Marqueurs de qualité de Cistanches Herba basés sur la relation spectre-effet antioxydant Ⅱ

3. Résultats

3.1 Etablissement de la carte d'empreintes digitales

Préparez 10 lots de solutions d'essai selon la méthode indiquée en 2.1, utilisez les conditions chromatographiques indiquées en 2.2 pour la détection, obtenez les empreintes digitales de chaque lot d'échantillons (Figure 1) et sélectionnez le pic n° 11 (C11) comme pic de référence du empreinte digitale. Importez les données en phase liquide. Fichier AIA de l'empreinte digitale du produit de test Cistanche deserticola dans le logiciel « Système d'évaluation de similarité d'empreintes digitales chromatographiques de médecine traditionnelle chinoise » (version 2012). Dix-sept pics chromatographiques communs ont été calibrés en mode commun et comparés au spectre standard de référence mixte (Figure 2), un total de 10 pics communs ont été identifiés.

3.2 Recherche sur l'effet antioxydant de Cistanche deserticola

3.2.1 Effet de Cistanche deserticola sur la viabilité des cellules HEK 293.

Comparé aux cellules du groupe normal, Cistanche deserticola n'a pas produit de cytotoxicité à une concentration massique de 50 à 100 ug·mL-1, et les taux de survie cellulaire étaient supérieurs à 90 %. À mesure que la concentration de Cistanche deserticola augmentait, la viabilité cellulaire diminuait. Par conséquent, Cistanche deserticola avec une concentration massique de 100 µg·mL–1 a été sélectionnée pour une administration ultérieure.

3.2.2 Effet de Cistanche deserticola sur les ROS induites par H2O2 dans les cellules HEK 293

La ROS IC50 de Cistanche deserticola à différentes concentrations a été calculée à l'aide du logiciel GraphPad Prism 8. Les résultats sont présentés dans la figure 3 et le tableau 2.

Pour plus de connaissances sur la cistanche, voyons comment distinguer la qualité de la cistanche. La qualité du cistanche dépend de la teneur en principes actifs échinacoside et actéoside, la teneur plus élevée signifie une fonction plus forte, aujourd'hui nous prenons comme exemple des suppléments de cistanche à 30 % d'échinacoside et 12 % d'actéoside pour nous donner une explication, généralement appelés cistanche dans cet article.

COMBIEN DE TEMPS FAUT-IL POUR CISTANCHE FONCTIONNE?

3.2.3 Effet de Cistanche deserticola sur la SOD induite par H2O2- des cellules HEK 293

Comme le montre la figure 4, par rapport au groupe normal, l'activité SOD dans les cellules du groupe modèle a été significativement réduite et l'activité SOD du groupe d'administration de Cistanche deserticola a augmenté à des degrés divers (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Effet de Cistanche deserticola sur la CAT induite par H2O2- dans les cellules HEK 293

Comme le montre la figure 5, H2O2 peut provoquer une diminution significative de l'activité enzymatique intracellulaire CAT (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Criblage du marqueur Q de Cistanche deserticola basé sur une analyse de corrélation d'efficacité spectrale

3.3.1 L'ACP utilise la valeur propre > 1 et le taux de contribution de la variance cumulée > 85 % comme norme pour extraire 4 composantes principales. Le tracé des éboulis (figure 6) des trois premières composantes principales présente une courbe plus raide, ce qui signifie que son taux de cotisation est plus élevé. grand. Le taux de contribution à la variance cumulée des quatre composantes principales est de 87,640 %, ce qui indique que ces quatre composantes principales peuvent représenter 87,640 % de l'information des variables d'origine. Les valeurs propres initiales et les taux de contribution à la variance sont présentés dans le tableau 3. La matrice des composants pivotés est obtenue par la méthode de variance maximale de normalisation Kaiser, voir le tableau 4. En fonction de la valeur de chargement de chaque pic chromatographique sur les quatre composants principaux, les informations reflétées par chacun Le composant principal peut être extrait. Autrement dit, plus la valeur de charge est élevée, plus l'influence du pic chromatographique sur le composant principal est grande. Dans la composante principale 1, les pics 1 à 3, 5, 7, 11 et 13 à 15 ont les charges absolues les plus importantes ; dans la composante principale 2, les pics 6 et 16 ont les charges absolues les plus importantes ; le pic 17 explique les informations du composant principal 3, le pic 8 a le plus grand impact sur le composant principal 4, donc les 13 composants chimiques des pics 1~3, 5~8, 11, 13~17 ont été sélectionnés comme base matérielle principale du Cistanche deserticola pour une analyse ultérieure de l’efficacité spectrale.

3.3.2 CCP

ROS IC50 est un indicateur négatif de l’efficacité du médicament, donc un coefficient de corrélation négatif signifie que la variable dépendante est positivement corrélée à l’efficacité du médicament. Les coefficients de corrélation des 13 pics chromatographiques de Cistanche deserticola sont tous négatifs, ce qui indique qu'ils sont tous positivement liés à l'élimination du ROS IC50, parmi lesquels les pics 14 et 3, 7, 11, 1 et 13 étaient extrêmement fortement corrélés avec ROSIC50. (P.<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

En combinant les résultats PCC de ROS IC50, SOD et CAT, les pics 1~3, 5, 7, 11 et 13~15 ont été sélectionnés comme groupe d'ingrédients actifs pour Cistanche deserticola afin d'exercer des effets antioxydants.

3.3.3 SVP

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 sont : 5, 13, 14, 11, 7 (Fig. 7C). Les composés représentés par les pics 1 à 3, 5, 7, 11 et 13 à 15 ont été éliminés en tant que composants actifs antioxydants potentiels dans le modèle PLS.

3.4 Vérification de l'activité du marqueur Q de Cistanche deserticola

3.4.1 Effet des principes actifs sur la cytotoxicité de HEK 293

Sur la base des résultats de l'analyse de corrélation spectre-effet, 6 ingrédients, dont l'acide génipinique, l'acide 8-épistrychnoïque, l'échinacéoside, le verbascoside, l'anthocynoside A et l'isorbascoside, ont été sélectionnés pour la vérification de l'activité. Les six ingrédients actifs de Cistanche deserticola n'ont montré aucune cytotoxicité à des concentrations allant de 0,781 à 3,125 µmol·mL–1, et les taux de survie cellulaire étaient tous supérieurs à 90 %. À mesure que la concentration augmente, la viabilité cellulaire est inhibée. Par conséquent, les concentrations de dosage suivantes ont été sélectionnées comme étant 0,781, 1,563 et 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Paires d'ingrédients actifs

L'effet antioxydant des cellules HEK 293 induites par H2O2-a été vérifié en détectant l'effet piégeur de chaque ingrédient actif sur les ROS intracellulaires et la capacité à réguler l'activité des enzymes SOD et CAT pour vérifier s'il a un effet antioxydant. Dans l'expérience de piégeage des ROS, les différences entre les groupes d'acide génipinique à dose moyenne et élevée et le groupe modèle étaient statistiquement significatives (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.