la BLL. Au jour 0, des rats BN ont été co-traités avec du CTE (100 mg/kg de poids corporel) et exposés à du BLL pendant 3 h par jour pendant 60 jours. Après 60 jours d'exposition à la BLL, les animaux ont été sacrifiés pour une analyse Western blot et une coloration immunohistochimique. Dans le groupe CTE plus BLL, l'expression de la protéine procaspase -3 dans les homogénats d'œil de rat était plus élevée après le traitement CTE que dans le groupe BLL (Fig. 6B et 6C). Ces données illustrent que la CTE prévient la phototoxicité rétinienne et l'apoptose induites par la BLL à faible luminance à long terme en inhibant l'activation de la caspase clivée-3. La coloration immunohistochimique a fourni plus de preuves concernant les effets protecteurs du CTE sur la structure et les voies physiologiques de la rétine (Fig. 7). De plus, après l'exposition à la BLL, nous avons constaté que la couche neuronale interne était diminuée et avons observé des déformations morphologiques au niveau de la couche neuronale externe (ONL), y compris le segment interne/segment externe dans la rétine centrale et périphérique, ce qui est cohérent avec notre étude précédente ( figure 7B). Fait important, le CTE a empêché la déformation des cellules RPE, les dommages aux cellules neuronales et l'amincissement global de la rétine dans le groupe CTE plus BLL (Fig. 7C). De plus, nous n'avons pas observé de cellules TUNEL-positives dans la rétine centrale et périphérique de rats normaux (Fig. 8Ab et 8Bb). Inversement, après une exposition à la BLL pendant 60 jours, des cellules TUNEL-positives ont été fréquemment détectées dans l'ONL de la rétine centrale et périphérique (Fig. 8Ae et 8Be). La coloration DAPI de l'ONL de la rétine centrale a été nettement diminuée dans le groupe BLL (Fig. 8Ad). Cependant, la présence de cellules TUNEL-positives a été atténuée et la coloration au DAPI de la rétine centrale et périphérique ONL a été augmentée dans le groupe CTE plus BLL (Fig. 8Ai et 8Bi).
Produits Cistanche tubulosa
